1、中 国生物制品学杂志 2016 年 4 月第 29 卷第 4 期 Chin J Biologicals April 2016， Vol. 29 No. 4膜抗原荧光抗体法与 ELISA 法检测水痘 -带状疱疹病毒血清抗体的比较张磊，赖文辉，许瑛，李慧敏，包光妍，瞿奔，苏家立，汤妍，张吉凯广东省生物制品与药物研究所，广东 广州， 510440摘要：目的 比较膜免疫荧光抗体法（ fluorescent antibody to membrane antigen， FAMA）与 ELISA 法检测水痘 -带状疱疹病毒（ varicella-zoster virus， VZV）血清抗体的效果 。方法 以
2、 FAMA 法为 “金标准 ”，同时用德国 Serion 定量 ELISA试剂盒检测 184 份血清样本（水痘疫苗免前 92 份 、免后 92 份）的 VZV IgG 抗体滴度，并对两种方法的测定结果进行比较 。结果 FAMA 法检测的阳性率为 64. 7%，抗体几何平均滴度（ GMT）为 1 6. 34， ELISA 法检测的阳性率为47. 8%，平均抗体活性值为 492. 33 mIU ml。ELISA 法的特异性为 100%，阳性符合率（灵敏度）为 69. 7%，阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高（ z = -6. 03， P 0. 001） 。Fisher 精确概率法分析结果显示，抗体
3、滴度 1 8、1 16 和1 32 组与 1 64 组阳性符合率差异均有统计学意义（ P 0. 05），其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义（ P 0. 05） 。ELISA 抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关，相关系数 R2= 0. 656， P 0. 001； Kappa 值为 0. 707，两种方法具有较高的吻合度 。结论 德国 Serion 定量 ELISA 试剂盒在检测低抗体滴度 VZV 抗体时易出现假阴性，在检测高滴度 VZV 抗体时，两种方法敏感性相当； ELISA 试剂盒检测的滴度临界值为 1 8 1 32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群 VZV 抗体水平监测 。关键词：
4、 膜抗原荧光抗体试验；酶联免疫吸附测定；水痘 -带状疱疹病毒；抗体中图分类号： R373. 1 + 2 R392-33 文献标识码： A 文章编号： 1004-5503（ 2016） 04-0425-04Comparison of fluorescent antibody to membrane antigen testand ELISA in determination of serum antibody againstvaricella-zoster virusZHANG Lei, LAI Wen-hui, XU Ying, LI Hui-min, BAO Guang-yan, QU Be
5、n, SU Jia-li, TANG Yan, ZHANG Ji-kaiGuangdong Provincial Institute of Biological Products and Materia Medica,Guangzhou 510440, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: TANG Yan, E-mail: ; ZHANG Ji-kai, E-mail: Abstract： Objective To compare the efficacies of fluorescent antibody to membrane an
6、tigen（ FAMA） test and ELISA indetermination of serum antibody against varicella-zoster virus （ VZV） . Methods A total of 184 serum samples, 92collected before and 92 after immunization with VAV vaccine, were determined for IgG titer against VZV by FAMA（ served as a gold standard） and quantitative EL
7、ISA kit（ Serion, Germany） respectively, and the determination results werecompared. Results The positive rate and GMT of VZV IgG determined by FAMA test were 64. 7% and 1 6. 34, whilethat by ELISA were 47. 8% and 492. 33 mIU ml, respectively. The specificity of ELISA was 100%, while the positivecoin
8、cidence rate（ sensitivity） was 69. 7%. The positive coincidence rate increased with the increasing antibody titer（ z =-6. 03, P 0. 001） . Fisher test showed significant differences in the positive coincidence rates of samples at antibodytiters of 1 8, 1 16, 1 32 and 1 64（ P 0. 05） . The antibody act
