1、文档下载 免费文档下载http:/ NPV 生物学特性及室内增殖研究_曲良建本文档下载自文档下载网，内容可能不完整，您可以复制以下网址继续阅读或下载：http:/ 2011 年 11 月第 30 卷第 6 期35春尺蠖 NPV 生物学特性及室内增殖研究1121*曲良建，王玉珠，陶婧，张永安（1中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室，北京 100091；2西北农林科技大学，陕西杨凌 712100）AciNPV）是春尺蠖的主要摘要：春尺蠖核型多角体病毒（Apocheimacinerariusnucleopolyhedrovirus，病原微生物。该文研究了 AciN
2、PV 的形态结构和室内生物活性，及 AciNPV 室内生产过程中的适宜感染浓度、感染虫龄和感染温度，从而为该病毒今后的商业化生产和应用提供借鉴。关键词：春尺蠖；核型多角体病毒；增殖；生物活性中图分类号：S763.42文献标志码：B文章编号：16710886（2011）06003503文档下载 免费文档下载http:/ （KeyLabofForestProtectionofStateForestryAdministration，theResearchInstituteofForestEcology，EnvironmentandProtection，CAF，Beijing100091，China）
3、Abstract：ApocheimacinerariusnucleopolyhedroviruswasanimportantpathogeninfectingApocheimacin-erariusErschoffThemorphologicalcharacterandbioassayofthevirusaswellastheappropriateinoculationconcentration，infectioninstarsandtemperatureformultiplicationinthelabwerestudied，whichwoulhttp:/ 春尺蠖 Apocheimacine
4、rariusErschoff 又名杨尺沙枣尺蠖。国内主要分布于新疆、青海、甘肃、陕蠖、西、宁夏、内蒙古、河北、天津、河南、山东等地区，国12。近年外主要分布于前苏联和中亚细亚地区由于全球气候的变化，单树种人工林大面积种来，植，再加上不同地区间交流贸易日益频繁，春尺蠖相继在新疆、青海、内蒙古和西藏等地区大面积发生，严重威胁当地的自然景观和生态环境。春尺蠖核型多角体病毒（Apocheimacinerariusnucleopolyhedrovirus，AciNPV）是春尺蠖的重要病原微生物，对春尺蠖具有较好的控制效果，且能够在寄主种群中形成流行病进而长文档下载 免费文档下载http:/ AciN-P
5、V 的生物学特性和增殖技术，以期为该病毒将来的产业化生产和应用提供借鉴。111试验材料AciNPV 毒株由中国林业科学研究院森收稿日期：20110710基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费（CAFRIF200715） ；林业行业专项（200704003）作者简介：曲良建（1977） ，男，河南南阳人，助理研究员，硕士，主要从事林业害虫生物防治研究。*通信作者：E-mail：Zhangyabcafaccn程技术有限公司提供。12 方法 121取室内冰箱保存7的 AciNPV 毒株，以 3.010PIB/mL 的浓度感染健http:/ 室内增殖与纯化康的 3 龄初春尺蠖幼虫。5d 后收集具
6、有典型病毒死亡症状的病死虫尸，研磨匀浆后 3 层纱文档下载 免费文档下载http:/ AciNPV。用血球计数板方法计数后贴上标签在 4冰箱中保存备用。1.2.2取适量 AciNPV 用蒸馏水悬浮，经涂片、干燥和喷金后在 DMS6360LZAciNPV 的电镜观察型扫描电镜下观察多角体形态。AciNPV 多角体超薄切片的制备及投射电镜观察方法见参考文3 。献林生态环境与保护研究所生物防治研究室保存，春尺蠖试虫及试虫人工饲料由北京中林恩多威生物工361.2.3ForestPestandDiseaseNov2011No6AciNPV 室内生物活性测定取纯化后的7AciNPV 多角体悬浮液，1.0依
