1、粘蛋白在结石性胆囊炎中的变化及意义第 14 卷第 2 期9A02 年 2 月第一军医大学ACrAACADFMIAEMED1CINAEMII 胛 ARIS【ER11AEVo24.No2Feb.2 舯 2197文章编号 t000.5404(2D02)2)19703粘蛋白在结石性胆囊炎中的变化及意义陈东风,郑伟.易萍(第三军大学附属大坪医院野战外科研究所消化内科重庆4OOO42)论着提要:日的探讨不同类型粘蛋白在结石眭胆囊炎胆囊粘膜的表达规律及结石形成的可能关系=方法采用粘蛋白 1fMucinl,MUCI),粘蛋白 2(MUC2)及粘蛋白 3(MUC3)的单克隆抗体,应用免疫组化方法检测对照组胆囊
2、24 倒,胆固醇结石和胆红素结石胆囊粘膜 54 倒及 38 例结果 MUCI 在对照组,胆固醇结石组,胆红素结百组阳眭率分别为 47.1%(0/24)50%(27/54)605%(22/38);MEC2 分别为 21%(5/24),40.7%(22./54),50%r19/38);MUC3 分别为75%(18/24,29.6%(16/54).211%(8/38)一结论粘蛋白与胆囊结石发生有一定关系.关键词:粘蛋白;结石陛胆囊炎中图法分类号:R36425;R3943;R575.6 文献标识码:ARoleofmucininthecalcareouscholecystitisCHENDong-fel
3、rg,ZHENGWei,YIPing(parI 腿 ntofm岫 Ik 啊.【ngHrf,pitM,Thirdb4ilitaryMediUnivemitv,Chongqing400042ChinaAIa“acttObjectivesToinvestiagetherellarrulesofmucinsexpressioninmueosaoflithiecholeeystJtisanditsr2latiomhipwitht-aleulusfnrmation.Me【I1odsMucinI(MUcMuch.(MUC2)andMucir3(MUC3)wr2detectedinthemlJ(+osaofh
4、umannortnalbaddel(24c 拙一),oflbladderthdmlestem】culus(54)andofgallbladderwithbilintbincalciumgallstone(38cfl-8jthimmmmahisteehemicalrespectiey.Beau 峙 1_hpositNedeteaionra 嗡of,1uc1.MUC2andMLc3in1113133al;Albladfferw 晰 471%(10/24),21%(5/24)an(J75%(】8,24)respectively;the).w,gre50%(27/54),40.7%(22,54)and
5、29.6(16,54)inmlloOsglofgallbladderswithchomteroJ(:aleulusrespeelivdy;andtheywe2.605%(22/38).50%(19/38Jand211%(8/38Jjnbilirubialctalculusofga1bladdelwithrespectively.Goaclu.sion,fuciusmavberelatedtocholeeystitisandrmaticmofdifferentb3zescholecystdithiasisKeywords:mtin:】ithiccholeeystitis粘蛋白(Mucin,MUC
