1、中国现代医学杂志China Journal of Modern MedicineVol.33 No.17Sept.2023第 33 卷 第 17 期2023 年 9 月MicroRNA-29a与冠心病心绞痛患者血管内皮损伤及斑块不稳定性的相关性*林红丽，张雪菲，彭慧，黄倩倩，张月辉青岛市中医医院（青岛市海慈医院）干部保健科，山东 青岛 266033摘要：目的探讨microRNA-29a（miR-29a）与冠心病心绞痛患者血管内皮损伤及斑块不稳定性的相关性。方法连续纳入2020年4月2022年6月于青岛市中医医院住院的冠心病患者120例，入院后均完善冠状动脉CT血管成像检查，测定冠状动脉斑块CT
2、值，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测外周静脉血循环miR-29a表达，通过酶联免疫吸附试验检测血管内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）、内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-（TNF-）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）水平，根据miR-29a中位数（miR-29a=1.13）将患者分为高miR-29a组及低miR-29a组，分析两组患者冠状动脉斑块稳定性、外周静脉血中血管内皮活性物质表达及炎症指标变化。结果两组患者临床基本资料无差异，具有可比性；高miR-29a组的ESM-1、ET-1、NO、TNF-均高于低miR-29a组（P 0.05）；斑块不稳定患者m
3、iR-29a水平高于斑块稳定患者（P 0.05），不稳定型心绞痛患者miR-29a水平高于稳定型心绞痛患者（P 0.05）；软斑块患者miR-29a mRNA相对表达量高于纤维斑块和钙化斑块患者（P 0.05）；Pearson相关性分析结果显示，miR-29a与ET-1、TNF-及ESM-1呈正相关（r=0.471、0.605和0.328，P=0.000、0.041和0.000），与NO呈负相关（r=-0.291，P=0.034）。结论miR-29a与冠心病心绞痛患者冠状动脉血管内皮损伤及斑块不稳定性具有相关性，miR-29a表达越高，血管内皮损伤可能越严重，斑块不稳定性风险越大。关键词：冠心
4、病；microRNA-29a；血管内皮损伤；不稳定斑块中图分类号：R541.4 文献标识码：ACorrelation between microRNA-29a and vascular endothelial damage and plaque instability in patients with coronary heart disease and angina pectoris*Lin Hong-li,Zhang Xue-fei,Peng Hui,Huang Qian-qian,Zhang Yue-huiDepartment of Cadre Health,Qingdao Tradit
5、ional Chinese Medicine Hospital(Qingdao Haici Hospital),Qingdao,Shandong 266033,ChinaAbstract:Objective To investigate the correlation of microRNA-92a(miR-92a)with endothelial vascular injury and plaque properties in patients with coronary heart disease and angina pectoris.Methods A total of 120 pat
6、ients with coronary heart disease who were admitted to the Department of Cardiovascular Medicine in our hospital from April 2020 to June 2022 were consecutively enrolled.After admission,coronary artery imaging examinations were completed,the CT values of coronary plaques were measured,and peripheral
