1、2013-11-171一、水分的测定 GB5009.32010第一法 直接干燥法 2 原理 利用食品中水分的物理性质，在 101.3 kPa（一个大气压） ，温度 101 105 下采用挥发方法测定样品中干燥减失的重量，包括吸湿水、部分结晶水和该条件下能挥发的物质，再通过干燥前后的称量数值计算出水分的含量。3 试剂和材料 除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。 3.1 盐酸：优级纯。 3.2 氢氧化钠（NaOH）：优级纯。 3.3 盐酸溶液（6 mol/L）：量取 50 mL盐酸，加水稀释至 100 mL。 3.4 氢氧化钠溶液（6mol/L）：称取 24 g氢氧化钠，加水溶解并稀释至 1
2、00 mL。3.5 海砂：取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用盐酸（3.3 中 1:1盐酸）煮沸0.5 h，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液（3.4 中 NaoH）煮沸 0.5 h，用水洗至中性，经 105 干燥备用。 4 仪器和设备 4.1 玻璃制称量瓶。 4.2 电热恒温干燥箱。4.3 干燥器：内附有效干燥剂。 4.4 天平：感量为 0.1 mg。 5 分析步骤 5.1 固体试样：取洁净铝制或玻璃制的扁形称量瓶，置于 101 105 干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热 1.0 h，取出盖好，置干燥器内冷却 0.5 h，称量，并重复干燥至前后两次质量差不超过 2 mg，即为恒重。将混合均匀的试样迅速磨
3、细至颗粒小于 2 mm，不易研磨的样品应尽可能切碎，称取 2 g10 g试样（精确至 0.0001 g） ，放入此称量瓶中，试样厚度不超过 5 mm，如为疏松试样，厚度不超过 10 mm，加盖，精密称量后，置 101 105 干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥 2 h4 h 后，盖好取出，放入干燥器内冷却 0.5 h后称量。然后再放入 101 105 干燥箱中干燥 1 h左右，取出，放入干燥器内冷却0.5 h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过 2 mg，即为恒重。 注：两次恒重值在最后计算中，取最后一次的称量值。 5.2 半固体或液体试样：取洁净的称量瓶，内加 10 g海砂及一根小玻棒
4、，置于 101 105 干燥箱中，干燥 1.0 h后取出，放入干燥器内冷却 0.5 h后称量，并重复干燥至恒重。然后称取 5 g10 g试样（精确至 0.0001 g） ，置于蒸发皿中，用小玻棒搅匀放在沸水浴上蒸干，并随时搅拌，擦去皿底的水滴，置 101 105 干燥箱中干燥 4 h后盖好取出，放入干燥器内冷却 0.5 h后称量。以下按 5.1自“然后再放入 101 105 干燥箱中干燥 1 h左右”起依法操作。6 分析结果的表述 试样中的水分的含量按式（1）进行计算。 2013-11-172X= 100312m式中： X 试样中水分的含量，单位为克每百克（g/100g)； m1 称量瓶(加海
5、砂、玻棒)和试样的质量，单位为克（g） ； m2 称量瓶(加海砂、玻棒)和试样干燥后的质量，单位为克（g） ； m3 称量瓶(加海砂、玻棒)的质量，单位为克（g） 。 水分含量1 g/100 g时，计算结果保留三位有效数字；水分含量1 g/100 g时，结果保留两位有效数字。 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 5 %。二、灰分的测定 GB5009.420101 范围 本标准规定了食品中灰分的测定方法。 本标准适用于除淀粉及其衍生物之外的食品中灰分含量的测定。 2 原理 食品经灼烧后所残留的无机物质称为灰分。灰分数值系用灼烧、称重后计算得出。 3 试
6、剂和材料 3.1 乙酸镁（CH3COO）2Mg4H2O）：分析纯。 3.2 乙酸镁溶液（80 g/L）：称取 8.0 g 乙酸镁（3.1）加水溶解并定容至 100 mL，混匀。 3.3 乙酸镁溶液（240 g/L）：称取 24.0 g 乙酸镁（3.1）加水溶解并定容至 100 mL，混匀。3.4 1:4盐酸溶液(煮坩埚，可以不用此步骤)，三氯化铁与蓝墨水的混合液（标记用） 4 仪器和设备 4.1 马弗炉：温度600 。 4.2 天平：感量为 0.1 mg。 4.3 石英坩埚或瓷坩埚。 4.4 干燥器（内有干燥剂） 。 4.5 电热板（电炉子） 。 4.6 水浴锅。4.7 长柄坩埚钳。4.8 手
