1、 1目 录中文 摘要 3英文摘要 6主要符号说明 9文献综述 11一、NK 细胞的生物学功能 11二、NK 细胞系的建立及其在过继免疫治疗中的应用 12三、IL-15 在 NK 细胞发育分化中的重要作用 .13四、基因修饰 NK 细胞系的建立 .14参考文献 .15研究报告1 前言 202 材料和方法 212.1 主要实验材料 212.2 主要仪器设备 263 主要实验方法 274 实验结果 364.1 人 IL-15 基因修饰的 NKL 细胞系的建立 364.2 IL-15 基因修饰对 NKL 细胞系增殖 、凋亡和细胞周期的影响 364.3 IL-15 基因修饰对 NKL 细胞系体外杀伤活性
2、的影响 384.4 IL-15 基因修饰的 NKL 细胞对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制作用 395 讨论 40附录 42参考文献 52攻读学位期间取得的研究成果 56致 谢 572TABLE OF CONTENTSAbstract (Chinese) 3Abstract (English).6Symboly .9Review.111 Biological function of NK cells.112 Establishment of the NK cell line .123 Importance of IL-15 in the differentiation and development o
3、f NK cells134 Establishment of gene-modified NK cell line.14References.15Research paper1 Introduction.202 Materials and Methods.212.1 Reagents 212.2 Apparatus.263 Experimental methods .274 Results364.1 Establishment of the hIL-15 gene-modified NKL cells.364.2 Improvement of proliferation and anti-ap
4、optosis in the hIL-15 gene-modified NKL cell line .364.3 Enhancement of natural cytotoxicity against hepatocarcinoma in hIL-15 gene-modified NKL cells 384.4 Enhancement of natural cytotoxicity against hepatocarcinoma in hIL-15 gene-modified NKL cells in vivo.395 Discussion 40Appendix42References52Pu
5、blications56Acknowledgement573摘 要目的NK 细胞作为机体固有免疫的重要组成部分是机体抗肿瘤、抗感染的第一道天然防线。其杀伤功能的出现不需要预先刺激或致敏，无 MHC(组织相容性复合物)限制性。NK 细胞不仅能够介导对肿瘤细胞的天然杀伤作用，还能够调节特异性和非特异性免疫应答。过继转输活化的或同种异体的 NK 细胞，已经应用于白血病和某些实体肿瘤的治疗中。白细胞介素-15（IL-15）由多种组织和细胞亚群产生，与 IL-2 在功能上有许多相似之处，可以诱导 CD34+的细胞分化为 NK 细胞，并且能够促进 NK 细胞的增殖，增强 NK 细胞的杀伤活性。我们已经建立
6、了 IL-15 基因修饰的 NK-92 细胞系，证实 IL-15 的基因修饰能够增强 NK-92 细胞对多种肿瘤的杀伤能力。与 NK-92 细胞相比，NKL 细胞有着不同的杀伤谱，比如，NKL 对于人胃癌细胞系 SGC7901 的杀伤能力强于 NK-92 细胞，因此可以作为 NK-92 的重要补充。NKL 细胞系由 Robertson 等建立，来源于 CD3-CD16+CD56+的大颗粒淋巴细胞白血病患者的外周血。NKL 依赖于 IL-2 生长，具自然杀伤活性和ADCC 效应，其增殖反应也与正常的 CD16+CD56dim NK 细胞相似。NKL 是NK 细胞系中与原始 NK 细胞最为相近的，
7、因此成为过继免疫治疗的又一重要选择。本文建立了稳定转染 hIL-15 的 NKL 细胞系，证明 IL-15 基因修饰的 NKL细胞具有更强的增殖、抗凋亡和对肝癌细胞的杀伤作用，并初步探讨了其分子机制。方法1. 电转将 IL-15 基因稳定转染入 NKL 细胞系。2. CTLL-2 增殖分析测定细胞培养上清中 IL-15 的生物学活性。3. 酶联免疫吸附分析测定细胞培养上清中 IL-15 的浓度。4. RT-PCR 检测三种 NKL 细胞中凋亡相关基因和杀伤相关基因的表达水平。5. CCK 方法用于分析三种 NKL 细胞在不同浓度 IL-2 和 IL-15 条件下的增殖水平。46. 流式细胞术检
8、测三种 NKL 细胞凋亡、周期以及膜表面 NKG2D 和 NKG2A分子的表达。7. MTT 方法检测三种 NKL 细胞的细胞毒作用。结果1. 建立了稳定表达人 IL-15 的基因修饰 NKL-IL15 细胞系。2. IL-15 基因修饰的 NKL 细胞在低剂量 IL-2 和 IL-15 条件下具有更强的增殖活性。3. IL-15 基因提高 NKL 细胞系的抗凋亡作用。4. IL-15 的基因上调 NKL 细胞系中抗凋亡基因的表达。5. IL-15 基因对 NKL 细胞系的细胞周期没有明显影响。6. IL-15 基因修饰的 NKL 细胞在体外对肝癌细胞具有更强的杀伤活性。7. IL-15 基因
