1、作者简介：于海云，硕士研究生，研究方向：理化检验技术、药物分析与质量控制。Tel:15247539634，E-mail:反相高效液相色谱法测定格列喹酮片含量于海云,刘晶晶,王红红（内蒙古通辽市食品药品检验所，通辽 02800）摘要 目的：建立降糖类药物格列喹酮片的反相高效液相色谱含量测定方法。方法：应用反相高效液相色谱法进行测定，色谱柱为 Ultimate XB-C18(4.6250mm，5m),流动相磷酸二氢铵溶液（pH3.5）-乙腈（3:5）为流动相，检测波长为 310nm，流动相为稀释剂。结果：格列喹酮与其他杂质峰异喹啉物分离度良好，格列喹酮在 20gmL -1200gmL -1 内线性
2、关系良好（r=0.9999，n=6） ，且重复性好（RSD=0.129%,n=6） ； 平均回收率98.6%（RSD=1.2%，n=6） 。结论：反相高效液相色谱法测定格列喹酮片的含量专属性强，准确度和精密度良好，可以用于该药物的分析与质量控制，为完善与提升格列喹酮片的质量标准提供依据。关键词：格列喹酮;反相高效液相色谱法;含量中图分类号：R 921.2 文献表示码：A 文章编号：1009-3656(2017)-4-Determination of the Content for Gliquidone Tablets by High Performance Liquid Chromatogra
3、phyYU Haiyun，LIU Jingjing，Wang Honghong（Tongliao Institute for Drug and Food Control , Tongliao 028000,China）Abstract Objective：To establish a method for the quantitative of Gliquidone Tablets by HPLC. Method：The analysis was performed by using a C18 column with a mobile phase of ammonium-dihydrogen
4、 phosphate-acetonitrile buffer solution（3:5）. The detection wavelength was310 nm for Gliquidone Tablets，mobile phase was used as diluent. Results: Gliquidone and Isoquinoline was separated very well from each other, good linearity of the proposed method was shown in the range of 20gmL -1200gmL -1 (r
5、 = 0.9999,n=6) ,and hadbetter repeatability (RSD=0.129%, n=6);the average recovery of the method was 98.6%(RSD =1.2%,n=6). Conclusion:The results of the experiments showed that it is a high sensitivity, accuracy method with good precision . The method can be used for drug analysis and quality contro
6、l. The method can provide a basis for how to improve the quality standard about Gliquidone Tablets. Key words Gliquidone ; HPLC; Content格列喹酮（Gliquidone）的化学名为 1-环己基-3对-2-(3,4-二氢-7-甲氧基-4,4-二甲基-1,3-二氧代-2(1H)-异喹啉基)乙基苯基磺酰基脲 1。是第二代磺脲类口服降糖药 2物，临床应用于 2 型糖尿病患者，具有与胰岛 细胞高亲和性的特点，可以很大程度地与胰岛 细胞膜上的特异性受体结合，从而诱导产生胰岛
7、素，降低血糖浓度，同时由于药物的大部分代谢随胆汁经消化道排出，肾脏负担小 3-5，是 2 型糖尿病合并轻至中度肾病者治疗使用的首选药物。格列喹酮片收录于中国药典 62015 年版二部，药典中关于格列喹酮片含量测定采用的是紫外-可见分光光度法，在实际检验过程中发现紫外-可见分光光度法存在重现性差，精密度低的问题，本实验在参考相关文献 7的基础上，建立反相高效液相色谱法测定格列喹酮片的含量，该方法灵敏度高，准确度和精密度优异，可以用于格列喹酮片含量的测定。1 仪器与试药1.1 仪器 岛津 2010-20AT 高效液相色谱仪（SIL-20A 自动进样器，柱温箱，岛津 LC-solution工作站）