7、套。5 分析步骤 5.1 坩埚的灼烧：取大小适宜的石英坩埚或瓷坩埚置马弗炉中，在 550 25 下灼烧 0.5h，冷却至 200 左右，取出，放入干燥器中冷却 30 min，准确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过 0.5 mg 为恒重。 5.2 称样：灰分大于 10 g/100 g 的试样称取 2 g3 g（精确至 0.0001 g） ；灰分小于 10 g/100 g 的试样称取 3 g10 g（精确至 0.0001 g） 。2013-11-173注意：可用测定水分之后的样品测灰分，富含脂肪的样品应先提取脂肪后再测灰分。 5.3 测定 5.3.1 一般食品 液体和半固体试样应先在沸水浴上蒸
8、干。固体或蒸干后的试样，先在电热板上以小火加热使试样充分炭化至无烟，然后置于马弗炉中，在 550 25 灼烧 4 h。冷却至 200 左右，取出，放入干燥器中冷却 30 min，称量前如发现灼烧残渣有炭粒时，应向试样中滴入少许水湿润，使结块松散，蒸干水分再次灼烧至无炭粒即表示灰化完全，方可称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过 0.5 mg 为恒重。按式（X1）计算。5.3.2 含磷量较高的豆类及其制品、肉禽制品、蛋制品、水产品、乳及乳制品 5.3.2.1 称取试样后, 加入 1.00 mL 乙酸镁溶液（3.3）或 3.00 mL 乙酸镁溶液（3.2） ，使试样完全润湿。放置 10 min 后
9、，在水浴上将水分蒸干，以下步骤按 5.3.1自“先在电热板上以小火加热”起操作。按式（X2）计算。5.3.2.2 吸取 3 份与 5.3.2.1 相同浓度和体积的乙酸镁溶液，做 3 次试剂空白试验。当 3 次试验结果的标准偏差小于 0.003 g 时， 取算术平均值作为空白值。若标准偏差超过 0.003 g 时，应重新做空白值试验。 6 分析结果的表述 试样中灰分按式(1)、(2)计算式中： X 1（测定时未加乙酸镁溶液）试样中灰分的含量，单位为克每百克（g/100 g） ； X2 （测定时加入乙酸镁溶液）试样中灰分的含量，单位为克每百克（g/100 g） ； m 0 氧化镁(乙酸镁灼烧后生成
10、物)的质量，单位为克（g） ； m 1坩埚和灰分的质量，单位为克（g） ； m 2坩埚的质量，单位为克（g） ； m3 坩埚和试样的质量，单位为克（g） 。 试样中灰分含量10 g/100 g时，保留三位有效数字；试样中灰分含量10 g/100 g时，保留二位有效数字。 7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 5 %。 2013-11-174三、食品中（粗）脂肪的测定 GB/T 5009.620031.范围本标准适用于肉制品、豆制品、坚果制品、谷物油炸制品、糕点等食品中粗脂肪的测定，不适用于乳及乳制品。2.原理试样经干燥后用无水乙醚或石油醚提取，出去溶剂，所
11、得残留即为粗脂肪。3.试剂无水乙醚（分析纯，不含过氧化物）石油醚（分析纯，沸程 30-60摄氏度）海砂取用水洗去泥土的海砂或河砂，先用盐酸（1:1 盐酸）煮沸 0.5 h，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液（240g/L）煮沸 0.5 h，用水洗至中性，经 105 干燥备用。：4.仪器设备索氏提取器、烘箱、分析天平（感量 0.1mg） 、称量皿、脱脂滤纸、脱脂棉花5、分析步骤51.试样的制备固体样品：谷物或干燥制品用粉粹机粉碎过 40目筛，称取 2.00-5.00g(可用测定水分后的样品)，必要时拌入海砂，全部移入滤纸筒内。5.2抽提将滤纸筒放入抽提器的抽提桶内，连接已干燥至恒重的接收瓶，由冷凝管
12、上端加入无水乙醚或石油醚至三分之二处，于水浴上加热，使溶剂以 6-8次/h 回流，一般抽提 6-12小时。5.3称量取下接收瓶，回收溶剂，待接受瓶内溶剂剩余 1-2ml时在水浴上蒸干，再与100摄氏度左右 5度干燥两小时，放干燥器内冷却 0.5h后称量，直至恒重。6.结果计算式中：X试样中粗脂肪的含量， （g/100g）m 0接收瓶的质量，单位 gm 1接收瓶和粗脂肪的质量，gm 2试样的质量（如果是测定水分后的试样，则按测定水分前的质量计）g；计算结果表示到小数点后一位.7、精密度在重复条件下测得两次独立测定结果的绝对值不超过算术平均值的 10%。四粗蛋白的测定 GB5009.5201020
13、13-11-175第一法 凯氏定氮法3 原理 食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。4 试剂和材料 除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的三级水。4.1 硫酸铜（CuSO45H2O） 。 4.2 硫酸钾（K2SO4） 。 4.3 硫酸（H2SO4 密度为 1.84g/L） 。 4.4 硼酸（H3BO3） 。 4.5 甲基红指示剂（C15H15N3O2） 。 4.6 溴甲酚绿指示剂（C21H14Br4O5S） 。 4.7 亚甲