9、上调 NKL 细胞杀伤相关分子的表达。8. IL-15 基因修饰的 NKL 细胞在体内能够有效抑制肝癌细胞的增殖。结论NK细胞作为固有免疫的重要组成部分，是抵御病毒感染和肿瘤细胞的第一道防线，由于无需抗原预先作用，就可直接杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞，因此，在肿瘤免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。应用NK细胞系成为肿瘤生物治疗的重要手段，其中NK-92细胞已经进入期临床试验。为了克服NK细胞系在应用中的某些不足，基因修饰已经成为增强NK细胞杀伤活性的主要手段。迄今为止，已有IL-2 ，IL-15 ，SCF，CD20等多种基因用于修饰 NK-92细胞，取得重要进展。为了获得临床应用的NK细
10、胞株，我们成功建立了IL-15基因修饰的NKL 细胞株，IL-15 基因修饰的NKL 细胞株在低剂量IL-2和IL-15条件下表现出更强的增殖能力，并且在无血清饥饿状态下表现出较强的抗凋亡作用。进一步研究表明，在IL-15 基因修饰的NKL细胞中，抗凋亡基因 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1表达水平显著升高，凋亡基因Bim、Noxa、Fas 的表达水平则降低。更为重要的是 NKL-IL-15细胞不仅在体外能够有效杀伤肝癌细胞HepG2、H7402、PLC/PRF-5，亦能显著增强体内对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制作用。这种抗肿瘤效应与NKL-IL15细胞 IFN-、 FasL和Perforin基
11、因的表达水平提高相关。因此，人IL-15基因修饰的5NKL细胞的生物学特征更有利于临床过继免疫治疗的应用。关键词：基因转染；IL-15；NK 细胞；NKL 细胞系6ABSTRACTObjectiveNatural killer (NK) cells are a key component of the innate immune system that is involved in the early defense against virus-infected or transformed cells by non-major histocompatibility complex (MHC)
12、-, non-T-cell receptor (TCR)-restricted mechanisms. NK cells not only mediate spontaneous anti-tumor effector functions but also regulate innate and adaptive immune responses. Adoptive transfer of activated or allogeneic NK cells is effective in the treatment of certain types of leukemia and solid t
13、umors. Given the importance of NK cells to immunity, a variety of approaches have been taken to try and selectively augment NK cell responses to tumors, including genetic modification.The cytokine interleukin- 15 (IL-15) is present in a wide variety of tissues and cell types, and shares many biologi
14、c activities with IL-2 and can directly induce CD34+ cells to differentiate into NK cells in the absence of IL-2. This cytokine is also a potent regulator of NK cell proliferation, survival and cytolytic activity. In previous work, we have reported that IL-15 gene-modified NK-92 cells exerted more e
15、fficiency against cancer but extensive utilization of this gene-modified human NK-92 cell line is limited by its tumor spectrum.Compared with primary NK-92 cells, NKL cells appear to have a different anti-tumor spectrum. NKL is one of six malignant NK cell lines that have currently been established
16、and are sufficiently well characterized. The NKL cell line was established from the peripheral blood of a patient with CD3-CD16+ CD56+ large granular lymphocyte (LGL) leukemia and grows in the presence of IL- 2 at a concentration of 100 U/mL. Among all the NK cell lines, NKL is probably the one that
