1、食源性疾病事件样本采集方法,及时、准确、有代表性地采集食源性疾病有关样本，对疾病的明确诊断、病人的急救治疗、查明有毒食品来源及毒性具有重要意义 应认真准备好采样器材(灭菌采样容器，运送培养基、无菌棉签、采血针筒、试管等) 采样应做到及时、正确操作。,样 品 采 集,采样用容器和试剂,1. 采样容器应采用洁净、无色、无毒的聚乙烯塑料或硬质玻璃（又称硼硅玻璃）。样品瓶必须专瓶专用，切不可用实验室装过试剂的瓶作采样瓶。 2.用于微生物检验容器基本要求是选耐用材料制成，容器包装好后可防渗漏，能承受空中或地面运送过程中可能发生的温度和压力变化。所有采样用具、容器需严格灭菌，并且不能存放过长时间，防止污染
2、影响检验结果。 、采样用的生理盐水、运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜、无菌的要求，同时应符合采样所需要的试剂量，如运送粪便的培养基为5ml/管为宜,采集标本的基本原则,1、用于分离培养的病人标本，尽量在抗菌药物使用之前采集标本。 2、对微生物检测样品，应避免采样时对微生物的杀灭作用和引入新的抑菌物质，如容器是否有消毒剂的残留，或使用刚烧灼未冷却的采样工具。注意保护目的微生物同时避免杂菌污染3、注意采样部位，要在疾病发生的确切部位采样，也就是病原菌最多的地方。如细菌性痢疾的大便，采样要采取脓血部份送检。,采集标本的基本原则,4、采集的标本要有足够的量。要根据标本中病原菌的含量、分离要求和标本
3、的性质而定。一般脓液标本要12毫升，血液标本510ml如肛拭采样至少要用2根棉拭，食品采样应尽量多于25g（ml）以上 5、采集标本时应注意与病程的关系。如伤寒病人第一周血培养阳性率高，24周则大便培养阳性率高，败血症高热寒战时血培养阳性率高，用药前血培养阳性率高。,采集标本的基本原则,6、标本采集后应立即送至实验室。一般要求不超过4h。床旁接种可提高病原菌检出率。 7、以棉拭子采集的标本如咽拭子、肛拭或伤口拭子，宜插入运送培养基或生理盐水中送检。 8、做好样品标记，填写采样单。应详细填写检样名称、来源、采样时间、采样方法、中毒情况、患者主要临床症状、检测项目等，使实验室能准确及时接种相应的培
4、养基和适宜的培养环境，提高阳性检出率,采集标本的基本原则,9、根据不同样品的性状，检验项目要求，合理保存和运送样本。夏秋季最好用冷藏方法运送样品。,1.食品样品采集 （1） 尽量采取中毒患者食用后的剩余食品； （2）无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的容器，取洗涤液； （3）采集同一加工场所加工的其它直接入口食品； （4）半成品或原料，若是化学性、有毒动植物食物中毒采集食品原料尤为重要； （5）调查人员应对食品加工场所进行认真全面搜查，以客观结果判断是否还存在剩余食品或者原料。,2.涂抹样品采集 这类采样主要针对细菌性食物中毒； 包括对刀、墩、容器、
5、冰箱、水池、下水道口、设备、工具等可能直接或间接接触可疑中毒食品的物品表面进行涂抹采样,也可用刀刮物品表面取样。,3.粪便标本采集,（1）粪便标本应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，在急性期（3天以内）采集标本，可以提高检出率。 （注：无论中毒病人是否已经服药，均应进行大便采集。） （2）粪便标本中含有很多杂菌，但也应该在标本采集过程中注意无菌操作，防止杂菌污染。为提高检出率，最好采集新鲜粪便，采集脓血便或粘液便，陈旧标本影响检出率。 （3）应采集严重腹泻中毒病人的大便。,3.粪便标本采集,（4）液状粪便采集水样便或含絮状物的液状粪便25ml；成形粪便至少取蚕豆大小粪便1块（约5g）放于
6、灭菌容器内，若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门45cm深处（小儿23cm）轻轻转动一圈，取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检，为保证多个检验项目的开展，同一患者应至少采集2支肛拭。采样时注意勿将尿液或水混入粪便或容器内，采样后尽快塞紧或旋紧容器。,3.粪便标本采集,（5）用于厌氧菌培养的标本，应尽量避免接触空气，最好立即培养。若不能立即培养，则将粪便标本置于无氧容器内， （）不能及时分离培养的，用于细菌培养的样品可采用冷藏（ 48）保存。用于病毒培养或核酸检测的样品，应采用冷冻（-2080）保存。不要超过2h,4.胃内容物：通过收集患者呕吐物、洗胃液、胃