14、基蓝指示剂（C16H18ClN3S3H2O） 。 4.8 氢氧化钠（NaOH） 。 4.9 95%乙醇（C2H5OH） 。 4.10 硼酸溶液（ 20 g/L）：称取 20 g 硼酸，加水溶解后并稀释至 1000 mL。4.11 氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取 40 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至 100 mL。 4.12硫酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L）或盐酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L） 。 4.13甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取 0.1g 甲基红，溶于 95%乙醇，用 95%乙醇稀释至 100 mL。 4.14 亚甲基蓝乙醇溶液（ 1 g/L）：称取
15、 0.1g 亚甲基蓝，溶于 95%乙醇，用 95%乙醇稀释至 100 mL。 4.15 溴甲酚绿乙醇溶液（ 1 g/L）：称取 0.1g 溴甲酚绿，溶于 95%乙醇，用 95%乙醇稀释至 100 mL。 4.16 混合指示液：2 份甲基红乙醇溶液（4.13）与 1 份亚甲基蓝乙醇溶液（4.14）临用时混合。也可用 1 份甲基红乙醇溶液（ 4.13）与 5 份溴甲酚绿乙醇溶液（4.15）临用时混合。 5 仪器和设备 5.1 天平：感量为 1mg。 5.2 定氮蒸馏装置：如图 1所示。1电炉；2水蒸气发生器（2 L 烧瓶） ；3螺旋夹；4小玻杯及棒状玻塞；5反应室；6反应室外层；7橡皮管及螺旋夹；
16、8冷凝管； 9蒸馏液接收瓶。 5.3 自动凯氏定氮仪。 6 分析步骤 6.1 凯氏定氮法6.1.1 试样处理：称取充分混匀的固体试样 0.2 g2 g、半固体试样 2 g5 g或液体试样 10 g25 g（约相当于 30 mg40 mg 氮） ，精确至 0.001 g，移入干燥的 100 mL、250 mL 或 500 mL 定氮瓶中，加入 0.2 g 硫酸铜2013-11-176（4.1） 、6 g 硫酸钾（4.2）及 20 mL 硫酸（4.3） ，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以 45角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈
17、蓝绿色并澄清透明后，再继续加热 0.5 h1 h。取下放冷，小心加入 20 mL 水。放冷后，移入 100 mL 容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。 6.1.2 测定：按图 1 装好定氮蒸馏装置，向水蒸气发生器内装水至 2/3 处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液（4.13）数滴及数毫升硫酸（4.3） ，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。 6.1.3 向接收瓶内加入 10.0 mL 硼酸溶液(4.10)及 1 滴2 滴混合指示液（4.16） ，并使冷凝管的下端插入液面下， 根据试样中氮含量， 准确吸取 2.0 mL1
18、0.0 mL 试样处理液由小玻杯注入反应室， 以 10 mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将 10.0 mL 氢氧化钠溶液(4.11) 倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏 10 min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏 1 min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部， 取下蒸馏液接收瓶。 以硫酸或盐酸标准滴定溶液(4.12)滴定至终点， 其中 2 份甲基红乙醇溶液(4.13)与 1 份亚甲基蓝乙醇溶液(4.14)指示剂，颜色由紫红色变成灰色，pH 5.4；1 份甲基红乙醇溶液(4.13) 与 5
19、 份溴甲酚绿乙醇溶液(4.15)指示剂，颜色由酒红色变成绿色，pH 5.1。同时作试剂空白。 6.2 自动凯氏定氮仪法 称取固体试样 0.2 g2 g、 半固体试样 2 g5 g或液体试样 10 g25 g （约相当于 30 mg40 mg氮） ，精确至 0.001 g。按照仪器说明书的要求进行检测。 7 分析结果的表述 试样中蛋白质的含量按式（1）进行计算。式中： X试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100 g） ； V1试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL） ； V2试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL） ； V3吸取消化液的体积，单位为毫升（mL
