1、ICS 点击此处添加中国标准文献分类号WS中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准WS/T XXXXXXXXX肌钙蛋白 I 检测技术规范technical specifications for detection of cardiac troponin I点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（报批稿）（本稿完成日期：2017-12-20）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 发 布WS/T XXXXXXXXXI前 言本标准按照 GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准起
2、草单位：首都医科大学附属北京安贞医院、北京大学第一医院、中国医学科学院阜外医院、泰达国际心血管病医院。 本标准主要起草人：袁慧、吴小慧、陈曦、丛祥凤、曾小莉、贺建勋、刘岩、徐国斌、贾克刚、卢丹。WS/T XXXXXXXXXII引 言肌钙蛋白（troponin，Tn）复合体是由 TnI、TnT和TnC三个不同亚基组成的调节蛋白，存在于横纹肌胞浆的细丝中，通过结合与释放钙离子调节横纹肌收缩。其中I亚基为肌原纤维ATP 酶抑制亚基，人体组织中存在3 种亚型：心肌型（cardiac troponin I，cTnI）、快骨骼肌型（fast skeletal troponin I, fsTnI）、慢骨骼肌
3、型（slow skeletal troponin I, ssTnI）。cTnI具有高度的心肌特异性，仅存于心肌组织中，可用来鉴别诊断心肌损伤和其它肌肉损伤（如：多发性创伤、以及非心脏手术所致的肌肉损伤等）。cTnI在体内有多种存在方式，可以是游离的cTnI，也可以是与cTnC或cTnT结合成异二聚体或异三聚体。心肌损伤后循环中的cTnI主要以cTnI-TnC二元复合物存在，少量以游离cTnI存在。此外，cTnI分子本身还存在有降解后的片段单体、氧化、磷酸化等多种状态。目前，cTnI的检测方法均基于抗原抗体反应的原理，不同的检测方法由于采用抗体的特异性不同，使得对同一样本的检测值有较大的差异。因
4、此，cTnI检测的标准化首先要求各试剂生产厂商保证所生产的抗体既能识别cTnI的游离单体，又能识别其复合体，且不受磷酸化及氧化形式的影响，另外抗体所识别位点应位于cTnI分子的稳定区域，不受水解影响。cTnI测定始于20世纪80年代中期，早期采用基于多克隆抗体的放射免疫分析法，该方法交叉反应多，灵敏度较低，检出限只能达到4 ng/mL，且耗时达24 h36 h。随后出现基于单克隆抗体的免疫放射分析（immunoradiometric assay，IRMA）和酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），提高了特异性和灵敏度，其检出限为0.
5、 1 ng/mL，但检测的变异系数CV值仍较大，耗时较长。各种检测方法使用针对不同抗原决定簇的cTnI抗体，其免疫反应各自不同，检出限和决定限也不尽相同。各厂家捕获(capture，C)和检测(detection，D)单克隆抗体所识别的抗原决定簇氨基酸残基有所不同。如Abbott Architect(C：87-91，2440；D：4149)、Abbott i-STAT(C：41-49，88-91：D：28-3962-78)、Beckman Access AccuTnI(C：41-49；D：24-40)、Ortho Vitros Eci ES(C：24-40，41-49；D：87-91)。目前，
6、cTnI测定多采用微粒子酶免疫分析法（包括化学发光酶免疫分析和荧光酶免疫分析），进一步提高了测定的正确性和敏感性，其检出限为0.01 ng/mL，CV5%，同时由于全自动化分析仪的运用，cTnI检测的时间缩短在20 min之内。此外，cTnI的床旁检测系统（point of care test，POCT）是其检测方法发展的另一个方向，常用免疫金标技术,将金标记或硒标记单克隆抗体与免疫层析技术相结合，用纸条法可定性或半定量检测cTnI；利用光度计及荧光计辅助检测技术，能定量检测出cTnI的浓度。POCT使用全血标本，减少了中间步骤，缩短了样本周转时间（turn-around time，TAT），
7、常用于AMI病人的急诊筛查。近年来出现了高敏肌钙蛋白（high sensitivity cardiac troponin I，hs-cTnI）检测方法，能检出传统方法不能检测到的cTn（如低至1pg/mL水平），并且该检测方法符合2014年国际临床化学和实验室医学联盟（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, IFCC）的要求，即：至少在50%表观健康人群中可检出cTn并低于该方法的表观健康人群第99百分位数值（切点值），且在表观健康人群第99百分位值（切点值）处的CV10%。不同cTnI检测