17、 has retained the most original features of NK cells and could therefore potentially be used as effector cells in adoptive immunotherapy. In this report, the human (h) IL-15 gene was stably transfected into NKL cells. 7We analyzed the characterization of hIL-15 gene-modified NKL cells and investigat
18、ed the molecular mechanisms for IL-15 gene modification in improving the proliferation, anti-apoptosis activity of NKL cells and enhancing the natural cytotoxicity against hepatocarcinoma cells.Methods1. Electroporation: electroporation was used to transfer hIL-15 gene into NKL cells.2. CTLL-2 proli
19、feration assay: CTLL-2 proliferation was used to detect biologic activity of IL-15 in the culture supernatants.3. ELIAS: ELISA was performed to detect the concentration of IL-15 in the culture supernatants.4. RT-PCR assay: RT-PCR was used to analysis the expression of apoptosis-associated genes and
20、cytotoxicity-associated genes in NK cells.5. CCK: CCK was used to determine the proliferation of NK cells in different concentration of IL-2 or IL-15.6. FACS: FACS was used analysis the cell apoptosis, cell cycle, the expression of NKG2D and NKG2A.7. MTT: MTT was used to determine the cytotoxity of
21、NK cells against hepotocarcinomar cells.Results1. hIL-15 gene-modified NKL cell line was successfully established.2. The proliferation of hIL-15 gene-modified NKL cells was increased with low levels of IL-2 or IL-15.3. hIL-15 gene increased the anti-apoptotic effect of NKL cells.4. Anti-apoptosis ge
22、ne expression was up-regulated in hIL-15 gene-modified NKL cells.5. No detectable change of cell cycle was shown in hIL-15 gene-modified NKL cells. 6. The cytotoxicity of hIL-15 gene-modified NKL cells against hepatocarcinoma cells was significantly enhanced in vitro.7. The cytotoxicity-associated g
23、ene expression in hIL-15 gene-modified NKL cells 8was up-regulated.8. The cytotoxicity against hepatocarcinoma cells by hIL-15 gene-modified NKL cells was augmented in vivo.ConclusionNK cells play a crucial role as a first line of defense against virus infection and tumor cells, and have been used a
24、s a strategic weapon in cancer cell therapy and hematopoietic stem cell transplantation, through activation of endogenous NK cells and adoptive transfer of in vitro-activated autologous NK cells or permanent NK cell lines among which the NK-92 cell line has already finished clinical trials. To creat