20、） ； c硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L） ； 0.01401.0 mL 硫酸c (1/2H2SO4)1.000 mol/L或盐酸c (HCl) 1.000 mol/L标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g） ； m试样的质量，单位为克（g） ； F氮换算为蛋白质的系数。一般食物为 6.25；纯乳与纯乳制品为 6.38；面粉为 5梁为 6.24；花生为 5.46；大米为 5.95；大豆及其粗加工制品为 2013-11-1775.71；大豆蛋白制品为 6.25；.70；玉米、高肉与肉制品为 6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为 5.83；芝麻、向日葵为 5.30；复合配方
21、食品为 6.25。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量1 g/100 g 时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量1 g/100 g 时，结果保留两位有效数字。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 %。五、食品中总酸的测定 GB/T1245620081.主题内容与适用范围本标准规定了使用酸碱滴定的指示剂法测定食品中总酸的方法。本标准的指示剂法适用于果蔬制品、饮料、乳制品、酒、蜂产品、淀粉制品、谷物制品和调味品等食品中总酸的测定，不适用于深色或浑浊度大的食品；酸碱滴定法不适用于有颜色或浑浊不透明的试液。2.试剂2.1 0.01
22、mol/L氢氧化钠标准滴定溶液量取 100mL0.01mol/L氢氧化钠标准滴定溶液稀释到 1000mL（用时当天稀释）2.2 0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液量取 100mL0.01mol/L氢氧化钠标准滴定溶液稀释到 200mL（用时当天稀释）2.3 1%的酚酞溶液称取 1g酚酞，溶于 60mL95%乙醇中，用水稀释至 100mL。3.仪器3.1 组织捣碎机3.2水浴锅3.3研钵3.4冷凝管4.试样的制备固体样品;取有代表性的样品至少 200g，置于研钵或组织捣碎机中，加入与样品等量的煮沸过的水，用研钵研碎，或用组织捣碎机捣碎，混匀后置于密闭玻璃容器内。5.试液的制备5.1总算含量小
23、于或等于 4g/kg的试样，用快速滤纸过滤，滤液用于测定。5.2总算含量大于 4g/kg的试样，称取 10-50g试样，精确值 0.001g，置于100mL烧杯中。用约 80度煮沸过的水将烧杯中的内容物转移至 250mL容量瓶，置于沸水浴中煮沸约 30分钟（振摇 2-3次，使有机酸全部溶解） ，取出，冷却至室温，用煮沸过的水定容至 250mL。用快速滤纸过滤，收集滤液，用于测定。6步骤称取 25.000-50.000g试液，使之含有 0.035-0.070g酸，置于 250mL三角瓶中。2013-11-178加入 40-60ML水，0.2mL1%酚酞指示剂，用 0.1mol/L氢氧化钠标准滴定
24、溶液至微红色 30S不变色。记录消耗氢氧化钠体积。V1同时用水代替试液，做空白，记录消耗氢氧化钠体积。V27、结果计算食品中总酸含量以质量分数 X计（g/kg）X= mfkvc10*)21(*c-标准氢氧化钠准确浓度，mol/Lv1-滴定时消耗标准氢氧化钠溶液体积，mLv2-空白试验时消耗标准氢氧化钠溶液体积，mLk-酸的换算系数f-试样的稀释倍数m-试样的质量数值，g.同一样品，两次测定结果，不超过两次测定平均值的 2%。六、 总糖和还原糖的测定1、试剂：a、 浓盐酸（取 250ml 浓 HCl（35%38%）用蒸馏水稀释到 500ml。 ）b、氢氧化钠溶液（0.3g/ml）6N NaOH：
25、称取 120gNaOH 溶于 500ml 蒸馏水中。c、甲基红指示剂 (0.1%)d、斐林氏试剂：碱性酒石酸铜甲液：称取 15g 硫酸铜（化学纯）及 0.05g 次甲基蓝，溶于水中，并稀释至 1000ml碱性酒石酸铜乙液：称取 50g 酒石酸钾钠（化学纯）及 75g 氢氧化钠（化学纯）溶于水中，再加入 4g 亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至 1000ml，贮于橡皮塞玻璃瓶中。e、0.1%葡萄糖标准溶液：准确称取 1.000g 经 98 100干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入 1000ml 容量瓶中，加入 5ml 浓 HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到 1000ml。f、碘碘化
