1、JulyChromatography霞，庞楠楠，廖一平，(jE索分子科学恩家实验室北京大学化学篙分子工程学院，=l匕泰100871。，藤n勰虢鼢舷*獬j摘要：重组人促红细胞生成素(rhEPO)是一种激素类兴奋剂，近年来被滥用在一些耐力性比赛项目中。由于重组与内源性EPO的氨基酸序列相同，区别很小，并且在尿样或血样中的浓度低，代谢快，给检测带来了很大的难度。本文从直接方法和间接方法两个方面综述了近几年来兴奋剂rhEPO及其类似物检测的 ，并 本小组 ：重组人促红细胞生成素 兴奋剂 检测 直接方法 间接方法 综述文 ：10008713(2008)040413 04erythropoietin(rh
2、EPO)isdopings Inyears italwayscompetitionsports Itextremelyendogenouserythropoietin(EPO)andogenoustheysequences andrelativelyverypaper，theprogressanalysisanalogsbyprospectsdopinggroup Keyerythropoietin(rhEPO) doping detection directmethods methods review一， 2008年北京 的 近，兴奋剂 ， 的科学 和 ，且平currency1和“的fifl
3、，是一种 ，重 的 ” 。 于代 来 ，激素类的检测，兴奋剂重组人生子(rhGH)重组人促红细胞生成素(rhEPO)促性激素(HCG)是分 化学的难。其在于，在检测程中难 基重组的激素与内源性激素区分来，且些激素在血和尿 ，并 本小组的工 了兴奋剂检测的促红细胞生成素(EPO)是一种 ， 大 分由 生，其 要的 是促红细胞的生成， 血红 的浓度， 要用于 EPO性几相同的重组人EPO ， 力， 人的红细胞 及血红 ，从 人 的 力， 人 大 ，人耐力， 的 工 霞， 生 Email：xyangpku edu an 联系人：刘虎威，教授， 生导师 Tel：(010)62754976，Email：
4、hwHupku edu cn基金项目：家自 科学基金资助项目(No 20635001) 力 的促 用，”减少的 性疲劳，故人在比赛或赛马中滥用， 成绩。此，从1990年起，“ 委 (InternationalOlympicCommittee，IOC)正式EPO列禁用药物2|。，其分子骨架165个氨基酸组成的肽链，具000，其中 链的末端，是rhEPO的性成分，唾酸 2001年，市场又出了一种新近的红细胞生成刺激 (erythropoiesisstimulatingprotein，NESP)，也称Darbepoietin一“(DPO)。，是在促rhEPO不同的是，DPO5个 基化位，不是3个 D
5、PO的 基化位加，相应的其唾酸 也 之 加，与内源性和基重组的EPO相比，DPO的唾酸 更 ，就赋予了更的半衰期和生物性。此外， 商的更新换代，EPO的小分子仿照，EPOzeta 1 和基型兴奋剂，也 渐渐面世，给 兴奋剂工 者带来巨2000年，法科学家Lasne和de次报fi了人尿中内源EPO(uEPO)和rhEPO的检测方法。之后，Lasne1完整详细地描述了该方别，利用电聚焦法(IEF)二次印迹化学免疫骤：首先，20mL的尿样滤(采用截留相 分子其他杂 )，并浓缩至2mL(使尿样中的EPO的IUL) 浓缩后的尿 电聚焦(由于rhEPO和uEPO之间存在电的差别，故” IEF其区分来) 之
6、后，凝胶的条带转移到聚偏二氟乙烯(PVDF) 二次印迹(Double-blotting)(二次印迹” 效地阻止第二抗的非特异性 ，从避免假阳性 果的出) 后，在光氨和 化氢的 用下 化学 ，该方法程复杂，步骤 ， 出 差，存在 很大的 。近几年来， 兴奋剂工细 电 (CE)方法是 的。de带电 法在 中加 (1，4一二氨基 )尿素两性 子来 EPO在 的 ， ”实EPO几种 化的基 分 ， 平 间，检测 间( 90min)，重性差， 不 ，并且 用 系中 的不物法采用(MS)联用。Yu.1 成了6，6一ionene聚 物，并 细 currency1“ 分 EPO 化，果该方法具检测 间( 16