7、 venous blood was drawn from the patients.Circulating miR-29a levels were detected by real-time fluorescent quantitative PCR,and endothelial cell-specific molecule-1(ESM-1),endothelin-1(ET-1),nitric oxide(NO),the levels of tumor necrosis 临床研究 论著DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2023.17.014文章编号：1005-8982（
8、2023）17-0084-05收稿日期：2023-03-10*基金项目：山东省自然科学基金青年项目（No：ZR2020QH237）；青岛市民生科技计划项目（No：14-2-3-23-nsh）通信作者 张月辉，E-mail：；Tel：18563920866 84第 17 期 林红丽，等：MicroRNA-29a 与冠心病心绞痛患者血管内皮损伤及斑块不稳定性的相关性factor-(TNF-)and intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1).According to the median of miR-29a(miR-29a=1.13),patients w
9、ere divided into high miR-29a group.In the low miR-29a group,the stability of coronary plaques,the expression of vascular endothelial active substances in peripheral blood and the changes of inflammatory indexes were analyzed.Results There was no significant difference in basic clinical data between
10、 the two groups,and they were comparable;ET-1,TNF-,ESM-1 in the high miR-29a group were significantly higher than those in the low miR-92a group;comparison shows that the level of miR-29a in patients with unstable plaque is significantly higher than that in patients with stable plaque(P 0.05),and th
11、e level of miR-29a in patients with unstable angina is significantly higher than that in stable plaque patients with angina pectoris(P 0.05);patients with soft plaques had significantly higher levels of miR-29a than those with fibrous plaques and calcified plaques(P 0.05);Pearson correlation analysi
12、s indicated that miR-29a was associated with ET-1(r=0.471,P=0.000),TNF-(r=0.605,P=0.041)and ESM-1(r=0.328,P=0.000)were positively correlated,but negatively correlated with NO(r=-0.291,P=0.034).Conclusion miR-29a was associated with coronary artery disease in patients with coronary heart disease vasc
13、ular endothelial injury and plaque stability are correlated.The higher the level,the more severe the vascular endothelial injury and the greater the risk of plaque instability.Keywords:coronary disease;microRNA-29a;vascular endothelial injury;unstable plaque既往多项研究证实，microRNA-29a（miR-29a）参与机体多系统疾病如肾小