9、ivity determined by ELISA was positively related to theantibody titer （ R2= 0. 656, P 100 mIU ml） 、临界值组（ 50 100 mIU ml）和阴性组（ 100 0 0 0 2 11 12 23 11 9 4 7250 100 0 0 2 1 0 5 3 1 2 1 15 50 68 13 3 3 2 3 2 2 1 0 97合计 68 13 5 6 13 20 28 14 12 5 184ELISA 抗体活性（ mIU ml） 总计2. 3 两种方法检测结果的相关性 两种方法检测VZV IgG 抗
10、体的结果呈良好的线性关系，相关系数（ R2）为 0. 656， P 0. 001，见图 1。表明两种方法的检测结果具有相关性 。图 1 FAMA 法和 ELISA 法检测 VZV IgG 抗体的相关性分析Fig 1. Correlation of FAMA test and ELISA in determi-nation of VZV IgG2. 4 两种方法检测结果的阳性符合率 将 FAMA法测定的血清样本按照不同抗体滴度进行分组，观察不同抗体滴度下， ELISA 检测样本的阳性符合率情况 。结果显示，随着抗体滴度的增加， ELISA 检测样本的阳性符合率逐渐升高，且升高趋势显著（ z =-
11、6. 03， P 0. 001） 。Fisher 精确概率法分析结果显示，抗体滴度 1 8 组与其他各抗体滴度组差异有统计学意义（ P 0. 05）；抗体滴度 1 16 组与抗体滴度 1 64 各组差异均有统计学意义（ P 0. 05）；抗体滴度 1 32 组与抗体滴度 1 64 各组差异均有统计学意义（ P 0. 05）；其余各抗体滴度组之间阳性符合率差异无统计学意义（ P 0. 05） 。1 8 1 32可能为该检测试剂盒的临界值范围 。见表 2。表 2 FAMA 法不同抗体滴度下 ELISA 检测方法的阳性符合率Tab 2. Positive coincidence rates by E
12、LISA of samples atvarious antibody titers in FAMA testFAMA 法抗体滴度（ 1 x）样本数 ELISA 检测阳性数 阳性符合率（ %）8 13 0 016 5 2 4032 6 3 5064 13 11 84. 6128 20 17 85256 28 26 92. 9512 14 12 85. 71 024 12 11 91. 72 048 5 5 1002. 5 ROC 曲线 ROC 曲线下面积为 0. 886，面积的标准误为 0. 025， ELISA 法抗体检测结果对于判断抗体的阴阳性具有显著意义（ P 0. 001），根据 ROC
13、曲线各点所对应的灵敏度与 1-特异度的取值，选择Youden 指数（即灵敏度 + 特异度 -1）最大的点作为诊断界点，即 23. 174 8。根据该诊断界点进行 Kappa一致性检验，得到 Kappa 值为 0. 707， P 0. 001。Kappa 值越大，表明吻合程度越高，因此两种检测方法具有较高的吻合度 。见图 2。0. 5 1. 5 2. 5 3. 50. 0 3 02 01. 00. 51. 52. 53. 50. 03 02 01. 0-0. 5Log10FAMA VZV IgGLog10VZVIgG（IUml）y 0 480 x + 0 899R2 0 656427 中 国生物
14、制品学杂志 2016 年 4 月第 29 卷第 4 期 Chin J Biologicals April 2016， Vol. 29 No. 4图 2 ELISA 法和 FAMA 法检测 VZV IgG 抗体的 ROC 曲线分析Fig 2. ROC curve of ELISA and FAMA test for determina-tion of VZV IgG3 讨 论目前国内市场上有各种各样的 VZV ELISA 检测试剂盒，通过在实际工作中的对比研究发现，德国Serion VZV ELISA 试剂盒在特异性 、灵敏度等方面均较好，因此有必要将其与 “金标准 ”进行比较，以进一步确认该试
15、剂盒的性能 。本研究选取 1 12 岁健康儿童 92 名，采集水痘疫苗免前血清样本 92 份，免后血清样本 92 份，分别采用 FAMA 法和德国 SerionELISA 试剂盒检测其 VZV IgG 抗体，并比较两种方法的检测结果，结果证实，在 FAMA 检测低水平抗体滴度时（ 1 32），两者检测的阳性符合率差异有统计学意义（ P 0. 05），德国 Serion ELISA 试剂盒的敏感性不如 FAMA 法，而在检测高水平抗体滴度时（ 1 64），两者检测的阳性符合率差异无统计学意义（ P 0. 05），两者的敏感性相当，阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高 。1 8 1 32 之间可能为
16、德国 Serion ELISA 试剂盒的临界值范围，易出现假阳性的情况，在此范围测得的阳性样本应更加注意存在假阴性的可能 。在 VZV IgG 抗体滴度 1 64时，德国 Serion ELISA 试剂盒完全可取代 FAMA 法检测样本，而当 1 8 抗体滴度 1 32 时，使用德国 Serion ELISA 试剂盒需密切关注假阳性情况的存在，必要时可采用两种方法相结合，既保证准确又可保证效率 。综上所述，德国 Serion 公司定量 VZV IgG ELISA检测试剂盒检测结果准确 、可靠，但与抗体滴度之间存在一定的关系，该试剂盒可投入目前各级基层医疗卫生 、疾病预防控制和抗体检测机构，用于
17、疫苗免疫效果评价和人群 VZV 抗体水平监测 。参考文献 1 BIRLEA M， NAGEL M A， COHRS R J， et al. Varicella-zosterVirus J . Encyclopedia of the Neurological Sciences， 2014， 19（ 6）： 602-608. 2 BIALEK S R， PERELLA D， ZHANG J， et al. Impact of aroutine two-dose varicella vaccination program on varicellaepidemiology J . Pediatrics
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