7、min)重性的特。该方法由于使用了 的 ，使fi者”采用 检测。与其他文fl报fi的方法相比，该方法具检测 间分 特， 方法的度和重性 要 一步 。Balaguer采用新型的聚烯 基的低”(LN)细 “，并 细 电 一电 间(CE-ESIMS)方法 一步的化和 ，从检测F后出自由的- ，由于TOFMS” 的 分 ，故- ” 地被 出是了乙化化 化，至是 近，小组 ， 基 聚 具 的效果“，且种方法”与联用，相 rhEPO 型的分 fi到更的分 效。此外，应用一“的细 ，用 光 剂3-(2- ) 一2一 (FQ) rhEPO 在 生，并采用细 电 和激光 导 光检测 联用 分 检测， 果种方法的
8、度比 外(UV)检测 了2个 。 ， 于人尿或血中rhEPO的检测，其度 不 (EPO在尿中的浓度很低， IUL， 10ngL)。此，很 者 目光EPO及rhEPO 浓缩， 利用细 电 霞，：兴奋剂重组人促红细胞生成素及其类似物检测方法的 分 ， 到 检测度的效果。Benavente细 性地浓缩 中的rhEPO， 与细 电 方法联用 分 分 。实验， 用CEuV方法，其检出 于0 05mgmL 用免疫 和细 电 方法，0 01mgmL的rhEPO 应。 是该方法分 间，法fi到 型的 ，故 要 一步 和化。与此相比，抗具更的性。Borne-pmol的EPO。 一步的化和低样 ，该方法 人中内源
9、EPO和rhE和之外，Nagano 了采用凝素 的 基 特异性的，” 用来在 分，凝素” 别 构的微小差别，一独特的 力使凝素很” 被用于尿尿 ，尿中的其他 也 一并被，就 要与其他纯化方法相 ， 到 佳的效果。近几年，细 电 检测EPO的方法fi到了迅速的 ， 于 效相色(HPLC)个传统分 检测方法的 也没停止，尤其是 的 速 ，相色与联用方法也越来越 地被用于兴奋剂rhEPO的检测。Luykx.。利用rhEPO本身的 光应 于其 外应的特，采用 效阴 子交换色 光检测法检测了rhEPO，p。gmL。从检测度角度来看，该方法比较适用于药物 中rhEPO的检测，不适 人内流中 极低的兴奋剂的
10、检测。与此类似，也采用尺寸排阻HPLC- 光检 非”效，其 ” 到80ngmL。此外，rhEPO与其类似物DPO也被用在了马比赛，微小差别，由此导致电不同 马的内源性EPO在氨基酸序列就与rhEPO区别，一特(rhEPO与DPO的氨基酸序列是非”相似的)打9j先采用免疫 和的方法 实“样 浓缩， 后用胰 ，针 人特，rhEPO和DPO都具的同样的 T646VNFYAWK52和T17.VYSNFLR”o 标志物，采用LCMSMS方法，利用标准样中两个标志肽ngmL，ngmL，”见此方法具 的度和准确性，完全”赛的方法。Smgh旧也针 赛马中滥用rhEPo包括 在内的大 的 丰度 ， 了rhEPo
11、和DPO的检测， 者采用固 凝素(canavaliaagglutinin，ConA)的萃柱和固 EPO抗的免疫 和柱相 的方法，使fi回收 到70左右 十二 基硫酸钠一聚烯 凝胶电 (SDSPAGE) 纯化， 胰标，利用基辅助激光 电 间(MALDI-TOFMS)fi到了 性的剂-应 系，分 的检测度，并使fi采用MALDITOF ，虽 人在 兴奋剂rhEPO的检测了很大的 ， 没一种方法来代替复 的各种参 ，红细胞压积(Hct)血红 (Hb)网织红细胞压积(reticulocytehematocrit，RetHct)” 性转铁 (sTfr)浓度血中EPO浓度及巨细胞百分 (Macro)嵋”。
12、依赖于 些间接指标的检测，与没使用rhEPo的正”人的评价 果相比较，”查 是滥用rhEPO。依据的是统计模型，ONmodel和OFFmodel：In(EPO)+0 1267In(sTfr)+0 115ln(Macro+0 1)In(EPO)ONmodel适用于正在使用EPO的滥用者，若计算值大于2 62(男性)2 47(女性)就阳性 OFFmodel适用于近期(24周内)使用EPO 已停药者，若计算值大于2 24(男性)2 08(女性)阳性旧4。2“。个式模型从 学角度了该检测方法的科学性，实践种综 思维的方式是”的，该方法已成2000年悉尼 EPO的 筛方法。 一方法的准确度大受怀疑，”
