1、实验七 维生素C的定量测定-2，6-二氯酚靛酚法,一、实验目的 二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂 四、实验操作 五、思考题,一、实验目的,从食品原料等提取维生素C、脱色2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定、计算,二、实验原理,染料2,6二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。,当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染
2、料，使滴定液呈淡红色，即为终点。,VC 还原型,脱氢VC 氧化型,2,6-二氯酚靛酚 氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色),2,6-二氯酚靛酚 还原型(无色),三、器材仪器和主要试剂,偏磷酸:2%溶液(W/V)* , 盐酸:2%溶液(W/V) 抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml):称取50mg(准确至0.1mg)抗坏血酸,溶于浸提剂 中并稀至250ml。现配现用。 2,6二氯靛酚(2,6二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中,然后称取2,6二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至 250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定
3、其滴定度。,标定,吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2 ,6二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。 滴定度(mg/ml)cv/V1V2 s每毫升2,6二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数; C抗坏血酸的浓度,mg/ml; V吸取抗坏血酸的体积, ml; V1滴定抗坏血酸溶液所用2,6二氯靛酚溶液的体积,ml; V2滴定空白所用2,6二氯靛酚溶液的体积,ml。 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。 本实验结果为:0.088 mg/ml,四、实验操作,1、提取: 桔子肉10克(猕猴桃或枣5克)于研钵 加2%H
4、Cl约10ml 充分研磨 提取液通过两层纱布滤入50ml容量瓶2%HCl定容到50ml 。 2、脱色:液干燥锥形瓶 加白陶土一匙(用于吸附生物样品中的色素 )充分振摇（约10分钟）过滤 脱色滤液。 3、滴定: 1）样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml，用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染液毫升数（滴定过程宜迅速，不超过2分钟），取其平均值-VA； 2）空白滴定用10ml 2%HCl代替脱色滤液，2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下滴定所用的染液毫升数-VB；,计算,维生素（mg/100g）样品（VA-VB） SV100/WD式中：VA：滴定样品用去2,6-二氯酚靛酚钠的平均ml数VB：滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚钠的ml数S：每毫升2,6-二氯酚靛酚钠溶液相当于维生素的mg数V：样品提取液总毫升（定容后的ml数,50或100 ml ）D：滴定时所取的样品提取液ml数(10 ml)W：样品的重量（g）,五、思考题,1、指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？ 2、简述维生素C的生理意义。,
