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AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料).doc

上传人:weiwoduzun 文档编号:2681122 上传时间:2018-09-25 格式:DOC 页数:1 大小:15.50KB
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1、KTApurifier 层析仪使用操作规程1、 开机打开仪器的主电源,打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950 上面的 3 个指示灯完全点亮并不闪烁)。双击桌面上 UNICORN 图标,进入操作界面。2、 准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过 0.45m 的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气 10min。3、 清洗及管道准备首先将 A1 管道放入缓冲液或平衡液,binding buffer 中,将 B1 管道放入高盐溶液中或 elution buffer,在 system control 窗口点击工具栏内的 man

2、ual,选择 pumppump wash basic,选中 A1,B1 管道为 ON, execute。泵清洗将自动结束。4、 安装层析柱在 manual 里选择 pumpflow rate,输入流速 1ml/ml,insert;选择Alarm&monalarm pressure,设置 high alarm(输入填料的耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。待 InjectionValve 的 1 号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。5、 开始纯化:1)等待柱子平衡好了(观察电导 COND,pH 的数值和变化趋势)就准备上

3、样了。此时将紫外调零,选择 Alarm&monautozero,exectue。2)用样品环上:将样品吸进注射器,推掉气泡,从 injectionValve 的 3 号位推入(进样量不得低于样品环的体积的 2 倍)推好后不要取下注射器。在 manual 里选择flowpathinjectionValveinject,execute。3)用泵上样:点击 pause,将 A1 放入样品中,点击 countine,待样品上完后,再将 A1 放入到平衡液中继续清洗柱子。2),3)选择一种方式4)洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在 manual 里选择pumpgradient,按照自己的工艺选

4、择 targetB(100)和 length(10CV)。5)设定收集:选择 Fracfractionation_900,输入每管收集体积,exectue。结束固定体积收集选择 Fracfractionation_stop_900,exectue。6、 清洗泵及卸下层析柱:将 A1 和 B1 入口放入纯水中,启动 pump wash purifier 功能冲洗 A 泵和 B 泵及整个管路。然后再将 A1 和 B1 入口放入 20乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。7、 关闭电源:从软件控制系统的第一个窗口 unicorn manager 点击退出,其他窗口不能单独关闭。然后关闭 AKTA 主机电源,关闭电脑电源。

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