14、球病变1、脓毒症2、神经元细胞凋亡3等；动物实验证实，敲除 miR-29a 小鼠出 现 蛋 白 尿，且 肾 小 球 损 伤 及 肾 脏 纤 维 化 程 度 加剧1。临床数据表明，早期脓毒症患者外周血中检出 miR-29a 表达明显上调，是潜在的诊断脓毒血症的生物标志物，可能也具有预测脓毒症患者临床预后的价值2。随着研究的深入，发现 miR-29a 参与冠心病发生、发展，是临床诊断冠心病的有益生物学标志物，与健康对照组相比，miR-29a 在冠心病患者中表达增加，且参与冠心病病情进展，影响患者心功能，分析机制可能与 miR-29a 影响机体炎症反应有关4。笔者回顾文献发现，miR-29a 对冠心
15、病的影响可能与其参与冠状动脉粥样斑块的发生、发展有关。查晴等5发现，冠状动脉粥样斑块中 miR-16 的表 达 显 著 上 调，进 一 步 的 病 理 学 机 制 研 究 发 现，miR-16 促 进 血 管 内 皮 炎 症 反 应，加 剧 泡 沫 细 胞 凋亡。目前针对 miR-29a 与斑块稳定性及冠脉血管内皮损伤的相关性研究尚属空白，阐明 miR-29a 参与上述病理过程的机制能够为临床治疗冠心病提供新的分子靶点。1 资料与方法1.1研究对象连续纳入 2020 年 4 月2022 年 6 月于青岛市中医医院心血管内科门诊住院的冠心病患者 120 例。其中，男性 68 例，女性 52 例；
16、年龄 4681 岁，平均（59.038.27）岁。纳入标准：患者符合冠心病诊断6；首次诊断冠心病且自愿入组；稳定型心绞痛定义为特定劳力状态下导致胸闷和（或）胸痛等症状；不稳定型心绞痛。排除标准：合并急性心肌梗死（包括急性 ST 段抬高型心肌梗死和非 ST段抬高型心肌梗死）；存在抗血小板、调脂等药物治疗禁忌证；合并其他系统恶性肿瘤、严重肝肾功能不全等不适宜入组疾病；既往接受过冠状动脉介入治疗；临床资料不完整；存在先天性心脏病、反复且难以控制的心力衰竭及其他累及心血管系统的疾病；虽有冠状动脉血管病变，但平素无心绞痛等临床症状；妊娠或哺乳期妇女。所有患者自愿入组，入组前获得充分知情同意，并签署知情同
17、意书。本研究经医院医学伦理委员会审查批准（No：20221014002）。1.2检测方法1.2.1 样本收集 抽取受试者禁食 12 h 后外周静脉血，3 000 r/min 离心 5 min，收集上层血清用于实时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），同时抽取禁食 12 h 后静脉血用于检测血脂水平。1.2.2 qRT-PCR检测miR-29a表达 取冻存血清室温完全解冻后加入
18、TRIzol 试剂提取总 RNA，通过紫外分光光度仪在波长 260 nm 处检测总 RNA 浓度和 纯 度 合 格4，备 用 实 验。应 用 miScript Reverse Transcription Kit 逆转录试剂盒（美国赛默飞世尔科技 公 司）构 建 cDNA 文 库，应 用 TaqMan Fast Advanced Master Mix 试剂盒（美国赛默飞世尔科技公 85中国现代医学杂志 第 33 卷 司）进 行 qRT-PCR，配 制 总 体 积 为 20 L 的 反 应 体系：包括 5 L cDNA，10 L Master Mix，正向引物和反应引物各 1 L（上海生工生物工程
19、股份有限公司），3 L RNA-free水。反应条件：95 预变性10 min，95 变性 15 s，60 退火 1 min，共 40 个循环。以U6 为内参基因。miR-29a 正向引物：5-CGCGGATCCATGGTTAAAGAGCC-3；反向引物：5-CCCAAGCTTTCAGTATAACCATTC-3，引物长度 23 bp；U6 正向引物：5-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3；反向引物：5-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3，引 物长度 25 bp。miR-29a mRNA 相对表达量的计算方式为 2-Ct，每个样本均重复检测 3 次，取平均值。
20、1.2.3 ELISA 法 检 测 内 皮 细 胞 特 异 性 分 子-1（endothelial cell specific molecule-1,ESM-1）、内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、一氧化氮（nitric oxide,NO）、肿瘤坏死因子-（tumor necrosis factor-,TNF-）、细胞 间 黏 附 分 子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）取 1.2.1 中血清，采用 ELISA 法检测内皮细胞 ESM-1、ET-1、NO、TNF-、ICAM-17，检测试剂盒均购自上海西唐生物科技有限公司。1