6、)是由腺上皮细胞合成和分泌的一种高度糖基化,高分子量的糖蛋白.广泛分布于人类胃肠道,呼吸道,胆囊上皮细胞也可分泌粘蛋白,是组成胆囊粘液的主要成分,起保护和润滑作用.关于牯蛋白与胆囊结石的关系,既往研究较少,我们对不同种类胆囊结石胆囊粘膜 MUC1.MUC2.MUC3 的变化进行研究,探讨粘蛋白与胆囊结石,胆囊炎的关系.1 材料和方法1.1 研究对象按文献1对胆固醇结石和胆红素结石标本进行筛选.患者均为我院_9000436 一-20014)1 患胆石症择期手术者,其中胆固醇结石 54 例.胆红素结石 38 例:对照组 24 例,标本取白胆囊息肉手术患者,取材远离息肉 l 一 2cm,或因肝胆管结
7、石手术行胆囊切除的标本对照组标本均经 HE 染色证实无明显炎症,增生及化生一12 试剂MUC1,MUC2,MUC3 单克隆抗体购自深圳晶美生物公司,抗体工作浓度为 1:80.AEC 染色试剂盒也购自深圳晶美公司1.3 病理学观察常规 HE 染色,光镜观察.基金项目:同寡自然科学基岳资助项目(390作者简介陈采风(1964 一),男.重庆涪陵.博士,副主任师,副教授主要出事肝脏损伤与修复胆石症厦潲化秆研究.筮表论文 46 篇.电话:cOZ)6875734.2收精日期 2L.I5.幛叵日篝 l:2t.69.2314 免疫组织化学染色操作步骤按蔡文琴法进行:主要步骤为:百蜡切片.常规脱蜡至水;过氧化
8、氢,牛血清白蛋白室温孵育 15min,PBS 诜 2x3mint4%胃蛋白酶消化 15min.PBS 洗 3x5mint一抗(MUCI,MUC2 或 MUC3)37孵育 30min,PBS 诜 4x5nfin;生物素标记的二抗室温孵育 10rain.PBS 洗 4x5min;三抗室温孵育 10min,PBS 洗 4x5min;AEC 染色;37 下燥箱干燥后封片,光镜观察:以免疫组化预实验中发现的表达稳定的阳性切片作阳性对照.以 PBS 缓冲液代替一抗作阴性对照阳性结果判断:胆囊腺体表或细胞内出现棕黄褐红色的均质或颗粒样物质.15 统计学分析所得数据采用 sPss 统计软件 (80)进行检验2
9、 结果2.1 光镜观察结果所有结右胆囊粘膜均有程度不同的炎症变化:2.2MUGl,MUC2,及 MUC3 在胆囊炎不同病理备件下的表达,见表 l表 1MUCI1MUC2 及 MI.3 在不同结石胆蠢粘膜表选Tab1ExpnsslonofMUCIMU0andMUC3indifferentokareottsdHdecnmoa198 第三军医大学第 24 卷221Muc1 韵表达对照组 24 倒 MUC!阳陆表达率4l7%(10/24),柱状细胞表面分布较多,胞浆内呈颗粒状乃至片状分布,胞桉内无表达54 例胆固醇结石胆囊标本 MUC1 表达阳性率 50%(27/54)阳性表达多忙于柱状细胞和粘膜表面
10、.呈均质状,部分在胞浆内呈弥漫细颗粒状38 例胆红素结石标本 MUCI 阳眭率 606%(22/38),粘蛋白表达主要位于腺腔表面,柱状细胞和杯状细胞的粘蛋白表达及分布无差异.见图 lA:222MUC2 的表达对照组中阳性表达仅占 5 例.为 21%(5/24),MUC2 粘蛋白呈颢粒状分布于胞浆中,个别标本在粘膜表面有阳性表达总体观察,在对照组 MEC2 表达较弱.胆同醇结石 MIlC2 表达阳性率为 40.7%22/54),位于柱状上皮细胞胞浆内,少数也可见于细胞表面,呈弥漫颗粒状和均质状,着色强度较对照组高胆红素结石组阳眭率 50%(19/38),主要位于柱状细胞浆内,细胞表面也有少许表
11、达,呈颗粒状但不均质.而杯状细胞MUC2 表达较弱,甚至不表述,见图 lB.2.23MUC3 表达情况对照组胆囊粘膜标本阳陛表达慷例(75%),MUC3 表达分布弥散,粘膜表面无阳眭表达物.胆固醇结石组 MUC3 表达阳性率 296%(16/56),分布较对照组更为弥散.染色较浅.胆红素结石组阳性率 21%(8/38),分布及特征与胆固醇结石组相似,见图 1CBA:MUC1;B:MUC2;C:U 凸围 1MUC 在胆虹膏结石胆羹粘膜寝选(AEcx200)f1Expr0fMUCintee.micnmeomlwithbiliruMniecalculus(AEC 2O03 讨论粘蛋白广泛分布于人胃肠
