1、未成熟血小板的性能评价及在血小板减少性疾病中的应用 邱凯 刘志伟 黄丽春 孙德华 南方医科大学南方医院检验科 摘 要： 目的 应用 Sysmex XN-20 全自动血细胞分析仪检测外周血中的未成熟血小板分数 (IPF%) 和未成熟血小板绝对值 (IPF#) , 对其进行性能评价和建立参考区间, 探讨其在血小板减少性疾病中的应用价值。方法 对该分析仪检测 IPF%和IPF#进行性能评价包括精密度、稳定性、携带污染和线性范围, 并与 Sysmex XE-5000 检测 IPF%和 IPF#进行相关性研究。检测 240 例健康人建立参考区间, 设立为健康对照组;选择 111 例血小板减少性疾病患者作
2、为疾病组;特发性血小板减少性紫癜 (ITP) 组与健康对照组绘制 IPF%的受试者工作特征曲线。结果 该血细胞分析仪检测 IPF%和 IPF#的批内精密度正常、高值的变异系数 (CV) 分别是 2.52%、2.32%和 3.60%、1.93%, 批间 CV 为 1.8%和 3.7%;正常值、高值的IPF%和 IPF#在 24h 内 CV 分别为 8.4%、8.8%和 4.4%、4.5%;IPF%携带污染率为0.16%, IPF#携带污染率为 0.27%;IPF#在 (0 94.8) 109/L 成线性, 与 Sysmex XE-5000 检测 IPF%和 IPF#无相关性 (P0.05) ;不
3、同性别组之间差异无统计学意义 (P0.05) , 参考范围 IPF%:0.9%4.5%, IPF#: (3.79.7) 109/L;ITP 组、骨髓增生异常综合征 (MDS) 组与健康对照组相比较, IPF%差异均有统计学意义 (P0.05) .No statistical difference was observed within gender (P0.05) , and the reference interval was determined as IPF%0.9%-4.5% and IPF# (3.7-9.7) 109/L.In idiopathic thrombocytopenic
4、 purpura (ITP) group and myelodysplastic syndrome (MDS) group, IPF% had statistical significance compared with healthy control group (P0.975) 。 (5) 与 XE-5000 的相关性:将同一份临床标本用 Sysmex XE-5000血细胞分析仪检测 IPF%和 IPF#的结果与用 Sysmex XN-20 血细胞分析仪检测的结果做统计学相关性分析, 共测 20 份标本, 计算 r。1.2.4 建立参考区间对 240 例健康成人的标本结果进行统计分析计算参
5、考区间。1.3 统计学处理1.3.1 数据极值的处理按照 NCCLS C28-A23文件的 D/R 规则判断极值是否为同质个体。D=全部数据最大 (小) -临近最大 (小) 值, R=全部数据最大值-全部数据最小值。若D/R1/3 则去除极值, 以同样方法再对临近极值进行处理。若有离群点被剔除后, 应即将其他数据补上。1.3.2 统计学方法采用 SPSS22.0 软件进行数据统计, 如正态分布, 则用1.96s 得出 95%参考范围, 正态性检验采用 Kolmogorov-Smirnov 检验分析;如不呈正态分布则用百分位数法确定 2.5%和 97.5%位数的参考限, 以此确定参考区间。多组间
6、数据比较采用 Kruskal-Wallis 检验分析。以 P0.975, IPF#在 (094.8) 10/L 成线性。图 2 IPF#线性范围 下载原图2.1.5 相关性分析应用 Sysmex XN-20 与 Sysmex XE-5000 检测 IPF%的 R=0.351, P0.05;两种仪器IPF#的 R=0.321, P0.05, 二者无相关性。2.2 参考区间经正态性检验 IPF%和 IPF#240 例健康者数据不服从正态分布 (P0.05) , 合并为一组 (240 例) 。参考范围 IPF%:0.9%4.5%, IPF#: (3.79.7) 10/L。2.3 各组血液疾病检测结果