8、试剂的第99百分位、10% CV测定值及可接受程度参见附录A。早在1995年，cTnI已成为美国食品及药物管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准的可作为诊断AMI的心脏标志物。国内于二十一世纪初引入cTnI，目前已经在各级实验室广泛使用。为推WS/T XXXXXXXXXIII动国内cTnI检测的实验室技术操作规范化，进一步保证和提高检测结果的质量，充分发挥其临床作用，特编制本标准。WS/T XXXXXXXXX1肌钙蛋白 I 检测技术规范1 范围本标准规定了血浆（清）cTnI 检测的技术操作规范及测定结果的质量监测和临床应用管理。本标准适用于临床实验室,包
9、括床旁检测系统（point of care test，POCT）开展 cTnI的检测。试剂或仪器生产厂商也可参照使用。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。2012年心肌梗死全球统一定义（Third universal definition of myocardial infarction, European Heart Journal, 2012）2015年欧洲心脏病协会关于非ST段抬高型急性冠脉综合征的管理指南(2015 ESC guidelines f
10、or the management of acute coronary syndromes in patients presenting without persistent ST-segment elevation, European Heart Journal, 2015)2015年中华医学会急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南（中华心血管病杂志，2015）2016年中国急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南（中华急诊医学杂志，2016）GB/T 29791.1-2013 体外诊断医疗器械 制造商提供的信息（标示） 第1部分：属于、定义和通用要求(ISO 18113-1：2009，IDT)3 术
11、语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 决定限 determination limit由受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析得出的最佳临界值。3.2 精密度 precision测量精密度通常由不精密度的量度以数字表达，如规定测量条件下的标准差、方差和变异系数。3.3 WS/T XXXXXXXXX2分析灵敏度 analytical sensitivity校准曲线的斜率。横坐标为分析物的浓度，纵坐标为测量信号。斜率越大，分析灵敏度越高。3.4 干扰 interference除了分析物以外，某些其它成分对分析物测量的准确度的影响。3
12、.5 检出限 limit of detection检出限是指产生一个能可靠地被检出的分析信号所需要的某元素的最小浓度或含量。3.6 第 99 百分位值 99th percentile将n个观察值从小到大依次排列，再把它分成100等份，对应于99位的数值即为第99百分位值。4 干扰因素4.1 类风湿因子、人抗鼠抗体、异嗜性抗体会造成 cTnI 免疫检测的假阳性结果。4.2 体内物质如血红蛋白、胆红素、三酰甘油，会造成 cTnI免疫检测的假阴性结果。在样本的转运操作过程中应避免样本溶血，防止血红蛋白及细胞碎片的干扰。严重乳糜血样本可采用高速离心法降低干扰。4.3 生物素会干扰 cTnI免疫检测结果
13、，对于使用生物素-链霉亲和素方法的检测系统，根据原理不同，可能会造成结果偏高或者偏低。4.4 7%11%的 AMI患者及少数正常人血清中含有针对 cTnI蛋白部分的自身多克隆抗体，这些抗 cTnI的自身抗体可能干扰 cTnI的测定，造成假性降低或假性升高。4.5 某些药物如低分子量肝素等可导致 cTnI检测结果的偏低。4.6 心脏外伤、充血性心力衰竭、慢性肾衰竭、糖尿病、癌症化疗等情况下会导致 cTnI检测结果轻度升高。5 样本采集、处理和储存5.1 样本采集5.1.1 遵循静脉穿刺所需的常规注意点来采集静脉血样本。5.1.2 不同抗凝剂的样本和血清样本不应交替检测。抗凝剂对 cTnI测定有一
14、定影响，相对于肝素锂血浆，EDTA 血浆和血清样本都有可能导致 cTnI检测结果偏低。5.1.3 根据试剂生产商的要求使用血浆或血清样本。POCT 可根据要求使用抗凝全血样本。5.2 样本处理WS/T XXXXXXXXX35.2.1 应在采血后 2 h内尽快分离血浆或血清。5.2.2 按采血试管生产商建议的方式进行离心。如为血清样本，在进行离心操作前应待样本凝固。5.2.3 保持试管塞塞紧试管口；避免样品管剧烈震荡，防止溶血。5.2.4 去除所有残余的纤维蛋白和细胞成分，防止结果假性升高。5.2.5 避免血浆中混入红细胞上层的白细胞和血小板。5.2.6 若血清或血浆样本含微粒物，需将浑浊的样本