12、道,呼吸道及子宫内膜表面,胆囊也可分泌较多粘蛋白,它是胆囊粘液的重要组成部分,除润滑及保护作用外,还参与细胞间通讯,维持细胞极性,抗原递呈及淋巴细胞活化等作用.粘蛋白迄今发现 9 种,分别被命名为 MUC1.9,胆囊内仅有部分表达,其与胆囊炎及结石形成的关系研究较少既往对 MUCI,MUC2 研究主要集中在胃肠道,它们与胃肠道肿瘤的发生有一定关系,同时都表现为下调表达,而在人乳腺组织癌变过程中则为上调表达=这提示 MUC1,MUC2 在不同组织中有不同的表达规律,起着不同的作用.对照组胆囊粘膜 MUC1 和MUC2 皆有表达,主要分布于柱状细胞胞浆内,而CMUC1 同时也存在于细胞表面,这种区
13、别可能与 MUC1是跨膜性粘蛋白,而 MUC2 则为分泌性粘蛋白有关.MUC2 与 MUC1 相比,在对照组胆囊标本上表达阳性率明显低,且阳性颗粒的数量少,显色强度弱,提示MUC2 可能不是正常胆囊粘膜分泌的主要粘蛋白.与生理状况下胆囊粘膜的润滑保护作用关系较小.MUC1,MUC2 在任何一种结石的胆囊粘膜中表达阳性率明显升高,但 MUC1 仅在胆红素结石组有显着性差异(P0.05),MUC2 在两种结石组均有显着性升高(P0.05),胆红素结石组升高相对更明显.粘蛋白结构中低聚糖侧链约占其组份的 75%,具有粘弹性及凝胶状性质,它可发挥润滑保护胆囊粘膜上皮的作用,但流动性差,可能会为结石形成
14、的成核过程提供背景,同时粘蛋白结构中糖基区和疏水区,使其粘蛋白形成多聚体,发生结构交联,形成多相不均匀成核环境,为第 2 期陈东风,等.粘蛋白在结石性胆囊炎中的变化及意义 199胆固醇单水结晶及胆色素聚积起重要作用,进而形成结石:本研究发现结石胆囊牯膜 MUCI,MUC2 表达增加,阳性颗粒数量增加,着色加深,且 MUC2 在结石组时除胞浆内存在,细胞表面也有阳胜反应.说明MUC1,MUC2 在结石状态下合成和分泌显着增加,提示粘蛋白与胆囊结石形成有密切关系.不同结石种类,MUC1 和 bl1.JC2 表达阳性率尽管无显着性差异 ,但胆红素结石组表达阳性率较胆固醇结石组稍高,分析其原因可能与胆
15、固醇结石形成主要与胆固醇过饱和密切相关,粘蛋白在胆固醇结石成石过程中只是促进因子,而对胆红素结石.粘蛋白的过度分泌,多聚体结构交联为胆红素聚积形成结石可能更为重要“.从病理学观察可看出,所有存在结石的胆囊,都有炎症反应的变化.炎症明显者,胆囊上皮化生多者,MUCI,MUC2 表达较多,提示炎症与粘蛋白分泌异常有一定关系,但其确切的关系尚不明确.MUC3 主要分布于肠道,且在炎症及恶性转化时表达明显增加.胆囊内是否有 MUC3 表达,既往研究尚不肯定.我们发现,MUC3 在正常胆囊粘膜不仅存在而且比 MUC1,MUC2 表达阳性率还高,提示 MUC3可能是正常胆囊粘膜上皮细胞分泌的主要粘蛋白.正
16、常胆囊粘膜三种牯蛋白不同的表达阳性率,提示它们在正常状况下牯蛋白基因表达是不同步的.有趣的是,MUC3 在肠道炎症时表达明显升高,而在胆囊结石胆囊炎症时与 blUE1 和 MUC2 表达阳性率明显增高不同,MUC3 反而显着下降(P0.01),结合病理观察发现,炎症越重 MUC3 表达越少,其原因可能为:MUC3分子量大,它容易诱导结石成核作用,在结石形成过程中,大量消耗了 MUC3,使其在胆囊上皮细胞胞浆及表面 MUC3 减少.由于 MUC3 是正常胆囊粘液的主要成分,在炎症或已形成结石的刺激下.MUC3 基因表达g:疆 g 兰毒蛙【上接 196 页)下调,使得原不易聚积和交联的粘蛋白发生变