25、e more effective NK cells against human tumors, we have established hIL-15 gene-modified NKL cells with many original features of NK cells. Investigations have demonstrated that the hIL-15 gene modification has improved the NK cell proliferation potential at low concentrations of IL-2 and IL-15, and
26、 NKL-IL15 cells proliferate even in the absence of IL-2, with less apopototic cells by serum starvation. Furthermore, with the improvement of antiapoptosis in IL-15 gene-modified NKL cells, the antiapoptosis gene Bcl-2, Bcl-xl and Mcl-1 expression was significantly increased and accompanied apoptosi
27、s gene down-regulation (Fas, Bim and Noxa). Interestingly, natural cytotoxicity against hepatocarcinoma cells was significantly augmented in the IL-15 gene-transferred NKL cells. NKL-IL15 cells could inhibit the proliferation of hepatocarcinoma cells in vitro and in vivo. The mechanisms were associa
28、ted with higher expression of IFN-, FasL and perforin in IL-15 gene-modified NKL cells than that in parental cells. These results indicate that IL-15 gene modification of NKL cells enhances their suitability for large-scale production in vitro and the IL-15 gene-modified NKL cells maybe more suitabl
29、e for clinical application.Key Words: gene transfer, interleukin-15, natural killer cells, NKL cell line9主要符号说明英文缩写 英文全称 中文NK natural killer 自然杀伤（细胞）IL-2 interleukine-2 白细胞介素-2IL-15 interleukin-15 白细胞介素-15ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay 酶联免疫吸附分析RT-PCR reverse transcripte-polymerase chain rea
30、ction逆转录多聚酶链反应mRNA messenger RNA 信使 RNAOD optical density 光密度IFN- interferon gamma 干扰素TNF- tumor necrosis factor alfa 肿瘤坏死因子 FACS Fluorescence activated cell sorter 流式细胞术cDNA complementary deoxyribonucleic acid 反转录脱氧核糖核酸PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液DMSO dimethyl sulphoxide 二甲基亚砜EDTA ethylene
31、diamineetetracetic acid 乙二胺四乙酸MTT measurement of trititaed thymidine 四甲基偶氮唑蓝rpm rotate per minute 每分钟转速bp base pair 碱基对dNTP deonicleoside triphosphate 脱氧核苷酸FBS fetal bovine serum 胎牛血清DEPC diethylpyrocarbonate 焦炭酸二乙酯CD cluster of differentiation 分化群KDa kilo dalton 千道尔顿TE Tris-Ethylenediamine terraace
32、tic acid 三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸PE phycoerythrin 藻红蛋白10MHC major histocompatibility complex 主要组织相容性复合体RNA ribonucleic acid 核糖核酸Taq Taq DNA polymerase DNA 聚合酶11文献综述一、NK 细胞的生物学功能NK 细胞首先发现于上世纪 70 年代初，Herberman RB 等人在研究 T 细胞对靶细胞的特异性杀伤时发现正常人外周血中存在可以自然杀伤某些癌细胞的淋巴细胞，由于这些细胞的杀伤功能的出现不需要预先免疫或致敏，无MHC(组织相容性复合物)限制性，故取名为自然杀