7、比较ITP 组、MDS 组的 IPF%与健康对照组差异均有统计学意义 (P0.05) 。ITP 组的IPF#与健康对照组差异无统计学意义 (P0.05) , AA、ALL、AML 组的 IPF#与健康对照组差异有统计学意义 (P0.05) 。见表 2。表 2 各组疾病 IPF 检测结果比较M (P2.5P97.5) 下载原表 2.4 ITP 组与健康对照组绘制 IPF%的 ROC 曲线及临界值ITP 组与健康对照组 IPF%曲线下面积为 1, 与 A=0.5 相比较, 差异有统计学意义 (P0.01) 。根据统计结果中各可能切点的灵敏度和特异度, 计算约登指数。以约登指数最大的切点为临界点,
8、确定 IPF%最佳临界值为 11.6%。该点灵敏度100%, 特异度 100%, 约登指数 1。见图 3。图 3 ITP 组与健康对照组 IPF%的 ROC 曲线 下载原图3 讨论Sysmex XN-20 全自动血细胞分析仪 PLT-F 通道是利用荧光色素给血小板染色, 采用流式细胞测量法 (FCM) 根据前向散射光和荧光强度的差异, 明确地区别血小板和其他的血细胞。根据检测数据绘制出二维散点图, 将荧光强度较强的区域划分为 IPF。通过上述试验结果可见该仪器检测 IPF 精密度高, 稳定性好, 携带污染率极低, 线性范围宽广, 可以满足临床检测要求。干细胞移植后为了预防发生严重出血并发症,
9、会进行预防性的血小板输注, 但血小板浓缩制剂的使用期限为采血后 72h, 为此必须事前预约, 供给量也非常少, 成本较高给患者带来负担的同时还会带来不良反应。通过监测 IPF, 根据 IPF 的一过性增加4可预测血小板恢复, 避免了血小板输血。在肿瘤化疗患者, 化疗停药后骨髓造血功能恢复, IPF 增加早于血小板数量的增加5, 监测 IPF 可了解肿瘤患者骨髓恢复的情况, 指导临床用药及肿瘤治疗中化疗时机的选择。Sysmex XN-20 与 XE-5000 的 IPF%及 IPF#检测结果无相关性, 由于当前检测 IPF没有参考方法, 因此分析两种型号仪器检测结果的差异原因有两点: (1) 荧
10、光染料的改变, PLT-F 的荧光染料以噁嗪为主, 可以有效去除白细胞碎片6、红细胞碎片、小红细胞的干扰; (2) 计算机分析方式的改变, 避免标本中存在的微小血小板漏检。因此与 XE-5000 相比, Sysmex XN-20 全自动血细胞分析采用血小板特异性荧光染料相对可以得到更精确的 IPF。本研究应用 Sysmex XN-20 全自动血液分析仪对 240 例健康成人进行血细胞分析, 得出 95%参考范围为 IPF%:0.9%4.5%;IPF#: (3.79.7) 10/L。初诊为 ITP 的患者 IPF%明显高于健康对照组7, 由于 ITP 患者血小板相关自身抗体与血小板结合导致单核-
11、巨噬系统对血小板吞噬、破坏增加、寿命缩短, 外周血中血小板破坏过多及骨髓巨核细胞增生相关联, 导致更多新生的血小板释放入外周血使 IPF%升高8。初诊为 AA 的患者 IPF#明显低于健康对照组, AA 是由多种原因引起的骨髓造血功能衰竭的一组综合病症, 骨髓中的巨核细胞减少, 血小板生成出现障碍, 新生血小板减少, 与 ITP 不同, 此结果表明 IPF%与 IPF#可以鉴别生成障碍还是破坏过多引起的血小板计数减少9。从 ROC 曲线得到 IPF%最佳临界值为 11.6%。该点灵敏度 100%, 特异度 100%, 以此对 ITP 与健康人区分的准确性最高。因此 IPF 可以用于 ITP 临
12、床诊断以及 ITP 和 AA 鉴别诊断。与健康对照组比较, MDS 的 IPF%差异有统计学意义, 从 SUGIMORI 等10研究可知高IPF 的病例中 100%都有染色体异常, 预后不良的 5 号和 7 号染色体异常出现概率较大, 可以用于治疗、预测的辅助检验, IPF 的高低可以区分预后好坏。参考文献1NCCLS.evaluation of precision performance of quantative measurement methods;approved guideline second edition:EP5-A2S.Wayne, PA:NCCLS, 2004. 2NCCLS.Evaluation of the linearlty of quantitative measurement procedures:EP6-AS.Wayne, PA:NCCLS, 2003. 3NCCLS.How to define and determine reference interals in the clinica laboratory;approved guideline:C28-A2S.2nd ed.Wayne, PA:NCCLS, 2000.
