1、HIV实验室检测,实习生：叶贝 2017/4/28,目录,HIV病原学,HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为RNA病毒,HIV核心部分包括两条单股RNA链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）,HIV病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性,HIV病原学,病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA,经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒RNA包裹其中，生成新的HIV,主要侵入T淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染,HIV流行病学,全国呈低流行态势，部分地区疫情严重,HIV主要分为两种HIV-1和HIV-2
2、两型；HIV-1类为全球主要流行类型，分为M、 O、N三个亚型组,HIV传播途径,1、传染源：病人及无症状携带者 血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播,2、传播途径 性传播：同行、异性、双性性接触 母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播 血液制品传播：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等,HIV感染自然史,急性期,艾滋病期,无症状期,初次感染HIV 2-4周，传染性最强 主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征 可检出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置,可持续6-8年，HIV在感染者体内不断复制，具有传染性 可检测HIV及抗体，CD4+ T淋巴续保逐渐下降,HIV
3、感染最终阶段，HIV血浆病毒载量明显升高，CD4+T淋巴细胞200个/ul 主要表现为各种机会性感染及肿瘤,HIV实验室指标,初筛试验+确证试验,HIV检测流程,全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程,初筛试验,筛查,复检,HIV检测流程,全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程,确证试验,确证,仅能检测HIV-1，不能检测HIV-2和HIV Ag，灵敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观,HIV检测流程,初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法，这类方法可以同时检测HIV-1抗体、HIV-2抗体和HIV p24抗原，检测出HIV
4、-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始检测无反应性则无需进行进一步检测,初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗体鉴别试剂进行HIV-1和HIV-2抗体鉴别试验，结果以HIV-1抗体阳性、HIV-2抗体阳性、HIV抗体阳性或无法鉴别来解释,初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经HIV-1核酸检测，HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别无反应性为急性HIV-1感染；HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别试验不明确为HIV-1感染；HIV-1 NAT无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果,联合试验,鉴别试验,核酸试验,美国CDC推荐HIV检测流程 2014修订版,HIV检测,HIV感染
5、后首先检测到HIV RNA,第四代HIV检测试剂检测到HIV p24抗原，为抗原抗体联合检测,第三代及其以前的试剂均为只检测HIV抗体,HIV-1/2/O抗体,HIV-1/2/O抗体+HIV p24抗原,3rd 代抗体检测,核酸检测方法,4th 代抗原抗体检测,周,年,从初始感染后的时间,无症状期,急性期,第一个血清转换窗口期,核酸检测方法,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,罗氏HIV试剂,艾滋病期,缩短检测窗口期，早期诊断,2nd 代抗体检测,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,罗氏HIV试剂,缩短检测窗口期，早期
6、诊断,Elecsys HIV Combi PT阳转时间较PCR 方法平均晚2天，早于或等于其它方法与三种第三代检测方法相比， Elecsys Combi PT 是 1.2 days ，优于Elecsys HIV combi (2.0 days), Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days) and Serodia HIV1/2 (7.8 days).与ADVIA Centaur相比, the Elecsys HIV combi PTs 的检出时间是 0 days ， ADVIA Centarurs (1.0 days).与VIRONOSTIKA HIV Univ-Form
7、 II plus O相比，Elecsys HIV combi PTs 是 1.5 days ，VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus Os (7.5 days).,罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,缩短检测窗口期，早期诊断,5.478 days(Roche, data on file),罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,gp120,gp41/gp36,p17（基质蛋白）,RT(逆转录酶),RNA,P24 抗原是HIV病毒的核心蛋白,HIV-Ag的检测,HI
8、V-Ab的检测,膜蛋白,罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,可识别 所有亚型,罗氏HIV试剂,可识别 所有亚型,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,619,8,472,罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,9 min,9 min,9 min,预处理,裂解出p24抗原,Ag-Ab复合物,磁珠 加入,共27min孵育,测量池检测,夹心法形成免疫复合物,罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,早期感染 血清转
9、换期的检测,不同时期HIV感染病人的检测,高灵敏度,不同亚型的检测,罗氏HIV试剂,第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT,高特异性,罗氏HIV试剂,排除类风湿因子、自身抗体、单克隆丙种球蛋白、EB病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、流感疫苗等非特异性干扰、抗干扰能力强,高特异性,Case分享,罗氏HIV Combi 试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素 淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性，需特别对待,华西案例分析 CASE 1,Case分享,华西案例分析 CASE 2,该患者第1次检测罗氏HIV Combi PT和HIV Combi均为阳性、 ELISA为阴性、 HIV-Ag检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIV Combi PT 和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV- RNA高精分析证实病毒阳性，最终报告为阳性,总结,Doing now what patients need next,