33、伤细胞（natural killer cells, NK cells） 。人类 NK 细胞由骨髓造血干细胞发育而来，约占外周血淋巴细胞的 10%-15%。通常将 CD56+、CD16+ 、 CD3-、TCR-、BCR-的淋巴样细胞认为是 NK 细胞，因其胞体大、胞浆量多、电镜下观察胞内含有致密颗粒，故又称为大颗粒淋巴细胞。NK 细胞的发育成熟为非胸腺依赖性，也无抗原特异性受体的表达，因而被认为是一种固有免疫细胞，具有天然的以及淋巴细胞因子活化的细胞毒活性，可以分泌具有免疫调节功能的细胞因子，且具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性（ADCC） 。NK细胞作为机体固有免疫的重要组成部分是机体抗肿瘤、
34、抗感染的第一道天然防线。NK细胞分布于机体全身，无T细胞所具备的CD3和TCR，以MHC非限制方式杀伤肿瘤细胞1,2。NK细胞在体内针对病毒感染细胞和肿瘤细胞的免疫应答, 不需要特异抗原的刺激, 免疫复合物和靶细胞表面结构均可直接诱发NK细胞的免疫反应，NK细胞的CD16分子（FcR 低亲合力受体）对免疫复合物或针对IgG 的ADCC 效应搭起了NK细胞与B细胞协同作用的桥梁。NK细胞被激发的第一个反应是迅速分泌大量的细胞因子（IFN-、TNF- 、GM-CSF、 IL-3、 M-CSF等）, 产生这类细胞因子的主要意义在于调节吞噬细胞的功能，一旦NK细胞的活性被抑制，吞噬细胞的数量及功能都将
35、大幅度下降3,4。NK细胞的杀伤功能可以被多种细胞因子强化，这些细胞因子包括IFN-，IFN-，IFN- ，IL-2 等5-13 。随着对 NK 细胞生物功能及活化机制的了解，NK 细胞在造血干细胞/ 骨髓移植的辅助治疗及肿瘤过继免疫治疗方面的作用倍受关注。最近在异基因造血12干细胞移植的动物实验和临床观察均中发现，供者异源反应性 NK 细胞可促进植入、可以攻击宿主白血病细胞发挥移植物抗白血病(graft-versus-leukenila，GVL)效应，并清除供者 APC、阻止 T 细胞激活，减少移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease，GvHD)的发生14-16 。同
36、时，体外研究发现异源反应性 NK 细胞对肾细胞癌和黑色素瘤也有裂解细胞活性，同时异源反应性 NK 细胞也有抗实体瘤作用。故 NK 细胞在造血干细胞/骨髓移植的辅助治疗及肿瘤过继免疫治疗方面的作用倍受关注，输注供者异源反应性 NK 细胞已经成为临床移植辅助治疗及抗肿瘤生物治疗的新策略17,18。二、NK 细胞系的建立及其在过继免疫治疗中的应用NK细胞是机体重要的免疫细胞，临床试验显示NK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤具有良好的应用前景。但NK细胞体外扩增效率低，因此建立NK细胞系成为肿瘤生物治疗的重要手段。随着细胞克隆化技术的不断成熟，现已建立6种来自NK细胞瘤的NK细胞系，它们是经过单克隆化、可以永
37、久生存的大颗粒淋巴细胞，含有嗜苯胺蓝颗粒，胚系TCR 基因，其免疫表型为：CD1-CD2+CD3-CD4- CD5-CD7+CD8 -CD16-CD56+CD57-，TCR- ，TCR- ，染色体在数量上和结构上均发生变化，具有NK活性，有/无ADCC 效应，EBV+/-。这6种NK细胞系分别为：NK-92，NKL，YT ，HANK-1, KHYG-1, NK-YS19。NK-92 是由Gong等20 于1992年建立的依赖IL-2的 NK细胞系，来源于一名50 岁患有快速侵袭性非何杰金氏淋巴瘤的男性患者的外周血。患者的骨髓被大颗粒淋巴细胞浸润，骨髓和外周血的淋巴细胞免疫表型为CD56+CD2
38、+CD57+ CD3-。尽管缺少CD16，但它仍具有高度的细胞毒活性，能杀伤大多数的MHC-I类抗原阳性的肿瘤和新鲜分离的恶性细胞，尤其是造血系统来源的恶性细胞21-25。由于NK-92 具有高强度、广谱的细胞毒活性，成为临床应用研究中最为关注的NK细胞系。在特征上NK-92缺乏杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunglobulin2like receptors , KIRs)，但仍具有perforin 和granzyme B介导的溶细胞活力26 。NK-92 细胞表面表达大量的活化受体NKp30，NKp46，2B4，NKG2D，E，CD28 , 而抑制受体的表达却极少，
39、并且与perforin-granzyme细胞溶解途径有关的分子以及其它的细胞毒效应分子如TNF13超家族成员FasL，TRAIL，TWEAK ，TNF-呈高水平表达。因此，NK-92成为现今唯一进入I- II期临床试验的 NK细胞系27。随着临床试验的顺利进行，以NK-92细胞为手段的过继免疫治疗必将成为肿瘤生物治疗的重要组成部分。NKL细胞系是由Robertson等28 建立的，来源于CD3-CD16+CD56+的大颗粒淋巴细胞白血病患者的外周血。电镜显示NKL的超微结构与扩增后正常的多克隆NK细胞相似，其细胞表面表达：CD2， CD6， CD11a，CD26，CD27，CD29，CD38，
40、CD43，CD58 ，CD81，CD94，CD95，MHC II，C1.7.1抗原，不表达CD3， CD4， CD5，CD8， CD14，CD19，CD20，CD28 。 NKL依赖于IL-2 生长，具自然杀伤活性和ADCC效应，其增殖反应也与正常的CD16+CD56dim NK细胞相似。NKL细胞系与NK-92细胞系的杀伤谱不完全一致，某些NK-92不敏感的肿瘤细胞，可以被NKL有效杀伤，比如人胃癌细胞系SGC7901 29。在肿瘤的生物治疗中，可以作为NK-92细胞的补充，这也使得NKL细胞系成为过继免疫治疗的重要选择。三、IL-15 在 NK 细胞发育分化中的重要作用白细胞介素-15（I