21、.2.4 实验室检查 抽 取 受 试 者 空 腹 静 脉 血 约5 mL 送检至本院中心实验室，检测低密度脂蛋白胆固 醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘 油 三 酯（Triglycerides,TG）及 血 肌 酐（serum creatinine,Scr）。1.2.5 冠状动脉 CT 血管成像检查评估冠状动脉粥样硬化斑块性质 根据冠状动脉 CT 血管成像评价冠
22、状 动 脉 粥 样 硬 化 斑 块 的 稳 定 性7，计 算 斑 块 CT值，其中 CT 值 60 HU 为软斑块，60 HU CT 值1.13的患者归为高 miR-29a 组（59 例），外周血 miR-29a mRNA1.13 的患者归为低 miR-29a 组（61 例）。根据患 者 斑 块 性 质，将 患 者 分 为 软 斑 块（51 例）、纤 维斑 块（37 例）及 钙 化 斑 块（32 例）。根 据 斑 块 稳 定性，将患者分为斑块稳定组（82 例）与斑块不稳定组（38 例）。根据患者临床表现将患者分为稳定型心绞痛组（74 例）与不稳定型心绞痛组（46 例）。1.4统计学方法数据分析
23、均采用 SPSS 25.0 统计软件。计量资料以均数标准差（xs）表示，比较用 t 检验或方差分析；计数资料以构成比或率（%）表示，比较用 检验；相关性分析用 Pearson 法。P 0.05）。高 miR-29a 组 与 低 miR-29a 组 的 NO、ET-1、ESM-1、TNF-及 ICAM-1 水 平 比 较，经 t 检验 或 检 验，差 异 均 有 统 计 学 意 义（P 0.05），高miR-29a 组 的 NO、ET-1、ESM-1、TNF-及 ICAM-1水平高于低 miR-29a 组（P 0.05）。见表 1。2.2miR-29a 与斑块稳定性、不稳定型心绞痛及斑块性质的关
24、系qRT-PCR 结果显示，稳定斑块组与不稳定斑块 组 miR-29a mRNA 相 对 表 达 量 分 别 为（1.420.51）、（2.090.33），经 t 检 验，差 异 有 统 计 学 意 义（t=4.933，P=0.000）；不斑块稳定组外周血 miR-29a mRNA 相对表达量高于斑块稳定组。qRT-PCR 结果显示，不稳定型心绞痛组与稳定型 心 绞 痛 组 miR-29a mRNA 相 对 表 达 量 分 别 为（2.270.41）、（1.580.36），经 t 检验，差异有统计学意义（t=5.656，P=0.000）；不稳定型心绞痛组外周血miR-29a mRNA 相对表达
25、量高于稳定型心绞痛组。qRT-PCR 结果显示，软斑块组、纤维斑块组、钙化 斑 块 组 的 miR-29a mRNA 相 对 表 达 量 分 别 为（2.410.43）、（1.940.29）、（1.250.27），经方差分析，差异有统计学意义（F=4.053，P=0.000）。软斑 86第 17 期 林红丽，等：MicroRNA-29a 与冠心病心绞痛患者血管内皮损伤及斑块不稳定性的相关性块组外周血 miR-29a mRNA 相对表达量高于纤维斑块组及钙化斑块组（P 0.05）。2.3miR-29a与冠状动脉血管内皮因子的相关性Pearson 相关性分析结果提示，miR-29a 与 ET-1、
26、TNF-及 ESM-1 呈 正 相 关（r=0.471、0.605 和0.328，P=0.000、0.041 和 0.000），但 与 NO 呈 负 相 关（r=-0.291，P=0.034）。3 讨论血管内皮损伤是指内皮功能或正常形态受到损 伤 时 出 现 功 能 障 碍 及 变 形，导 致 机 体 炎 症 反应、血 栓 聚 集、氧 化 应 激 及 血 管 收 缩 等 病 理 过 程显 著 加 强，也 是 动 脉 粥 样 硬 化 的 始 动 因 素。持 续的内皮细胞损伤最终导致动脉粥样硬化9-11，因此探讨影响血管内皮损伤的机制有利于降低动脉粥样 类 疾 病 的 病 程 进 展 和 恶 性
27、事 件 风 险。孙 定 军等12研 究 发 现，miR-29a-3p 调 控 细 胞 凋 亡 等 病 理生理过程，抑制 miR-29a-3p 降低了 ox-LDL 所致的血 管 内 皮 细 胞 氧 化 应 激 和 凋 亡，以 上 结 果 提 示 临床通过靶向干预 miR-29a-3p 治疗动脉粥样硬化类疾 病 有 理 论 基 础 支 撑。本 研 究 则 从 临 床 病 例 出发，探 讨 了 miR-29a 在 冠 心 病 心 绞 痛 患 者 中 的 表达变化，及其与血管内皮损伤程度、斑块稳定性、心 绞 痛 发 作 情 况 的 相 关 性，为 后 续 开 展 基 因 靶 向治疗提供理论基础。本研