15、从原来的试管中转移出来，并在测定前重新进行高速离心。5.2.7 血清或血浆冰冻样本需缓慢解冻，且仅可冻融一次，冻融的样本分析前需重新离心。5.3 样本储存5.3.1 在室温（15 30 ）下，样本保存在塞紧的试管内不应超出 2 h。5.3.2 若在 2 h内无法进行测定，应将样本离心后于 28冷藏，并于 24h内测定。5.3.3 若在 24 h内无法完成测定，或需运输样本，应将样本在-20或低于-20的环境下冷冻保存。样本可在 -20的环境中保存 6个月。6 分析系统6.1 仪器应选用测定结果可溯源至国际临床化学和实验室医学联盟（International Federation of Clin
16、ical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC ）参考物质的分析系统。可选用全自动化学发光免疫分析仪或电化学发光免疫分析仪。对于AMI病人的急诊筛查或对样本周转时间有特殊要求的cTnI检测可使用POCT装置。6.2 试剂6.2.1 按试剂生产商推荐的储存温度储存试剂，可持续至标签上所指明的有效期。6.2.2 首次使用后，按试剂生产商推荐的储存温度储存，可保存至生产商声称的开瓶稳定期。6.2.3 若试剂过期或试剂盒受损，则弃用该试剂盒。6.3 校准物和质控物6.3.1 测定 cTnI 使用的校准物应符合如下要求：a)校准物在所选用的仪器、试剂条件下使样品测
17、定结果能溯源至 IFCC 参考物质或国际检验物质研究院参考物质2921（NIST-SRM2921）。b)临床实验室可使用具有溯源性的商业校准试剂盒。6.3.2 测定 cTnI 使用的质控物应符合如下要求；a) 质控物应有良好的长期稳定性，且至少含有两个不同检测水平（高、低值）；b) 质控物应具有高度的均一性；WS/T XXXXXXXXX4c) 质控物具有与样本相同或相似的物理、化学性质，可选用冻干或冰冻质控物。6.4 操作方法6.4.1 安全措施6.4.1.1 血液样本及来源于血液的校准物、质控物有可能含有致病微生物，应避免入口或与皮肤接触。6.4.1.2 应使用合适的消毒剂来消除污染。6.4
18、.1.3 按医疗废物管理条例要求贮存和处理这些物品以及盛放这些物品的容器。6.4.2 测定程序6.4.2.1 参考相应的系统操作手册和（或）帮助系统，以获取安装、启动、操作规章、系统的性能特性、操作说明、校准流程、操作限制及注意事项、危险、保养和故障排除的特定描述。6.4.2.2 所用试剂、耗材应按规定存放，在有效期内使用。不建议使用包装已破损的试剂盒。6.4.2.3 参考相应的系统操作手册和（或）帮助系统，以获取所需最少样本量的信息。6.4.2.4 根据不同试剂生产商的要求定标。6.4.2.5 以 24 h为一个时间段来做质控分析，并同时测定至少两个不同水平（高、低值）的质控物。每个实验室需
19、确立自身适用的均值和允许变异可接受的范围（CV% 10%）以确保合适的测试性能。若质控结果未落在可接受的范围内，表明测量结果失控，应纠正失控，并对自最近一次获得可接受质控测试点以来的测试结果进行验证，以检测结果的准确性。6.5 结果报告6.5.1 样本结果计算的常用单位是 ng/mL，国际系统单位（International System of Units，SI）为 g/L。两种单位在数值上是等同的，如需将样本报告单位 ng/mL更改为国际系统单位 g/L，可直接转换。6.5.2 若样本含量低于检测下限，则以小于该值来报告结果。6.5.3 若样本含量高于校准物的最高规定值，则应以大于该值来报告
20、结果，或用试剂生产商指定的样本稀释液进行稀释，对稀释后结果的报告方式参照试剂说明书。7 技术指标7.1 决定限参照2012年心肌梗死全球统一定义、2015年欧洲心脏病协会关于非ST段抬高型急性冠脉综合征的管理指南和2016年中国急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南：cTnI 以表观健康人群的99%分位作为心肌损伤的决定限。7.2 临界值WS/T XXXXXXXXX5参照2016年中国急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南和2015年欧洲心脏病协会关于非ST段抬高型急性冠脉综合征的管理指南：推荐表观健康人群的99%分位单一决定限作为cTnI最优的判断界值。cTnI高于此界值的ACS患者可认为有心肌损伤和高风险
21、性。7.3 精密度参照2012年心肌梗死全球统一定义，hs-cTnI的检测方法在99%分位值（参考范围上限值）的总不精密度（CV）应不高于10%。7.4 99%分位值各实验室应对所用cTnI检测方法做表观健康人群的99%分位的参考决定限，或者采用文献所给的参考区间并给予验证。7.5 抗干扰能力不同的cTnI检测系统在临床应用之前，实验室应知晓其测定存在的干扰因素，包括类风湿因子、人抗鼠抗体、异嗜性抗体、抗cTnI自身抗体、药物、血红蛋白、胆红素、三酰甘油、其他肌原纤维蛋白。目前研究表明，抗cTnI自身抗体对cTnI检测结果影响有限。某些患者人群可能需要用某种特异的cTnI测定方法或不适宜采用c