41、L-15）是由Grabstein30 等于1994年在检测猴肾表皮细胞系cv21/EBVA 上清液中发现的，是一种能够维持 CTLL-2细胞增殖的可溶性细胞因子。其组织分布相当丰富，主要由粘附的外周血单核细胞、上皮细胞和成纤维细胞株产生，但人T、B淋巴细胞虽然有IL-15 mRNA的表达，却没有IL-15蛋白的分泌。编码人IL-15的基因长34kb ，位于常染色体4q31处，其编码基因包括 9个外显子31-32。在外显子4和 5之间存在一个附加序列，能够编码一条可变引导肽。IL-15的 cDNA由5 端至少316bp的不翻译区，一个486bp的开放读码框以及3端400bp的不翻译区组成，能够编
42、码IL-15的前体蛋白，由 48个氨基酸的前导肽和114个氨基酸的成熟蛋白组成。成熟IL-15蛋白是由外显子 5和8编码的，分子量约为14-15kd，由 114个氨基酸组成。IL-15 蛋白在C42-C88和C35-C85处分别存在两条二硫键，在N79和N112处分别有2条N-端结合的糖基化位点。IL-15与IL-2 在功能上有许多相似之处，是由于IL-15与IL-2共享IL-2的受体14亚单位。近来研究表明，IL-2 并不是NK细胞在体内发育最重要的诱导物。IL-2主要由活化的T细胞产生，但在NK细胞发育、成熟的主要部位骨髓中，并未检测到IL-2存在。单独敲除小鼠的 IL-2或者IL-7基因
43、，不会影响其NK细胞的发育成熟33-34，但值得注意的是，靶向敲除IL-2 ，IL-4，IL-7 ，IL-9，IL-15共用的受体亚单位c链基因，会导致小鼠T细胞和NK细胞的缺失 35。同样的，伴X染色体的重症联合免疫缺陷症（X-SCID）患者，由于c链基因发生了突变，也会缺少T细胞和NK细胞，与敲除小鼠c链基因所得到的结果一致 36。这些研究表明，生理条件下NK细胞的发育需要c链进行信号传递。骨髓细胞及髓样细胞能产生大量的IL-15，暗示这种细胞因子对 NK细胞的分化有关。在体外，IL-15 能将Lin- 或者CD34+的干细胞诱导为 CD56+CD16+的NK细胞，并促进其功能的成熟37,
44、38。IL-15 ，而不是IL-2，在NK细胞的分化中起主导作用，能够诱导骨髓衍生的成熟NK细胞的前体，在原位分化成表达NK表面标志和功能分子的成熟NK细胞39。另一研究发现IL-2表达于晚期妊娠阶段，这时NK细胞已经完全分化并发育成熟，IL-2 只是起辅助作用的细胞因子，这也支持了上述观点40 。四、基因修饰 NK 细胞系的建立由于广谱的细胞毒活性以及强大的杀伤能力，使得NK-92成为最早用于基因修饰的NK细胞系。1998年，Shigeki Nagashima等人建立了稳定转染IL-2的NK-92和YT 细胞系 41。转染后的 NK-92细胞可以在没有外源 IL-2的环境中存活超过5个月，在
45、体外对肿瘤的杀伤能力明显提高，并能够分泌更多的IFN-和TNF-，其体内抗肿瘤转移的能力也显著增强，预示着基因修饰的NK-92细胞同样能够用于临床肿瘤的生物治疗。基于上述IL-15在NK细胞分化发育中不可替代的重要作用，我们于2004年建立了IL-15基因修饰的NK-92细胞系42。虽然仍依赖于外源IL-2，但在低剂量IL-2和 IL-15环境中，增殖明显快于没有转染的细胞。基因修饰后的细胞在体外对多种肿瘤细胞的杀伤能力普遍增强，并且活化受体NKG2D表达升高，而抑制受体NKG2A表达降低。造血干细胞因子SCF是骨髓基质细胞产生的一种能刺激多种细胞生长发育15的多功能细胞因子，其受体c-Kit
46、 在CD34+ 造血干细胞和 CD56brightCD16-NK细胞上都有表达，可以协同IL-2提高NK细胞的增殖及IFN-的表达43，并且可以协同IL-15促进脐血CD34+ 造血干细胞向 NK细胞分化发育 44，这些研究结果表明SCF在 NK细胞的分化发育过程中起着重要作用，尤其是维持并促进NK细胞的增殖有重要意义。hSCF基因修饰的 NK-92细胞系45，在IL-15或IL-2 培养时，增殖能力均强于NK-92细胞。同时细胞表型测定结果显示，其CD56 分子的表达强度显著提高。说明转然后的细胞具备更强的增殖特性，为临床提供了一种有效的免疫效应细胞。在IL-15基因修饰NK-92 细胞的基
47、础上，我们又建立了IL-15基因修饰的NKL细胞。由于NKL细胞与NK-92细胞有着不同的杀伤谱，可以作为NK-92的重要补充。IL-15基因修饰的NKL 细胞具有更强的增殖活性和抗凋亡能力，在体内和体外实验中均能有效杀伤人肝癌细胞。IL-15能够抑制 IL-2诱导的AICD和记忆性CD8+T的活化。因此， IL-15基因修饰的NK细胞比IL-2更加符合过继免疫治疗的要求，更适合应用于肿瘤的生物治疗参考文献1 Lorenzo Moretta, Cristina Bottino, Daniela Pende, et al. Human natural killer cells: their origin, receptors and function. J. Immunol. 2002; 32: 1205-1211. 2 Trinchieri, G. Biology of natural killer cells. Adv. Immunol. 1989; 47: 176-187.3 Mingari, M. C., Poggi, A., Biassoni, R., et al. In vitro proliferation and cloning of CD3CD16+ cells from human thymoc