13、生大 的假阳性 应。此，只尿检法和血检法互相补，两种方法联 使用才 前后其血及尿中小分子 及 肽的变化，并 大 的 比实验， 图寻求一种或几种小分子 rhEPO。果 一种或几种样的标志物，似物检测方法的 ，从直接方法和间接方法其存在的势和不 。 ，虽 人在 了很大的 步， 没从根本决问题， 没出一种快速准确的方法来代替步工 者来 ，一方面要从样的前处理 手，采PO 和浓缩， 采用效的分 和 和检测 另一方面，针 rhEPO在内代谢快的特，利用代谢组学的思想，努力寻找一种间接的生物指示剂来准确地判断是存在rhEPO滥用。总之，学的 ，新的内源性兴奋剂药物不断 生，兴兴奋剂检测 的步伐，另一方面应
14、当加大力度呼吁全世界人民 兴奋剂危害性的 ，同 应当教 人人从自做起，拒 使用兴奋剂，1WinearisJ，Downmg1986，328(8517)：12310111213141516171819202122】23242526Med，1999，27(1)：ltry，1987，26(9)：2B Blood，1991。77(3)：419Med，2005，35(10)：831SeguraA，Gufieffez-GallegoChem，2007，388(7)：lJ Nature，2000，405(6787)：6352002，31l(2)：1192003，24(4)：678Chem，2003，75(19
15、)：5B，CongSci，2005，28(17)：U，Pelzingresis，2006，27(13)：2X，Huang(11)：1Chem，2007，387(8)：2Chem，2003，376(7)：1M，Stubigera1 Electrophore-sis，2005，26(9)：lLuyl DM ，DingemanseJ，GoerdayalChromatogrA，2005，1078(1)：1132007，43(1)：213LR，etal AnalChem，2007，79(12)：4Appl，2007。1(7)：erc，1999，3l(5)：639Breymann(1)：135Med，20
16、02，32(2)：125a1 Haematologi-ca，2003，88(8)：931a1 Haematologica，2000，85(6)：564a1 Haematologica，2001，86(2)：128j兴奋剂重组人促红细胞生成素及其类似物检测方法的 者： 霞， 庞楠楠， 廖一平， 刘虎威者 位：北京分子科学家实验室,北京大学化学与分子工程学院,北京,100871刊 ：色文刊 ： CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY年， (期)：2008，26(4)被用次 ：0次参文fl(26条) 1.Winearls C G,Pippard M J,Downing M
17、 R,et al.Lancet,1986,328(8517):1175 2.Mottram D R.Sports Med,1999,27(1):1 3.Davis J M,Arakawa T,Strickland T W,et al.Biochemistry,1987,26(9):2633 4.Krantz S B.Blood,1991,77(3):419 5.Diamanti-Kandarakis E,Konstantinopoulos P A,Papailiou J,et al.Sports Med,2005,35(10):831 6.Segura J,Pascual J A,Gutier