7、内抽取液和尸体解剖获得。注意避免污染，洗胃液最好采集最初抽出的，用高锰酸钾洗胃后的胃液意义要小些。在收集尸检材料中的胃内容物时，要注意胃的底部胃液的收集，因为比重大、溶解度低的物质往往沉淀于底部，如毒鼠强。采集的胃内容物量较大时，可取出后倾倒入一较大的玻璃漏斗内，漏斗的出口先塞住，混杂在胃内容物中的结晶和粉末将沉淀在漏斗底部，然后将上层液体和下层固体分别收集。,4.胃内容物：,在尸检中，对中毒迁延一段时间后才死亡的患者或生前已经进行洗胃的患者，要注意收集肠内容物。胃内容物的收集时效性强，错过了时机不能弥补。所采集的样本可用玻璃、聚乙烯或聚四氟乙烯器皿盛装，避免使用金属器皿。采集量最好达到1OO
8、g（ml）以上。,5.血液采集,（1） 是确诊中毒最主要的样本，因为某些经常可能服用的药物，如镇静催眠药剂，胃内容物中查到不能确诊，只有从血中检测到超过中毒量及死亡量时才能够确定。血液采集应注意：根据不同毒物在血液中的半减期决定采样时机；选择恰当的盛装血样的容器，如疑为百草枯中毒患者的血液不能用玻璃试管，因为玻璃可以使百草枯钝化，钝化后的百草枯实验室不能检出；,5.血液采集,注意密封，如疑为一氧化碳中毒者应尽早抽血515ml装满玻璃试管，必须用密封玻璃塞塞紧，避免瓶中残留空气，血液是分析一氧化碳中毒的惟一检材；对于其他易从样本中逸出的毒物也要密封保存，尽快检测，如氰化物；尽量不加防腐剂和抗凝剂
9、。,5.血液采集,（2）用于血清学检测时，需采集急性期(发病初期)和恢复期(2-4周后)静脉血3ml。副溶血弧菌为1-2日和1周。同时采集正常人静脉血作为对照。 （3）作血液病原培养时，如伤寒病人第一周血培养阳性率高，败血症高热寒战时血培养阳性率高，用药前血培养阳性率高。 严格无菌采静脉血，一般成人采血1015ml，儿童25ml，婴儿0.52ml，放入无菌的加入抗凝剂的有螺口容器或培养瓶中送检。作血片、暗视野检查可采耳垂血或指尖血。,6.食品加工人员带菌情况采样 据食物中毒的情况要求，可采取售货员或制作食品的工作人员及直接或间接接触食品的有关人员肛拭、手、鼻、咽和有感染灶的皮肤等涂抹样，特别对
10、那些在事件发生前或现正患有肠炎、发烧、化脓性及可疑带菌者进行重点采样 7.尿液采集 主要采用中段尿采集法，先用肥皂水清洗外阴部，再以无菌水洗净，一般取首次晨尿的中段尿100200ml。用玻璃或塑料瓶盛装，不加防腐剂；注意采集时间，一些毒物在中毒初期尿检阴性，如百草枯一般要在口服后2小时采集。,8.水样采集 采集时最好采非日光直射处的表层水。表面水样的采集，必须将聚乙烯瓶插入水面以下0.5m处，样品应充满容器。采样后立即加盖塞紧，避免接触空气。测定水中金属元素或有机污染物时，必须更加小心注意采样器具的清洁问题。一般要在采样点用水样冲洗事先处理好的采样器23次，同时采集的样品中不要混入固体物质。如
11、水中有余氯，在容器灭菌前应向内加入硫代硫酸钠以还原余氯。用于化学因子检测的水样盛装容器可以不灭菌，但应彻底清洗干净。,9.其它采样,对厨房、仓库、储藏室中发现的鼠及粪便、猫、狗等亦需采样。在肉毒中性毒素中毒时，对做食品的原料和周围的土壤亦需采样,使用卫生部统一制定的采样记录文书，经有关责任人员签字后送检；,注意,样 品 采 集,样品采集数量,学校等集体单位至少采集新发病人或具有典型的临床症状、未经过抗生素治疗的样品（粪便或肛拭）10份 可疑食品应采集5份（留样食品、原配料、半成品） 食品容器、用具和加工设备等环节采样510份 食堂或盒饭公司从事食品从业人员进行肛拭采样 肛拭采样至少要用2根棉拭