28、究结果显示，高 miR-29a 组 ESM-1、ET-1、NO、TNF-均 高 于 低 miR-29a 组；且 miR-29a 与ET-1、TNF-及 ESM-1 呈正相关，与 NO 呈负相关。说 明 循 环 miR-29a 水 平 可 能 是 反 应 冠 状 动 脉 血 管内 皮 损 伤 程 度 的 指 标，提 示 miR-29a 可 能 具 备 潜在 的 损 伤 冠 脉 血 管 内 皮，加 剧 病 程 进 展 的 不 利 影响因素，与既往研究结果一致13。比较可知，斑块不 稳 定 患 者 miR-29a 水 平 高 于 斑 块 稳 定 患 者，不稳 定 型 心 绞 痛 患 者 miR-29
29、a 水 平 高 于 稳 定 型 心 绞痛 患 者；软 斑 块 患 者 miR-29a 水 平 高 于 纤 维 斑 块及 钙 化 斑 块 患 者，结 果 提 示 高 水 平 miR-29a 提 示患 者 有 更 多 的 心 血 管 事 件 风 险，能 够 帮 助 临 床 医师 在 诊 治 过 程 中 识 别 高 危 患 者，积 极 给 予 综 合 干预措施，降低不良心血管事件发生风险。综上所述，miR-29a 与冠心病患者冠脉血管内皮 损 伤 及 斑 块 不 稳 定 性 具 有 相 关 性，miR-29a 表达 越 高，血 管 内 皮 损 伤 可 能 越 严 重，斑 块 不 稳 定性风险越大。后
30、续笔者将开展相关研究探讨干预miR-29a 对 冠 心 病 的 影 响，为 临 床 转 化 提 供 理 论依据。表 1两组患者临床资料及实验室指标的比较组别高 miR-29a 组低 miR-29a 组t/值P 值n5961年龄/（岁，xs）57.426.3858.057.490.4950.621男/女/例37/2231/301.7270.203高血压 例（%）39（66.10）44（72.13）0.5110.555糖尿病 例（%）18（30.51）23（37.70）0.6910.445高脂血症 例（%）14（23.73）17（27.87）0.2680.679组别高 miR-29a 组低 miR
31、-29a 组t/值P 值NO/（mmol/mL，xs）92.0710.2675.4613.287.6490.000ET-1/（pg/mL，xs）69.269.3458.387.916.8940.000ESM-1/（ng/mL，xs）4.071.532.450.976.9510.000TNF-/（pg/mL，xs）3.960.841.810.5916.2690.000ICAM-1/（pg/mL，xs）494.8294.55325.71101.689.4290.000组别高 miR-29a 组低 miR-29a 组t/值P 值LDL-C/（mmol/L，xs）2.980.743.170.931.2
32、360.219HDL-C/（mmol/L，xs）1.260.491.310.570.5150.608TG/（mmol/L，xs）1.840.611.720.591.0950.276TC/（mmol/L，xs）5.181.374.951.450.8930.374Scr/（mol/L，xs）81.5411.6675.8114.251.1380.257 87中国现代医学杂志 第 33 卷 参 考 文 献：1 李慧,王鑫,王向东,等.miR-29a 基因敲除对 C57BL/6 小鼠肾小球 结 构 和 功 能 的 影 响 J.中 国 病 理 生 理 杂 志,2022,38(5):884-892.2 胡氏
33、亮,贺婉晶,江锐,等.外周血 miR-10a 和 miR-29a 水平对早期脓毒症急诊患者预后有预测作用J.内科急危重症杂志,2022,28(3):211-214.3 吴琳,邱建维,黄灵芝.miR-29a 调控 Wnt/-catenin 信号改善癫痫大鼠学习记忆能力并减少神经细胞凋亡的机制J.中国老年学杂志,2022,42(8):1946-1950.4 孙玉敏,李绒.冠心病患者血清 miR-21、miR-29a 表达水平与心电图 QRS 波时限相关性分析J.陕西医学杂志,2021,50(6):713-716.5 查晴,于晨溪,刘亚,等.miR-16 在冠状动脉粥样硬化斑块进展中的作用及初步机制
34、研究J.诊断学理论与实践,2021,20(1):82-87.6 刘万车.冠状动脉粥样硬化性心脏病的命名及诊断标准J.中国社区医师,1989(1):11-13.7 李慧敏,苏振琪,谢伟,等.血清 GGT 水平与冠心病患者斑块稳定性、血管内皮损伤及炎症应激反应的相关性分析J.临床和实验医学杂志,2021,20(15):1603-1607.8 高连辉,徐冰,宋微.多层螺旋 CT 血管造影对冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的诊断价值J.河南医学研究,2022,31(16):3028-3031.9 林艾雯,陈竹君.动脉粥样硬化与内皮细胞损伤机制的研究进展J.岭南心血管病杂志,2015,21(4):580-58
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