18、rez-Gallego R.Anal Bioanal Chem,2007,388(7):1521 7.Lasne F,de Ceaurriz J.Nature,2000,405(6787):635 8.Lasne F,Martin L,Crepin N,de Ceaurriz J.Anal Biochem,2002,311(2):119 9.de Frutos M,Cifuentes A,Diez-Masa J C.Electrophoresis,2003,24(4):678 10.Sanz-Nebot V,Benavente F,Vallverdu A,et al.Anal Chem,200
19、3,75(19):5220 11.Yu B,Cong H,Liu H,et al.J Sep Sci,2005,28(17):2390 12.Balaguer E,Demelbauer U,Pelzing M,et al.Electrophoresis,2006,27(13):2638 13.Fu X,Huang L,Gao F,et al.Electrophoresis,2007,28(11):1958 14.Benavente F,Hernandez E,Guzman N A,et al.Anal Bioanal Chem,2007,387(8):2633 15.Bornemann C,B
20、urggraef T,Heimbuchel G,et al.Anal Bioanal Chem,2003,376(7):107416.Nagano M,Stubiger G,Marchetti M,et al.Electrophoresis,2005,26(9):1633 17.Luykx D M A M,Dingemanse P J,Goerdayal S S,et al.J Chromatogr A,2005,1078(1):113 18.Gunturi S R,Ghobrial I,Sharma B.J Pharm Biomed Anal,2007,43(1):213 19.Guan F
21、,Uboh C E,Soma L R,et al.Anal Chem,2007,79(12):4627 20.Singh A K,Gupta S.Proteomics Clin Appl,2007,1(7):626 21.Audran M,Gareau R,Matecki S,et al.Med Sci Sports Exerc,1999,31(5):639 22.Breymann C.Baillieres Clin Endocrinol Metab,2000,14(1):135 23.Wilber R L.Sports Med,2002,32(2):125 24.Parisotto R,As
22、henden M J,Gore C J,et al.Haematologica,2003,88(8):931 25.Parisotto R,Gore C J,Emslie K R,et al.Haematologica,2000,85(6):564 26.Parisotto R,Wu M,Ashenden M J,et al.Haematologica,2001,86(2):128相似文fl(9条)1.期刊 文庞楠楠. 霞.廖一平.刘虎威.Nannan Pang.Xia Yang.Yiping Liao.Huwei Liu重组人促红细胞生成素的CE和CE-MS检测方法 -生 科学 2008,6
23、(7) 促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是 红血 细胞 的 激素,近年来被滥用在一些耐力性比赛项目中.由于EPO在尿样或血样中的浓度低,代谢快 及 构复杂 变给检测带来了很大的难度.该文从细 电 (capillary electrophoresis,CE)和细 电 -(CE-massspectrometry,CE-MS)角度综述了近几年来兴奋剂重组人促红细胞生成素(recombinant human EPO,rhEPO)检测的 .2.期刊 文周 重组人促红细胞生成素及其检测 - 科学2002,“(2) 重组人促红细胞生成素是一种 用基重组的重组激素类药物.其 红细胞的 ,