26、钾溶液：称取 5g 碘，10g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水中。2、器材：水浴锅、电炉、锥形瓶、碱式滴定管、容量瓶、烧杯3、材料：桑叶粉操作方法2013-11-179一、样品中还原糖的提取准确称取 2g 桑叶粉，放在 100ml 烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入 50ml 蒸馏水，混匀，于 50恒温水浴中保温 20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在 100ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。二、样品中总糖的水解及提取准确称取 1g 桑叶粉，放在锥形瓶中，加入 6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热 0.5h，取出 12
27、 滴置于白瓷板上，加 1 滴 I-KI 溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1 滴酚酞指示剂，以 6N NaOH 溶液中和至溶液呈微红色，并定容到 100ml，过滤取滤液 10ml 于 100ml 容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释 1000 倍的总糖水解液，用于总糖测定。三、碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各 5.00ml，置于 250ml 锥形瓶中，加蒸馏水 10ml，加玻璃珠 3 粒。从滴定管滴加约 9ml 葡萄糖标准溶液，加热使其在2min 内沸腾，准确沸腾 30s，趁热以每 2s 1 滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液
28、蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3 次，取其平均值，按下式计算： FCV式中：F10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，mg；C葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml；V标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积， ml。四、样品糖的定量测定(1) 样品溶液预测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各 5.00ml，置于 250ml锥形瓶中，加蒸馏水 10ml，加玻璃珠 3 粒，加热使其在 2min 内沸腾，准确沸腾 30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每 2s 1 滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶
29、液消耗的体积。(2) 样品溶液测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各 5.00ml，置于锥形瓶中，加蒸馏水 10ml，加玻璃珠 3 粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少 1ml 的样品溶液，加热使其在 2min 内沸腾，准确沸腾 30s，趁热以每2s 1 滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作 3 次，取其平均值。五、结果处理 1%0FVm还 原 糖 （ 以 葡 萄 糖 计 ） 总 糖 （ 以 葡 萄 糖 计 ） 其中：m 样品重量，g；式中：F10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，mg；V标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积，ml
30、V1还原糖或总糖样品溶液的总体积，ml；1000mg 换算成 g 的系数。2013-11-1710七、粗纤维的测定1、试剂a、1.25硫酸；b、1.25氢氧化钾溶液；c、石棉：加 5氢氧化钠溶液浸泡石棉，在水浴上回流 8 小时以上再用热水充分洗涤。然后用 20盐酸在沸水浴上回流 8 小时，再用热水充分洗涤，干燥。在 600-700中灼烧后，加水使成混悬物，贮存于玻塞瓶中。d、甲基红指示剂2、器材：分析天平、亚麻布、垂融坩埚、水浴锅3、材料：桑叶粉操作方法1、称取 20-30 克捣碎的样品 (或 50 克干样品)，移入 500 毫升锥形瓶中，加入 200 毫升煮沸的 1.25硫酸，加热使微沸，保