22、TnI来反映心肌损伤的程度。cTnI测定与其它肌源纤维蛋白交叉反应试验可参见附录B。7.6 cTnI 的 POCT 系统参照2015年欧洲心脏病协会关于非ST段抬高型急性冠脉综合征的管理指南：目前使用的POCT肌钙蛋白检测大都不是敏感或高敏检测，相比常规检测其敏感性低、诊断准确度差、阴性预测率低，临床对POCT检测阴性的结果应特别注意，必要时应采用更敏感的方法确认。近年来，美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）发布了一系列关于POCT检测的指南和检测标准，以期对POCT的临床应用规范化和标准化，但是目前尚未
23、公布cTnI POCT检测的标准化文件。8 质量控制和保证8.1 应进行内部质量控制及有资质的室间质量评价机构组织的临床检验室间质量评价。8.2 应将 24 h作为一个时间段来加入质控品。且至少要包含两个分析物水平的质控品。8.3 质控品在使用及保存时，需遵循供应商的规定。8.4 质控物测定值应在控制限以内，否则应分析、查找失控原因，直到查明原因并纠正失控，才可发出结果报告。8.5 更换新的试剂、进行新的校准及仪器进行特殊保养后均应重新测定质控物。8.6 对于 cTnI的 POCT系统，其质量控制包括：设备选择、个人操作培训、质量控制、设备维护、对操作人员熟练程度定期核查及确保遵从和记录管理机
24、构的所有规定。9 临床意义WS/T XXXXXXXXX69.1 在解释 cTnI结果时，应参照患者的整体临床情况，包括：症状、病史、临床检查、心电图以及由其他检查所得的数据和其他相应的信息。不应仅凭在一个时间点上的单个cTnI 测定就做出诊断结果。参照 2016年中国急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南：建议动态检测 cTnI（或 hs-cTnI），直至明确临床诊断，后视病情减少检测频率。9.2 急性心肌梗死的诊断：参照 2015年欧洲心脏病协会关于非 ST段抬高型急性冠脉综合征的管理指南和 2016年中国急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南：存在 ACS临床表现，在出现症状后的 24 h内至少有 1 次
25、 cTnI水平超过参考人群的第 99百分位数（总 CV 10 %）所规定的决定限，则提示伴有心肌坏死。应用 hs-cTnI检测方法可早期（急诊后 3 h内）诊断急性心肌梗死。对就诊时首次 hs-cTn检测值虽有升高，但临床表现不够典型，不足以立刻确诊急性心肌梗死的患者，如无排除的充分证据，应在 3h内重复检测 1次 hs-cTnI。如果 2次检测值间的差异20%（或 30%），可确诊急性心肌梗死。如检测值无变化需考虑其他疾病可能。患者在胸痛发作 6 h内就诊，若首次 hs-cTnI检测值低于参考范围上限，需在 3h内重复检测一次 hs-cTnI，如检测值无变化，在排除引起胸痛的其他疾病后，可予
26、以出院，门诊随访；如果两次检测值间的差异20%（或 30%），可确诊急性心肌梗死。对于胸痛发作后超过 6 h就诊的患者，如果首次 hs-cTnI检测值低于参考范围上限，并且此时无胸痛症状，在排除引起胸痛的其他疾病可能，并且患者总体心血管危险评价较低，可予以出院，门诊随访。经上述步骤仍不能排除急性心肌梗死、高度怀疑有临床指征者，或缺血症状再次发作的患者，可于 12 h24 h重复检测。9.3 ACS 危险分层建议：cTnI 是进行 ACS危险分层的首选标志物，如果可行，所有疑为 ACS患者均应进行 cTnI的检测。临床症状符合 ACS的患者，cTnI 峰值超过正常参考人群的第 99百分位数（总
27、CV 10 %），将预示其病死和缺血事件再发率的危险增加。应用 cTnI检测方法可对轻微心肌损伤进行诊断，并提高 ACS危险分层的准确性。9.4 在除外 ACS和心力衰竭（heart failure）疾病以外的应用：非动脉粥样硬化机制如动脉炎、冠状动脉解剖、冠状栓塞和可卡因或安非他明的使用可能会引起急性缺血症状，进而潜在地导致健康个体的 cTnI 水平高于参考范围上限。在长时间高强度运动如马拉松比赛后，人体也可能出现 cTnI 水平生理性升高。9.5 cTnI 的 POCT常用于对急诊病人心肌损伤的早期筛查，其临床意义需经其他定量方法检测结果的确认。WS/T XXXXXXXXX7A A附 录
28、A（资料性附录）不同试剂厂商 cTnI检测试剂 99%分位、10% CV 测定值及可接受程度表A.1 cTnI检测试剂99%分位、10% CV测定值及可接受程度公司/平台/测定法 99%分位（g/L） 10% CV（g/L） 接受指定Abbott AxSYM ADV 0.04 0.16 不可接受Abbott Architect 0.028 0.032 临床可用Abbott i-STAT 0.08 0.1 临床可用Beckman Access Accu 0.04 0.06 临床可用bioMerieux Vidas Ultra 0.01 0.11 不可接受Innotrac Aiol 0.025 0