24、近些年来被滥用于一些耐力性 项目中,成 中 ”用的兴奋剂之一.本文重 了重组人促红细胞生成素的 应用及其检测.3.期刊 文庞楠楠.周 . .廖 .刘虎威重组人促红细胞生成素的微电纯化 快速 -分 化学2009,37(z1)重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)是 红血 细胞 的 激素,” 性 衰 HIV 外科手中异型 血起的 血.也被 兴奋剂来 的耐受力被滥用.rhEPO166个氨基酸,分子 18,399,其 肽链的 基化 于后 程,依赖于 成rhEPO的细胞种类 及各种物理化学条 和 的分 纯化条 .4.学位 文 重组人促红细胞生
25、成素的免疫分 方法 2006 内源性的生激素，促红细胞生成素(EPO) 人的红细胞生成具重要的 用。1985年， 在中细胞(CHO)内EPO基的成 及 ，重组人促红细胞生成素(rHuEPO)出并迅速在 中currency1fi了“的应用 同 rHuEPO 血 力的特也促使其在中被一些 兴奋剂使用。此，了 在 中 rHuEPO的 效 及在中 rHuEPO的滥用，要采用的分 手 生理中的EPO 检测。本 文 针 rHuEPO不同决 fi的 种抗基，fl 了适于 检测EPO的 种联免疫 分 法(ELISA) 及 EPO兴奋剂检测的方法。本 文的 要 和 新之处在于：1.rHuEPO 抗的 。 rHu
26、EPO与血 (BSA)的联 物免疫小，采用传统的杂交抗 currency1fi了针 rHuEPO的 抗(F3-mAb) 该抗 于IgM类型， 和” 2.1108L/mol。与先用rHuEPO直接免疫小 的IgG抗相比，F3-mAb的免疫 应性了 的 ，实了联BSA后的rHuEPO确实 了 抗的免疫应 。同 ， currency1fi的抗基，并比较了种检测EPO的ELISA方法，其中间接非ELISA的检测 到29pg/mL，” 一步 成适于 检测EPO 的方法。 2.针 rHuEPO的 链抗(scFv)的 。首次利用”抗， currency1fi了针 rHuEPO的scFv。 链抗的分子 用SD
27、S-PAGE法测fi29kDa，其相应的 和” 间接ELISA测fi1.0108L/mol。 抗 ELISA的检测 果：scFv具与相 样中rHuEPO 特异性的 力 基化的rHuEPO与完整rHuEPO的 照实验currency1 一步实了scFv-B2 别的抗决 fi是rHuEPO的肽 分。 3.针 rHuEPO 基特异性抗筛的 步 。在述已currency1fi 针 rHuEPO 链抗”次的基，采用减 的，currency1fi了针rHuEPO 链的”抗。些抗 基的特异性用 酸钠和二硫 / 酸处理后的rHuEPO检验。在100个 的 中，3个 出 基特异性抗的 力，其中” No.62”
28、别rHuEPO的 链，” No.63和No.83currency1” 别由 链和肽 同构成的构，些 果 步 示了 免疫分 方法直接区分rHuEPO与EPO的” 性。 4.针 rHuEPO的 抗免疫 和柱的 和应用。 本组先currency1fi的抗rHuEPO的 抗基，用面 子 分 (SPR)和ELISA方法测 了 抗的 和” 交 应性 及抗决 fi 之后，其与CNBr化的Sepharose4B凝胶相联成免疫 和柱 该 和柱的 大抗rHuEPO 2g(6.6IU)， 低浓度rHuEPO样(7.8，10，120mIU/mL)样的回收在78-86之间，并且实“尿样的加标回收86，其 一步 成EPO
29、兴奋剂检测的处理方法 及 EPO检测流程 了基。5.期刊 文.ZHANG Lei促红细胞生成素 的 - 工学院学报 自 科学2006,19(3) 促红细胞生成素(EPO)是一种 应用非”“的重要药物, 来 促红细胞生素又是一种兴奋剂, 的 力, 成绩的 起到一 的促 用, 同 也 生极重的 害,是近年来兴奋剂检测的 .述了促红细胞生成素的生理特性和 currency1fiEPO的几种”见方法,及滥用重组人促红细胞生成素 带来的巨大 .6.学位 文 基于相分 与联用的滥用药物分 检测新方法 2009 用偏移是药物使用程中”见的，包括 性偏移和 性偏移。“药物滥用”使药物的 用被“异化”，是药物
