1、广西中医药大学药代动力学实验讲义第 1 页 共 5 页实验一 对乙酰氨基酚片生物利用度和药物动力学参数的测定（尿药速度法）【实验目的】掌握用尿药浓度法测定药物制剂生物利用度（BA） 、 、 等动力学参数的原理与k2/1t方法，并加深对这些参数的理解。同时了解尿药浓度法的特点、数据处理方法及实验设计。【实验原理】单室模型口服尿药浓度速度法基本公式为（1）kFXtktXaeu 0log30.2log中尿药总排出量 可以从下式求得uX（2）ktXXuu24)240(应用尿药浓度法直接测定生物利用度基本公式为相对生物利用度 （3）标 ）标 ） 试 ）试 ） 10/(Xu【实验材料】1仪器 万分之一电子
2、天平，紫外分光光度计，离心机。10ml 具塞刻度试管（160支） ，1ml 刻度吸管（24 支） ，5ml 刻度吸管（12 支） ，100ml 容量瓶（7 个） ，250ml 容量瓶（3 个） ，洗耳球（24 个） 。250ml 量杯（4 个） ，1000ml 量杯（8 个） 。2试剂及配制0.4氢氧化钠溶液（需 250ml）4N 盐酸溶液 (需 1000ml)：取 33.2ml 浓盐酸，加蒸馏水溶解，稀释至 100ml。显色剂(需 1500ml)：取 0.2 N NaOH 溶液 80ml，加 1酚溶液 10ml。振摇混匀后，加入碳酸钠溴溶液 100ml，混匀即得。0.2N NaOH 溶液：取
3、 NaOH 8g，加蒸馏水溶解，并稀释到 1000ml。1酚溶液：吸取 1ml 液化酚（含量在 99以上） ，溶解于蒸馏水中，稀释至 100ml。广西中医药大学药代动力学实验讲义第 2 页 共 5 页当天鲜配。3N 碳酸钠溴溶液：取 10.6g 无水碳酸钠，溶解于蒸馏水中，加 15ml 饱和溴水溶液混合均匀，并稀释至 100ml。当天鲜配。饱和溴水溶液：取适量液态溴，加入蒸馏水中，振摇溶解，放置至少 24h 后再使用。3药品 对乙酰氨基酚片（0.5g/ 片，100 片/ 瓶，1 瓶）【实验内容与方法】1. 对乙酰氨基酚片含量测定取本品 10 片，精密称定，研细，精密称取本品适量（约相当于对乙酰
4、氨基酚 40mg） ，置 250ml 量瓶中，加 0.4氢氧化钠溶液 50ml 与水 50ml，振摇 15 分钟，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，置 100ml 量瓶中，加 0.4氢氧化钠溶液 10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外可见分光光度法（附录 A，2005 年药典二部） ，在 257nm 波长处测定吸光度，按 C8H9NO2 的吸收系数（E 1cm1%）为 715 计算，即得。 （计算公式 A=ELC）数据记录：（测定波长 257nm）； 样 ； ； 样 （g/g） wc2.尿药标准曲线的绘制（1）对乙酰氨基酚贮备液的配制取本品 10 片，研细，105干燥 30min，精
5、密称取本品细粉适量（相当于含对乙酰氨基酚 1g） ，用蒸馏水溶解于 250ml 容量瓶中，冷却至室温后，稀释至刻度，置冰箱保存备用。 数据记录： 样 ； ； （g/ml） wVC（2）标准溶液的配制分别精密吸取上述浓贮备液 2.5ml、5.0ml、7.5ml、10.0ml、15.0ml 、20.0ml ，加蒸馏水至 100ml。制得标准溶液浓度分别为：数据记录：g/ml， g/ml， g/ml， g/ml， g/ml， g/ml广西中医药大学药代动力学实验讲义第 3 页 共 5 页（3）标准曲线的绘制表 1 标准曲线的绘制0 2.5ml 5.0ml 7.5ml 10.0ml 15.0ml 20
6、.0ml标准溶液浓度（g/ml）操 作0标准液（ml） 1 1无药尿液（ml） 1 14N 盐酸（ml） 4 4水溶液煮沸时间（h） 1 1加蒸馏水至（ml） 10 10吸取上述液（ml） 1 1加显色剂至（ml） 10 10放置时间（min） 40 40（其它浓度操作与加入量 2.5ml 相同）平均吸光度 A（620nm）3.尿药浓度测定（1）受试者：8 名自愿者，男女不限，身体健康。（2）服药、集尿：服药前 48h 内不应服用含有对氨基苯酚的药物。服药者需禁食早餐。早 7:30 喝水 150ml，7:55 采集尿样作空白尿及作标准曲线之用。并尽可能将尿排空。早8:00 用 150ml 37
7、左右的温开水吞服药片 1 片（0.5g/片）或者溶液剂（片剂溶解于 50ml温开水，再喝 100ml 温开水） ，按表 2 时间收集尿液。收集时间不得改变，应收集完全，不得损失，并精确计算体积。保持尿样不被污染，每次计量后，记下毫升数。留尿样约10ml 置冰箱中供测定用（试管应先编号，避免搞错！） 。收尿容器必须用水冲洗，沥干备用。表 2 尿液取样时间表编 号 采样时间 尿液体积（ml）0 空白对照 7:55（0h）1 9:00（1h）2 10:00（2h）3 12:00（4h）4 14:00（6h）5 16:00（8h）广西中医药大学药代动力学实验讲义第 4 页 共 5 页6 18:00（1
8、0h）7 20:00（12h）8 第二天早上 8:00（24h）注：每次取样后，根据需要喝水（日期： 受试者： 剂型： ）（3）尿药浓度测定OHNHOCH3+OH2HClCH3COH+NH2 OHNH2 OHNaBrOO NOHO NOH+OHH O N OH+OH2表 3 尿液样品操作表采样时间（h）操 作0 1 2 4 6 8 10 12 24含药尿液（ml） 0 1蒸馏水（ml） 1 1空白尿液（ml） 1 04N 盐酸（ml） 4 4水溶液煮沸时间（h） 1 1加蒸馏水至（ml） 10 10吸取上述液（ml） 1 1加显色剂至（ml） 10 10放置时间（min） 40 40（其它浓度
9、操作与 1h 相同）12测定吸收度 A（620nm） 3样品编号：广西中医药大学药代动力学实验讲义第 5 页 共 5 页【结果处理】1、标准曲线绘制表 4 标准曲线的绘制标准溶液浓度（g/ml）平均吸光度 A回归方程2、根据回归方程计算出各样品的尿药浓度，与有关数据填入表 5。3、以 对 作图，对曲线的直线部分进行回归，求出消除速度常数 ，生物半)/log(tXuc k衰期 及排药总量 与尿药排出率（回收率） ，列入表 6。并绘制累积尿药量与时间的2/1tu关系曲线。表 5 尿药浓度数据编号累积采尿时间（h）中点时间tc )(21ht（h）尿量（ ml）尿药浓度（mg/ml）uX（mg）ttXulog累积排药量 （mg）0 01 12 23 44 65 86 107 128 24（受试者： 剂型： ）4、将大组内各小组的数据进行统计列。按 3 同样方法求出平均 ， ， 及排泄率k2/1tuX（） ，同时求出相对生物利用度。表 6 尿药法求参数剂 型 剂 量 （h 1 ）k（mg）uX排 泄 率 （ ）片剂溶液剂