7、次稀释为 1.010，106，1.0105，1.0104，1.0103PIB/mL5 个浓度另设 1 组蒸馏水对照，每个处理 50 头，重复 3 梯度，文档下载 免费文档下载http:/ 200L 的病毒液，48 自然晾干后每个养虫杯放入健康 3 龄幼虫 10 头，h 后更换无病毒新鲜人工饲料，培养箱温度设置为（180.5），光照 14h。逐日记录不同处理幼虫死亡数，试验数据用 EXCEL处理分析。1.2.4AciNPV 室内增殖技术研究 1.2.4.1虫龄与病毒产量相关性试验取纯化后7的 AciNPV 多角体并稀释至 1.010PIB/mL，分别图 1AciNPV 多角体扫描电镜图（1000
8、0）3，4 龄春尺蠖幼虫，感染 2，每个龄期幼虫 50 头，重复 3 次，培养箱温度控制在（190.5），光照 14h。分别收集不同龄期感病虫体20条件下试验结束后计算不同龄期幼虫单头 http:/ 产毒量。保存，1.2.4.2 感染浓度与病毒产量相关性试验分别71.0106，1.0105PIB/mL3 种浓度用 1.010，文档下载 免费文档下载http:/ AciNPV 感染 4 龄春尺蠖幼虫，每种浓度 50 头，重复 3 次，温度及光照条件同 1.2.4.1。分别收集图 2 表 1 浓度 PIB/mL1.01071.01061.01051.01041.0103 对照（蒸馏水）AciNPV
9、 多角体透射电镜图（60000）AciNPV 感染春尺蠖 3 龄幼虫死亡率与机率值供试虫数/头 505050505050平均死亡率/?.4079.7367.9032.0021.335.00校正死亡率/?.1578.6666.2128.4217.19机率值 6.65465.79615.41794.42904.0537不同处理的感病虫体20条件下保存。试验结束后计算不同处理的幼虫单头产毒量。1.2.4.3温度与病毒产量的相关性试验在 4 组（220.5） ， （270.5） ，不同温度下（170.5） ，（320.5）用相同浓度（1.0107PIB/mL）的AciNPV 感染 4 龄春尺蠖幼虫，每
10、个温度 50 头，重复 3 次，试验结束后分别收集感病虫体20条件下保存并计算不同处理的幼虫单头产毒量。22.1文档下载 免费文档下载http:/ 室内增殖技术研究 AciNPV 适宜感染虫龄AciNPV 形态观察从扫描电镜可以看到，AciNPV 多角体多为近三角形，少数近圆形或不规则形，表面有的光滑，有的呈现层状，个别有杆状凹窝，其直径在 0.421.89m 之间，平均为 1.201.45AciNPV 为单核衣壳多 m（图 1） 。透射电镜表明，角体病毒（Singlenucleocapsidpolyhedrosisvirus，http:/ 在春尺蠖幼虫 4 龄时接种 AciNPV 获得的病毒
11、多角体产量最大，为 2.76109OBs/头，约为幼虫 2 龄时接种的产量的 53 龄幼虫的 3 倍（表 2） 。在春尺蠖幼虫 2 龄和 3 倍，龄时接种 AciNPV，虽然幼虫死亡率较高，但由于幼虫虫体较小，死亡时间相对较快，病毒增殖时间相对较少，从而导致病毒产量较低。因此，生产中可采用感染 4 龄幼虫进行病毒的增殖，以便获得理想的病毒产量。表 2感染龄期 234感染虫龄与 AciNPV 增殖量的关系平均死亡率/092.5280.25多角体增殖总量文档下载 免费文档下载http:/ 505050SNPV） ，多角体中包埋着多个杆状病毒粒子，病毒粒子大小约为（1527）nm（125225）nm
12、，在多角体中呈零散无规则排列状（图 2） 。2.2AciNPV 室内生物活性春尺蠖幼虫对 AciN-PV 敏感，幼虫感染浓度与死亡率正相关，其浓度对数值与死亡机率值的回归方程为：y=0.6569x 1.9858（r=0.99） ，感染 3 龄幼虫的致死中浓度为 3.88105PIB/mL（表 1）。2.3.2AciNPV 适宜感染浓度7用 1.010PIB/mL中国森林病虫 2011 年 11 月浓度接种 4 龄春尺蠖幼虫时收获病毒多角体的产量9文档下载 免费文档下载http:/ 3.0010OBs/头，幼虫死最高，亡率为 92.68%（表 3） 。此外，从表中还可看出，不因此，生同处理之间病