31、持体积恒定，维持 30 分钟，每隔 5 分钟摇动锥形瓶一次，以充分混合瓶内的物质。2、取下锥形瓶，立即用亚麻布过滤后，用沸水洗涤至洗液不呈酸性（以甲基红为指示剂） 。3、再用 200 毫升煮沸的 1.25氢氧化钾溶液，将亚麻布上的存留物洗入原锥形瓶内加热微沸 30 分钟后，取下锥形瓶，立即以亚麻布过滤，以沸水洗涤 23 次后不呈碱性（以酚酞红为指示剂） ，用水将亚麻布上的残留物洗入 100ml 烧杯中，然后转移到已干燥称量的 G2垂融坩埚或同型号的垂融漏斗中，抽滤，用热水充分洗涤后，抽干。再依次用乙醇和乙醚洗涤一次将坩埚和内容物在105烘箱中烘干后称量，重复操作，直至恒重。如样品中含有较多的不
32、溶性杂质，则可将样品移入石棉坩埚，烘干称量后，再移入 550高温炉中灰化，使含碳的物质全部灰化，置于干燥器内，冷却至室温称量，所损失的量即为粗纤维量。计算： X= mG102013-11-1711X：样品中含粗纤维的含量，；G：残余物的质量(或经高温炉损失的质量)，g；m：样品的质量，g八、 维生素 C的测定1、 试剂：a、乙酸溶液（ 2mol/l）：吸取 11.6ml 冰乙酸，加水稀释至 100ml。b、乙酸溶液（0.5mol/l）：吸取 2.9ml 冰乙酸，加水稀释至 100ml。c、乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/l）：称取 9.3g 乙二胺四乙酸二钠于水中，加热使之溶解后，冷却，
33、并稀释至 100ml。d、蛋白沉淀剂乙酸锌溶液（220g/l）：称取 22.0g 乙酸锌，加 3ml 冰乙酸溶于水，并稀释至100ml。亚铁氰化钾溶液（106g/l）：称取 10.6g 亚铁氰化钾，加水溶解至 100ml。e、显色剂：固蓝盐 B 溶液（2g/l）：准确称取 0.2g 固蓝盐 B，加水溶解于100ml 棕色容量瓶中，并稀释至刻度。f、抗坏血酸标准储备溶液（2.0g/l）：精密称取 0.2000g 抗坏血酸，加 20ml 乙酸溶液（2mol/l）溶解后移入 100ml 棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于 2.0mg 抗坏血酸（10下冰箱内储存在 2d内稳定）g、
34、抗坏血酸标准使用液（0.1g/l）：用移液管精密吸取 5.0ml 抗坏血酸储备溶液（2.0g/l）于 100ml 棕色容量瓶中，加 5ml 乙酸溶液（2mol/l） ，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于 100ug 抗坏血酸（临用时配制） 。2、器材：分光光度计、离心沉淀机、10ml 具塞玻璃比色管操作方法1、样品预处理（非蛋白性食品）：准确称取 1.0-5.0g，精确至 0.001g（含0.2g/kg 以下抗坏血酸）放入乳钵中，加 5ml 乙酸溶液（2mol/l）研磨溶解后，移入 100ml 棕色容量瓶中，加水稀释至刻度。样品预处理（蛋白性食品）：固体试样混匀后精密称取 5.0g-10
35、.0g，精确至 0.001g；加 10ml 乙酸溶液（2mol/l） 、乙酸锌溶液（220g/l）和亚铁氰化钾溶液（106g/l）各 7.5ml，加水至刻度，混匀。将全部溶液移入离心管内，以 3000r/min 离心 10min，上清液供测定。同时取与处理试样相同的乙酸溶液、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液，按同一方法做试剂空白试验。2、标准曲线的绘制精密吸取 0，0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.5, 2.0ml 抗坏血酸标准使用液（相当于抗坏血酸 0, 10.0, 20.0，40.0，60.0，80.0, 100.0，150.0，200.0ug） ，分别置于 10m
36、l 比色管中，各加 0.3ml 乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/l） 、0.5ml 乙酸溶液（0.5mol/l） 、1.25ml 固蓝盐 B 溶液（2g/l） ，加水稀释至刻度，混匀。室温（20-25）下放置 20min后，移入 1cm比色皿内，以零管为参比，于波长 420nm处测量吸光度，以标准各点吸光度绘制标准曲线。3、试样测定非蛋白试样的测定：精密吸取按 1 制备的试样溶液 0.5ml-5.0ml（约相当于2013-11-1712抗坏血酸 200ug 以下）于 10ml 比色管中。按 2 自“加 0.3ml 乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/l）”起依法操作。试样吸光度从标准曲
