1、108 检疫 HapyWu尿中 氨基 酮戊酸( ALA)的测定1、实验目的学会用乙酸乙酯萃取对二氨基苯甲醛比色法测定尿中 氨基酮戊酸(ALA)的含量，从而了解铅吸收和铅中毒的诊断。2、实验原理在 PH 为 4.6 及温度为 100的条件下，ALA 与乙酰乙酸乙酶缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显示剂（对二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。3、实验步骤1. 标准曲线的绘制 取具赛比色管 10ml6 支，按下表配置标准色列：试剂 0 1 2 3 4 5 ALA 标准应用液（ml）0.0 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0水（ml） 2.0 1.9 1.
2、7 1.5 1.3 1.0ALA 含量（ug) 0 1 3 5 7 10A.各管中加入 2ml 乙酸缓冲液，0.4ml 乙酰乙酸乙酯，混匀，于沸水中加热 10 分钟，取出冷至室温。B.各管加入 4ml 乙酸乙酯，加塞振摇 1 分钟，离心 5 分钟、取出静置分层。2C.各取乙酸乙酯提取液 2ml 于另外 6 支管中，各管加入 2ml 显色剂，加塞振摇，静置 10 分钟。D.用分光光度计（波长 554） ，以零管作参比，测其吸光度。根据ALA 浓度与吸光度的关系绘制标准曲线。2.尿样测定A.预先测定尿液比重，测得尿样比重为 1.010。B.分别取 1ml 尿样于两支上述一样的管内，各加入水 1ml
3、，乙酸缓冲液 2ml,混匀。其一为样品管，另一为空白管。向样品管中家兔0.4ml 乙酰乙酸乙酯，空白管中加入 0.4 乙酸缓冲液，充分混匀，同时置沸水浴中加热 10 分钟，取出冷至室温。C.按标曲绘制的 BD 进行，以乙酸乙酯作参比，进行比色定量。四实验结果与计算1.标准曲线绘制管号 0 1 2 3 4 5ALA 含量（ug) 0 1 3 5 7 10吸光度 A 0 0.054 0.152 0.242 0.288 0.4792.尿样结果 空白管为 0.022，样品管为 0.110。3带入标准曲线查得样品管中 ALA 含量为 1.83ug。根据尿样比重为 1.010，在正常范围内，故尿中 ALA
4、（mg/L)=样品管中 ALA 含量（ug)=1.83mg/L5实验结论根据铅实验室检测指标值，尿中 氨基酮戊酸(ALA)的诊断值为 8mg/L，因此本实验所用的尿样样品未超标。六实验讨论1.进行比色定量时，为什么样品测定时用乙酸乙酯作参比？原因是标准曲线用的是应用液，可以用零管参比，而测定管中的最大容积为乙酸乙酯，为了最大限度的消除背景吸收等带来的误差，因此选择乙酸乙酯作为参比。2.若鸟样比重不在正常的范围内，测的结果应如何计算此时应先进行校正，采用公式：尿中 ALA（mmol/L）=样品管含量（ug） * 1.030-1.000 * 0.0076 1（尿样） 尿比重-1.000 3.实验过程中应注意哪些在处理数据时，应返回检测一下数据结果是否在此方法的线性范围内，否则会影响实验的准确度；同时因为所用的试剂为有机溶剂，易分解，最好采用近期产品，显色剂宜新鲜配制；取样时应准确量取；离心过程中应注意配平；加入显色剂后应在半个小时内完成比色。