30、用 性偏移的 型 子。 ，“药物滥用”的 包括 ，也包括 滥用兴奋剂，包括基于不正当目的 人和 物中加禁用药物。述 使用的药物就是 ” 的“滥用药物”。些已成 的重要素， 了大 物 ，重害了人的身 。此，世界各正加大 滥用药物的 力度。本 文工 了大类 的滥用药物分 ，相 生物 重组人促红细胞生成素(Recombinant Human Erythropoietin，rhEPO)与利尿剂类兴奋剂 中的 比 类药物， 细电 (CapillaryElectrophoresis，CE)和 效相色(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)两种相分 与(Ma
31、ss Spectrometry，MS)检测的联用手 ，了 种针 述 的 效 特异性分 检测新方法。 文第一 ， 要综述了近年来 相分 (CEHPLC)和MS的系列 ， 了滥用药物的一些 ， 述了滥用药物的”见分 方法， 出了本 文工 的 方。 文第一 分(第二 至第 )是 于相 生物 的分 检测 ，了种基于相分 与MS检测联用的分 方法，并详细 了几种成分的MS理。其中，第二 的 要工 是采用聚乙烯 (Polyvinylpyrrolidone，PVP) 电 流的细 “， 基 糊精(Carboxymethyl-cyelodextrin，CM-CD) 加剂，了一种基于 分填充(Partial Fi
32、lling Technique，PFT)的CE-MS联用方法第 的 要工 是采用了一种全新的金纳米粒子“，效 了分 与细 内 的相互 用，了峰形， 了分 效，了一种 重的CE-MS联用方法 第 的 要工 是利用 子阱(Ion Trap，IT)和 极杆一 间(Quadrupole Time-of-Flight，Q-ToF)两种MS，系统 了几种成分在电 子化(Electrospray Ionization，ESI)条 下的路径，并与 构类似物的程 了比较 第 的 要工 是了一种全自 在 固相萃(Solid Phase Extraction，SPE)HPLC-重串联 极杆(TripleQuadru
33、pole，TQ)MS联用分 十种相 生物 的”方法。 文第二 分(第六 至第七 )是 于rhEPO与利尿剂类兴奋剂的分 检测 。其中，第六 的 要工 是了一套基于“自下” 组学的rhEPO特异性生物标志物筛查方法 第七 的 要工 是了一种 的：HPLC-TQ-MS联用方法，用于检测尿(人猪)中的八种”见利尿剂成分，检测度较文fl报fi的方法 了10倍。 文第 分(第八 )的 要工 是与农 督检验测 中 (济南)及Agilent司一起 了 中 种 比 类药物的HPLC-TQMS联用测 方法，并申请 家标准方法。 文第九 总 与 分，系统总 了 文工 fi的 要成绩，深 分 了 文工 的不 之处，
34、 后 出了一些参性思路。7.期刊 文卢庄.王杉.代泉.王京兰.养军.应万涛.徐友宣.钱小红.吴侔 .蔡耘.Lu Zhuang.Wang Shan.Dai Jingquan.Wang Jinglan.Zhang Yangjun.Ying Wantao.Xu Youxuan.Qian Xiaohong.Wu Moutian.Cai Yun基辅助激光 电 - 间串联 重组人促红细胞生成素一 构 -分 化学2006,34(5) 了生物 rhEPO 一 构的系列方法,包括分子 唾酸 及N- 基化性的测方法,并用于4种 rhEPO 样的分 ;在此基化切条 ,使测 的肽 指纹(PMF)的覆盖均 到98%,成
35、 鉴 了4个样中的全 N- 基化位 及 分子中两 二硫 了构确,测 4个样分子 分别:27754.127.4Da27941.423.2 Da27682.522.0 Da和27914.722.5 Da;唾酸 分别:5.0%4.8%5.6%和5.4%; 分别:34.3%34.7%34.1%和34.6%.此外 4种 在O-连接 型及N-连接型的区别做了 步fl .8.期刊 文闫瑾. .郭泉.”文保抗重组人红细胞生成素(rhEPO) 抗的 及其 ” (Kaff)的测 -西师范大学学报 自 科学 2003,21(z6) 人促红细胞生成素(EPO)是由 分泌的一种 链酸性 .相 分子 34 000D. 分