37、线上查出抗坏血酸含量。蛋白性试样的测定：精密吸取按 1 制备的试样溶液（约相当于抗坏血酸200ugy 以下）和等量试剂空白溶液（0.5ml-5.0ml） ，各于 10ml 比色管内，各加 1.5ml 乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/l） 、1.0ml 乙酸溶液（0.5mol/l） 、1.25ml 固蓝盐 B 溶液（2g/l） ，加水稀释至刻度，混匀。室温（20-25）下放置 3min，移入 1cm比色皿内，以试剂空白管为参比，于波长 420nm处测量吸光度。试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。4、结果计算 10vmcX21式中：X-试样中抗坏血酸含量，单位为每毫克每百克（mg/100
38、g、mg/100ml）c-试样测定液中抗坏血酸含量，单位 ugm-试样质量（体积）(g 、 ml)v1-测定时所取溶液体积（ml）v2-试样处理液总体积（ml）九、 维生素 B1 的测定一、 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。1、 正丁醇或异丁醇2 、铁氰化钾3、 氢氧化钠4、 浓盐酸5、 三水乙酸钠6、 冰乙酸7、 甲醇：色谱纯8、 维生素B1 标准品：硫胺素盐酸盐或硫胺素硝酸盐，纯度99 %。9、铁氰化钾溶液（20 g/L）：称取2 g 铁氰化钾（4.2），用水溶解并定容至100 mL。临用前配制。10、 氢氧化钠溶液（100 g/L）
39、：称取25 g 氢氧化钠（4.3），用水溶解并定容至 250 mL。11、碱性铁氰化钾溶液：将 5 mL 铁氰化钾溶液（4.9）与 200 mL 氢氧化钠溶液（4.10）混合。临用前配制。12、 盐酸（0.1 mol/L）：吸取9 mL 浓盐酸（4.4），溶于1000 mL 水中。13、 盐酸（0.01 mol/L）：吸取0.1 mol/L 盐酸（4.12）50 mL，用水稀释并2013-11-1713定容至500 mL。14、 乙酸钠溶液（0.05 mol/L）：称取6.80 g 三水乙酸钠（4.5），加900 mL 水溶解，用冰乙酸（4.6）调pH 值至4.05.0，定容至 1000 mL
40、。经0.45 m 微孔滤膜过滤。15、 乙酸钠溶液（2.0 mol/L）：称取 27.22 g 三水乙酸钠（4.5），用水溶解并定容至100 mL。16、 混合酶溶液，称取2.345 g 木瓜蛋白酶（活力单位600 U/g）、1.175 g 淀粉酶（活力单位4000 U/g），用水溶解并定容至50 mL。临用前配制。17、 标准溶液17.1 维生素 B1 标准储备液（500 g/mL）：称取相当于硫胺素50 mg（精确至0.1 mg）的维生素 B1标准品（4.8），用 0.01 mol/L 盐酸（4.13）溶解并定容于100 mL。置于0 4 冰箱中，保存期为3个月。17.2 维生素 B1 标
41、准中间液：准确吸取2.00 mL 标准储备液（4.17.1）， 用水稀释并定容至100 mL，此溶液中维生素 B1 浓度为 10 g/mL。临用前配制。17.3 维生素 B1 标准工作液：分别吸取维生素 B1 标准中间液（4.17.2）0 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL、10.00 mL，用水溶解并定容至100 mL。该标准系列浓度分别为0 g/mL、0.05 g/mL、0.10 g/mL、0.20 g/mL、0.5 g/mL、1.00 g/mL。临用前配制。二、仪器和设备1、 高效液相色谱仪，带有荧光检测器。2、 高压灭菌锅。3、 离心机：转速4000
42、转/分钟。4、 pH 计：精度0.01。5、 组织捣碎机（转速在0 转/分钟12000 转/分钟可调）。6、 0.45 m 微孔有机滤膜。7、 天平：感量为0.001g 和0.0001g。操作方法1、 试液提取称取5 g10 g（精确至0.01 g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B1 5 g以上）于100 mL三角瓶中，加60 mL 0.1 mol/L盐酸（4.12），充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121 下保持30 min，待冷却至40 以下后取出，轻摇数次；用2.0 mol/L 乙酸钠溶液（4.15）调 pH 值至4.0 左右，加入2.0 mL
43、（可根据酶活力不同适当调整用量）混合酶液（4.16），摇匀后，置于37 的培养箱中过夜；将酶解液转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤纸过滤，取滤液备用。2、 试液衍生化取上述滤液 10.00 mL 于 25 mL 具塞比色管中，加入5 mL 碱性铁氰化钾（4.11），充分混匀后，加 10.00 mL 正丁醇（或异丁醇）（4.1），强烈振荡2013-11-1714后静置约10 min，充分分层，吸取正丁醇（或异丁醇）相（上层）于4000 转/分钟6000 转/分钟离心5 min，取上清液经有机微孔滤膜过滤（5.6），供进样用。另取10.00 mL 标准工作液（4.17.3），与试液同步