13、毒多角体产量差别不是很大，67产过程中可采用 1.010PIB/mL1.010PIB/mL 的浓度作为适宜的感染浓度。第 30 卷第 6 期3http:/ 在生产和大面积应用过程中也存在一定是，问题，主要体现在生产和林间大面积推广应用方面。1）AciNPV 生产中的技术瓶颈。春尺蠖1a 发以蛹在土中越夏、越冬，直至翌年 2 月或 3 生 1 代，月才羽化出土。春尺蠖这一特性极大限制了 AciN-PV 的室内连续生产和林间大面积应用。因此，如何解除春尺蠖蛹期滞育，实现 AciNPV 室内连续规模化生产已成当务之急，也是生产中迫切需要解决的问题，这对 AciNPV 将来的产业化生产和春尺蠖的可持续
14、控制具有重要意义。2）AciNPV 推广应用中的技术瓶颈。昆虫病毒作为一类重要的微生物杀虫剂，具有寄主单一，对环境和人畜安全，持续控害效果明显等优点，但同时也如杀虫速度慢，易受有生物杀虫剂普遍具有的缺点，文档下载 免费文档下载http:/ AciNPV 和其它生物杀虫剂的剂型开发研究，研制出抗逆性强、效果稳定且易于使用的新剂型也是目前生产中迫切需要解决的难题。参考文献：表 3感染浓度 1.01071.01061.0105感染浓度与 AciNPV 增殖量的关系平均死亡率/?.6877.8252.23多角体增殖总量108OBs1502.171418.551306.62平均含量108OBs/头 30
15、.0428.3726.13供试幼虫/头 5050502.3.3AciNPV 适宜增殖温度温度过低或过高均不利于病毒的增殖。病毒适宜增殖温度应控制在 22左右，此时单头幼虫产毒量可达7.47108OBs/头（表 4） 。试验中发现，温度较高时，多数幼虫干缩而死，说明高温对春尺蠖幼虫的生长发育及病毒的增殖具有一定抑制作用；而温度过低，对幼虫的生长发育也具有一定抑制作用，亦不利于病毒的增殖。文档下载 免费文档下载http:/ 4:/ 50505050温度与病毒增殖量的关系平均死亡率/?.6897.8083.4792.75多角体增殖总量108OBs103.57373.50357.5582.38平均含量
16、108OBs/头2.077.477.151.651萧刚柔中国森林昆虫M 北京：中国林业出版社，1992：8908912余昊，王登元，王运兵，等春尺蠖种群空间格局的地质统计学2006，21（3）：303306分析J 云南农业大学学报，3杨苗苗，李孟楼，曲良建，等南华松叶蜂病毒 DnNPV 的发现J 林业科学，2007，43（7）：138141及其毒力测试4李兴龙，孟化民春尺蠖 ApocheimacinerariusErschoff 种群质量文档下载 免费文档下载http:/ 内蒙古林业科技J ，1995（3）：与抗 AciNPV 毒力的关系27325齐跃强核多角体病毒（AciNPV）防治杨树春尺
17、蠖试验J 陕2006（2）：5052西林业科技，6张永安，王贵成，徐保民，等新疆和田地区利用 AciNPV 病毒2002（2）：2022防治春尺蠖试验报告J 新疆林业，3 讨论昆虫病毒作为一类防治和调控害虫种群数量变动的重要微生物杀虫剂，在害虫综合治理中占有重要地位。随着人们生活水平的提高和对生态环境的关注，该类生物杀虫剂越来越受到人们的青睐。AciNPV 作为防治春尺蠖的理想生物杀虫剂，已广泛（责任编辑王瑞红）櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔（上接第 27 页）5刘文爱，范航清 http:/ 南宁：广2009西科学技术出版社，6兰星平m*/v 指标在判断昆虫种群空间分布型中的应用J 1992，28（4）：386388林业科学，文档下载 免费文档下载http:/ 北京：科学出版社，1994：221348李开仁，邵崇斌，戴建昌华山松大小蠹空间格局及最佳模型西北林学院学报，1997，12（增）：7179的研究J（责任编辑赵杰）文档下载网是专业的免费文档搜索与下载网站，提供行业资料，考试资料，教学课件，学术论文，技术资料，研究报告，工作范文，资格考试，word 文档，专业文献，应用文书，行业论文等文档搜索与文档下载，是您文档写作和查找参考资料的必备网站。文档下载 http:/