36、由165个氨基酸组成, 分由条 门冬氨酸N末端 链和一条丝氨酸O末端 链构成其 要生理 是刺激骨髓红细胞的生成与,促 血中红细胞 , 血的载 力.目前, 基重组currency1fi的rhEPO已 生物药被“应用于 中同 由于其“兴奋剂“的 用,也被“ 委 列禁用药物抗重组人促红细胞生成素(rhEPO) 抗(pAb)的 EPO 用 的 和 应用重要的 ,是实 其 检测的物基采用rhEPO抗直接免疫家兔的方法currency1fi了rhEPO 抗的 物血.测 抗血效价10-5.抗血纯化后,采用系列 固 化抗与抗的联免疫 分 (ELISA)方法测了抗与固 化抗 用的 ” (Kaff).9.学位 文
37、 霞相色-联用和细 电 在兴奋剂检测和农药分 中的应用 2008 相色-联用(LC-MS)及细 电 (CE)是目前生化分 和药物分 及 境测的 要工具。两种分 各具势：LC-MS方法度性准确性和重性 CEcurrency1具分 效 分 速度快操 模式 消耗少应用范围。本 文 了两种分 方法在兴奋剂检测和农药分 中的应用， 要工 分两个 分：(1)分别采用直接方法和间接方法 重组人促红细胞生成素(rhEPO) 分 检测 (2)分别采用LC-MS方法和不同模式的CE方法 几种苯 基脲类杀虫剂及其类似物 分 检测，并 了其的理。第一 分重组人促红细胞生成素(rhEPO)的分 检测rhEPO是一种基重
38、组药物， 于 度 基化的 。其注射剂 要适用于 性 衰 致 血的透 病人， 非透 不全病人的病状性 性 血。另一方面， 内源性激素类兴奋剂的一种， 红细胞生成特异性的刺激 用， 的工 力 的促 用，此，被一些 在比赛或赛马中滥用， 成绩，故“ 委 已rhEPO列禁药物。由于rhEPO与人自 生成的内源促红细胞生成素(uEPO)在序列 构几没区别 且rhEPO的半衰期很，在血和尿中的浓度非”低， 药检难度很大。目前， 委 的检测方法是基于尿检和血检的综 果。此方法虽 效， 存在一些 ，：EPO抗的特异性不是很 ， 用昂贵，操 步骤 琐 ，法 大批 的尿样检测， 起操 失 和人素的 差，此 要 和
39、 新。了 新的快速效的检测方法，在本 文中，首先 了采用CE直接分 与 度的检测 激光导 光(LIF)检测 联用的方法。由于rhEPO本身的 光性 差，了两种”用且 效的 光 剂FQ和FITC rhEPO 柱前或柱 生，化FQ柱 生 应的条 ， 终避免了复杂的 重 生，并fi到了 度的应和一 程度的 型分 ， 一步 ， currency1fi更的 果。另外， 图一种新的准确度 的间接方法，利用LC-TOF-MS 正” 人注射rhEPO前后尿及血中的 及 肽的变化，使用rhEPO后的生物标志物， 便更方便更快速的确 是注射了rhEPO。第二 分苯 基脲(BU)类杀虫剂及其类似物分 方法的 BU类
40、杀虫剂是目前农生 中普遍使用的一类几 成 剂。在第 中，采用HPLC与 子阱MS联用的方法 了氟铃脲 虫脲及其类似物的理， 比了其在正负不同模式下的规律，并 了CapEx电压与碎 子相 丰度的系。另外，在第六 中了HPLCMS方法分 检测水中的 虫脲氟铃脲及其类似物，用子 子 性 分 ，利用此法测 地水中低浓度的BU类化 物，检测 在212ng/mL， 性范围在10-1000ng/mL，峰面积和浓度的相 系 也令人 (0.994-0.999)，具很 的度和准确性。在第七 中，采用了两种CE分 模式胶束电 色(MEKC)和微乳电 色(MEEKC)分 分 种BU类杀虫剂(氟铃脲 虫脲 虫 氟虫脲)及其类似物。 了两种模式中 分 的 素 同 ，基于两种模式分 该类化 物的迁移 间分 效 及性 比fl 了两种模式分 的异同。在 文的 后， 本 文的 要成果 了总 ，并 出了 今后的 工 的 。本文链接：http:/ ：cee440c9-64f0-42ea-bcad-9e1001649f7a下载 间：2010年10月15