44、进行衍生化。3、 测定3.1、 色谱参考条件色谱柱：C18 反相色谱柱（粒径 5 m，250 mm 4.6 mm）或相当者。流动相：0.05 mol/L 乙酸钠溶液（4.14）甲醇（4.7）= 65+35。流速：1.00 mL/min。检测波长：激发波长 375 nm，发射波长 435 nm。进样量：20 L。3.2、 标准曲线绘制将维生素 B1 标准系列工作液（4.17.3）衍生物依次按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，色谱图参见附录A。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.3、试液测定将试液衍生物按上述推荐色谱条件进样测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。4、分析结果的
45、表述试样中维生素B1的含量按式（1）计算：（1）10mvcX式中：X 试样中维生素B1 的含量（以硫胺素计），单位为毫克每百克（mg/100 g）；c 试液的进样浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V试样定容体积，单位为毫升（mL）；m 试样质量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。当取样量为 10.00 g时，本标准中方法定量限为 0.05 mg/100g。附录A（资料性附录）维生素B1 标准溶液的液相色谱图2013-11-1715A.1 维生素B1 标准溶液的液相色谱图维生素 B1 标准溶液的液相色谱图见图 A.1。图 A.1 维生素
46、 B1 标准溶液的液相色谱图十、 维生素 B2的测定一、 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。1、 盐酸2、 三水乙酸钠3、 冰乙酸4、 甲醇：色谱纯5、 维生素B2（核黄素）标准品：纯度99%。6、 盐酸（1+1）：量取100 mL 盐酸（1）缓慢倒入100 mL 水中，混匀。7、 盐酸（0.1 mol/L）：吸取9 mL 盐酸（1），溶于1000 mL 水中。8、 盐酸（0.01 mol/L）：吸取0.1 mol/L 盐酸（7）50 mL，用水稀释并定容至500 mL。9、 乙酸钠溶液（0.05 mol/L）：称取6.80 g 三水乙酸钠
47、（2），加900 mL 水溶解，用冰乙酸调pH 值至4.05.0，用水定容至 1000 mL。经0.45 m 微孔滤膜过滤。2013-11-171610、 乙酸钠溶液（2.0 mol/L）：称取 27.22 g 三水乙酸钠（2），用水溶解并定容至 100 mL11、 混合酶溶液：称取2.345 g 木瓜蛋白酶（活力单位600 U/g）、1.175 g 淀粉酶（活力单位4000 U/g）和1.000 g 酸性磷酸酶（活力单位4000 U/g），用水定容至50 mL。临用前配制。12、 标准溶液12.1 维生素 B2 标准储备液（250 g/mL）：称取25mg （精确至0.1 mg）维生素 B2
48、 标准品（5），加入盐酸（6）2 mL，超声溶解后，立即用水转移并定容至100 mL。置于棕色玻璃容器中在04冰箱贮存，保存期为3 个月。12.2 维生素 B2 标准中间液：准确吸取4.00 mL 标准储备液（12.1），用水稀释并定容至100 mL，此溶液中维生素 B2 浓度为 10 g/mL。临用前配制。12.3 维生素 B2 标准系列工作液：分别吸取维生素 B2 标准中间液（12.2）0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL、10.00 mL，用水溶解并定容至100 mL。该标准系列浓度分别为0.00 g/mL、0.05 g/mL、0.10 g/mL
49、、0.20 g/mL、0.50 g/mL、1.00 g/mL。临用前配制。二、仪器和设备1、 高效液相色谱仪，带有荧光检测器。2、 高压灭菌锅。3、 pH 计：精度为0.01。4、 组织捣碎机。5、 0.45 m 微孔水相滤膜。6、 天平：感量1 mg 和0.1 mg。操作步骤1、 试样的处理称取5 g10 g（精确至0.01 g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B2 5 g以上）于100 mL三角瓶中，加60 mL 0.1 mol/L盐酸（4.7），充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121 下保持30 min，待冷却至40 以下后取出，轻摇数次；用2.0 mol/L乙酸钠溶液（4.10）调pH