29、.06 临床可用Inverness Biosite Triage 0.05 NA1 NAaInverness Biosite Triage(r) 0.056 NA1 临床可用Mitsubishi PATHFAST 0.029 0.014 指南可接受Ortho-Clinical DiagnoSTics Vitros ECi ES 0.034 0.034 指南可接受Radiometer AQT90 0.023 0.039 临床可用Response Biomedical RAMP 0.1 0.21 临床可用Roche Elecsys 2010 0.01 0.03 临床可用Siemens Centau
30、r Ultra 0.04 0.03 指南可接受Siemens Dimension Rxl 0.07 0.14 临床可用Siemens Immulite 2500 STAT 0.2 0.42 不可接受Siemens Stratus CS 0.07 0.06 指南可接受Siemnes VISTA 0.045 0.04 指南可接受Tosoh ALA II 0.06 0.09 临床可用Research hs assays bBeckman Access hs-cTnI 0.0086 0.0086 指南可接受Nanosphere hs-cTnI 0.0028 0.0005 指南可接受Singulex h
31、s-cTnI 0.0101 0.00088 指南可接受注 1：表格来源于 http:/www.ifcc.org/PDF/IFCC_Troponin_Web_Page_Table_of_Assays_Oct_2008.pdf；注 2：临床可用：可用于临床 cTnI检测；注 3：指南可接受：符合 2012年心肌梗死全球统一定义要求；注 4：不可接受：不符合临床 cTnI检测要求和 2012年心肌梗死全球统一定义要求。a 信息不足，不明确；b来自公开发表的著作。WS/T XXXXXXXXX8B B附 录 B（资料性附录）cTnI检测与不同肌原纤维蛋白的交叉反应cTnI检测与其它肌原纤维蛋白的交叉反应
32、试验，将每个潜在交叉反应物加入含有大约2 ng/mL纯化cTnI复合物的肝素锂血浆池中，并且做10次复检。本研究按 NCCLS EP7-P进行。有关交叉反应的结果见表B.1。表B.1 cTnI检测与其它肌原纤维蛋白的交叉反应物质 添加的分析物（ng/mL） 交叉反应性（%）骨骼肌钙蛋白 I 1000 0.034心肌钙蛋白 C 1000 -0.002重组人心肌钙蛋白 T 1000 -0.004肌动蛋白（兔） 1000 -0.003肌球蛋白 1000 0.001原肌球蛋白（兔） 1000 -0.008人体肌酸激酶 MB 1000 -0.001肌红蛋白 1000 -0.002WS/T XXXXXXX
33、XX9参 考 文 献1Thygesen K, Alpert JS, Jaffe AS, et al.Third universal definition of myocardial infarction. Eur Heart J,2012,33:2551-2567.2Roffi M,Patrono C,Collet JP,et al.2015 ESC Guidelines for the management of acute coronary syndromes in patients presenting without persisstent ST-segment elevation:
34、Task Force for the Management of Acute Coronary Syndromes in Patients Presenting without Persistent ST-Segment Elevation of the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J. 2016 Jan 14;37(3):267-315.3急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南, 中华心血管病杂志，2015,43(5),380-393 .4急性冠脉综合征急诊快速诊疗指南，中华急诊医学杂志，2016,25(4),397-404.5 GB/T 29791.1-2013 体外诊断医疗器械 制造商提供的信息（标示） 第1部分：属于、定义和通用要求(ISO 18113-1：2009，IDT)6 Willeman T, Casez O, Faure P, Gauchez AS. Evaluation of biotin interference onimmunoassays: new data for troponin I, digoxin, NT-Pro-BNP, and progesterone.Clin Chem Lab Med. 2017 Aug 28;55(10):e226-e229._