12、，食品采样应尽量多于25g（ml）以上,样品名称 采样数量肉及制品 500g（不同部位）流体及半流体食品 200g（充分搅拌后）呕吐物 50100g（每人）粪便 510g（每人）尿液 100200ml（每人）血液 510ml （每人）容器洗涤水 100200ml（每件）尸体标本 1020g（每种脏器）,食物中毒采样数量,采多少份,所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样),采什么,采什么样,对 照 内对照 外对照,暴发性食源性疾病,多途径传播疾病（大肠杆菌O157:H7 ） 潜伏期长的疾病（伤寒10-14天、李斯特菌2-3周等） 非消化道症状的疾病
13、水源性传播疾病,需注意,什么时间采,采样时间 氟乙酰胺在体内数小时后就开始转化为氟乙酸，血中在十余小时或数天后就检不出了氟乙酰胺，这个阶段体内氟乙酸浓度仍较高，所以应该采集患者的血样或尿样来检测氟乙酸；毒鼠强在体内代谢缓慢，中毒后数月后采集的血样对病因确定仍有重要价值。 恢复期血清：副溶血弧菌 1周 病毒分离标本最好在发病初期（1-2天）采,样 品 采 集,怎么采,不同检验目的的样品 细菌分离 病毒分离 抗原-抗体检测 化学毒物检测 无菌部位 基因检测木制的棉拭子 ？,怎么采,疑为百草枯中毒患者的血液不能用玻璃试管，因为玻璃可以使百草枯钝化，钝化后的百草枯实验室是不能检出的。 疑为一氧化碳中毒
14、者应尽早抽血5-15毫升注入玻璃试管内，量要直装至瓶口，必须用密封玻璃塞塞紧，避免瓶中残留空气，血液是分析一氧化碳中毒的唯一检体。其他易挥发毒物样本也要尽量密封保存，尽快检测。如氰化物。 对死亡患者一般从心腔内采集血液，也可采集腋下静脉、颈静脉、股静脉血液，心腔内血液和周围血中毒物浓度不同。,怎么采,对可疑中毒患者在解剖前不要将尸体用福尔马林、酒精等化学物处理，解剖台要冲洗干净，所用的解剖器具、手套要预先冲洗干净、晾干备用，不要沾染消毒药液（如来苏、酒精、升汞溶液等）以免污染了检材。 例如在解剖时使用了升汞溶液浸泡过的手套，手套上的升汞就可能对样本污染，会干扰了病因的判定。在尸体周围不要喷洒农
15、药灭蚊蝇，以免污染可能用于毒物分析的检材。,怎么采,粪便可直接采取或肛拭子； 呕吐物可注入灭菌试管内，由于胃酸能使样品为酸性，不利于细菌的存活，所以应在采集的呕吐物内加入一定量的碳酸氢纳予以中和，以保持细菌的活性。咽喉涂抹样可用棉签涂擦咽喉部采取 洗胃液直接抽取注入灭菌容器内。 血液血样可静脉采取血液23ml，注入干热灭菌试管内，使成斜面，待凝固后，分出血清送检。如做血液细菌培养，可直接注入灭菌并带有玻璃珠的三角瓶中，立即振摇数分钟，以防凝固，然后送检。,样品采集程序,采样用物品准备 正确采样程序 样品编号记录,样本标签内容,样本编号唯一性 样本来源从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝脏就
16、可标 注为某某患者肝脏； 样本数量包装中样本的数量，如此包装中同时采集了2块肝脏样本 就要标注为2 采样时间：采样地点：采样人： 样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品）,样本标签内容,最小包装（每个标本）每个包装箱每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。,样品送检,保护待检微生物和注意生物安全。一般低温可增加微生物的存活和抑制杂菌的过度生长，但某些微生物如副溶血性弧菌等检验样品，应放置在适宜的温度条件下运送。分离病毒的组织块可放于50甘油缓冲液中（pH8.0），在5条件下运送。怀疑厌氧菌感染或需要进行厌氧菌检验的检样，必要时应使用运送培养基，保持
17、在厌氧条件下运送。分离培养细菌或病毒，若在48小时内检测，保存于4；若在48小时后检测，病毒的标本保存于-70，但原则是尽快检测。寄生虫样本的保存，每份粪便中加入10福尔马林和PVA（聚乙烯醇）存于4。,样品送检,检样采取后立即由专人在2-小时内送实验室检验 应附详细送检单，应填明样品名称、份数、重量、来源、中毒表现、送检时间、检验项目、采样条件（容器是否灭菌、有无封条）、送样人。 并按要求注意冷藏 样品送检人员应与实验室收样或检验人员履行样品交接手续,样品送检,夏季送检样品时，应注意冷藏。不得加入任何防腐剂。 样品必须有牢固的标签，包装严密封闭。 注意生物安全，防止污染，以免影响结果。 采样过程中履行必要的采样手续。（发生中毒单位负责人签封与开具收据等）,谢谢,