17、化,打破相对平衡,从而启动了结石形成过程.但胆囊结石时 MUC3 表达阳性率明显下降的原因尚不明确.粘蛋白与结石形成及胆囊炎症之问关系较为复杂,推测可能系多种原因引起粘蛋白大量分泌,分子结构变化,导致或促进了胆囊结石的形成,而结石又刺激粘膜炎症的发生,腺体增生,进一步导致粘蛋白分泌改变,使结石逐渐变大,但它们之间的确切关系尚需进一步研究.参考文献1裘法祖主编外科学M 北京:人民生出版社,1996.551552.2蔡文琴,王伯 云主编实用免疫细胞化学与枝酸分子杂交技求M成都 :四川科学技术出版杜.1994496497.【3JVandenhtteB,B,aisiueMP,DebailleulV,a
18、/.M:ineex“nninIithdialJJHepaw1.1997.27(6):1057 一 l0664Bol*uec,GmrdusG,(raL.a/.AItt 一 ofMI 啦.MUCA-arMUCSACmueingenesinpmleaeas【d】fJ.Gastroentemlogy.1994,106(7):1o5oi061.5JMctckinMA,WalskMD.HdmBG,d.州 w6ofMUC1dMucinqinbm 一目 LJHP,J995.26(4):432439【6MadridJF,HernandF,BaliJ.Charat:lerizatiofeoptaeiinltill
19、lialcellsof1 衄帅舳 darnH】angallMlderAmwewlJMiercTeeh,1997,38(6):61663O.【7JKoCW,LeeSP.Gaude 如侧 Ion,localfathom】JGastr,-temlainNorthAnt,1999,28(1):99l15.18JNune*DP.AfahalNH,OffnerGD.Adr1 帅 IbovineIbleddermucln 卵 bind*lybPi 出 andacle 吲 chdeHappeaT 孤 .e【lme【JJ.6|slr0 朗 I 目.1999.I164):936 942【9HoSB,Sltekel
20、sLL,TcdbaraNW,AlteredMucingtidea 唧.嘲帆 inacuandchroniccholstifs【JJ,DigDisSci,2000,45(6):1061107I.嚣趣 t 盛;瀣蓝蕊|箍矗 t中图法分类号:R527104断:本组病例中 15 例有明确的肾或肾外结核病史多数病倒病程长呈反复进行性加重的尿路刺激症状,血尿及长期腰部不适等.此外需对声像图进行仔细观察,单纯性囊肿壁清晰,薄而光滑,结核空洞性无回声壁厚不清晰;肾实质内小占位性病变形态较规则单发多见,而酐酪坏死病灶形态不规则.常多发;单纯性肾积水时无回声区边缘清晰光滑,而结核所致者由于肾盂肾盏粘膜纤维增生,无
21、回声边缘回声强,不规则;结核钙化灶多位于实质内,而结石则多位于肾盂内.总之,肾结接的超声及 x 线诊断正确率均较低,但超声因其价廉,无创,可重复等优点,在仔细观察声像图的同时密切结台临床,注意与其它常见病鉴别,在肾结核的诊断中,仍不失为一种较好的彰像诊断法.关键词:B 超;X 线;肾结接参考文献(编辑谢义霞)活,帮矗矗鞠 0.:文献标识码:BI张学文,于惠元.肾结枝声像和病理类型的关系J中国超声压学杂志,1988.4(1):11122王正滨,袁梅 ,范玉英.等肾结核的超声显像诊斯与分型的进步探讨J中华超声影像学杂志,1997,6(4):2202223JDasKM.VaidyanaS.RmA.da/R,maltubereuosls:diagno-sisw1 山 sonographicdlyguidedspirationcytology【 JJAJRAmJRoent-genol,1992,t58(jt5715734程瑞萍,王怀禄 .赵夏夏,等肾结核的 B 型超声诊斯J.中华超声影像学杂志,1995,4(2):83 一吕 45王育勤,脖丽霞 .顾淑春,等 B 型超声诊断肾结核与 x 线肾造影及肾扫查对比分析J 白求恩医科大学,1999,2-5(3):325(编辑王红)