8、。1.2 试药格列喹酮对照品（100280-201002 99.3% 中国食品药品检定研究院） ；异喹啉物（100846-200501 100% 中国食品药品检定研究院） ；某厂家生产的规格为 30mg 的格列喹酮片（批号 1160926；1150327；1150728） ；乙腈；磷酸二氢铵；磷酸；纯化水。2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 供试品溶液 取本品 10 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于格列喹酮 50mg）置 100mL量瓶中，加流动相 70mL，置水浴中超声使格列喹酮溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10mL，置 50mL 量瓶中，用流
9、动相稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.1.2 对照品溶液 取格列喹酮对照品约 10mg，置 10mL 量瓶中，加流动相溶解，用流动相稀释制成每 1mL中约含 1mg 的储备溶液，精密量取 1mL 储备溶液置 10mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，即得。2.2 色谱条件和系统适用性 色谱柱为 Ultimate XB-C18(4.6250mm，5m)；流动相磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵 1.725g，加水 300mL 溶解后，用磷酸调节 pH 值至 3.50.1）-乙腈（3:5）为流动相，检测波长为 310nm；流动相为稀释剂；进样量为 20L。取格列喹酮对照品和异喹啉物对照品各适量，用流动相
10、超声使溶解并稀释制成每 1mL 中各含 50g 的溶液，取 20L 注入液相色谱仪，理论板数按格列喹酮峰计算不低于 2000，格列喹酮和异喹啉物的分离度为24.705，符合中国药典2015 年版四部8中待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于 1.5 的要求。见图 1、图 2 及表 1。峰号(peak No.)化合物(composition)保留时间(retention time)面积(peak area)理论板数(theoretical plate number)分离度(resolution)拖尾因子( trailing factor)1异喹啉物Isoquinoline5.730 391
11、008 13905.832 0.000 1.0682格列喹酮Gliquidone12.578 291358 19526.602 24.705 0.9502.3 线性关系考察图 2 异喹啉物定位色谱图Fig.2 Chromatogram of Isoquinoline location表 1 色谱峰峰值表Tab.1 The Table of Chromatogram peak图 1 系统适用性实验色谱图Fig.1 Chromatogram of systom suitability test取格列喹酮对照品适量 10mg，置 10mL 量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释制成每 1mL 中含 1mg 的
12、溶液，精密量取上述对照溶液 0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1mL、2mL 置 10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，按“2.2”项下色谱条件，精密量取上述溶液各 20L 进样，绘制标准曲线，以格列喹酮对照品进样量的质量浓度（gmL-1）为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y=6.10103X-2. 126103 r=0.9999结果表明，格列喹酮进样量在 20200gmL-1 与峰面积呈良好的线性关系。2.4 精密度取格列喹酮对照品适量，精密称定，加稀释剂使溶解并定量稀释制成每 1mL 中约含有0.1mg 的溶液，按“2.2”项下色谱条件，精密量取 20
13、L，连续进样 6 次，平均峰面积为613784，RSD 为 0.129%（n=6） 。2.5 重复性取格列喹酮片样品约 0.4g（约相当于格列喹酮 50mg） ，共 6 份，精密称定，置 100mL量瓶中，流动相溶解并稀释到刻度，精密量取 10mL 置 50mL 量瓶中，流动相稀释至刻度，按“2.2”项下色谱条件测定含量，结果平均含量为 95.76%，RSD 为 0.298%（n=6） ，说明本方法的重复性良好。2.6 稳定性精密吸取同一供试品溶液，分别于配制后 0、2、4、8、12h 测定峰面积，格列喹酮的平均值为 556538，RSD 为 0.051%，可知供试品溶液在 12h 内稳定。2
14、.7 加样回收率精密量取 1mgmL-1 的格列喹酮对照溶液的 0.8mL、1.0mL、1.2mL 置于 10mL 量瓶中，另精密量取“2.1.1”项下第一步溶液（批号 1160926）2mL 置上述同一量瓶中，加流动相稀释到刻度，按“2.1”项下色谱条件测定回收率，结果见表 2。表 2 加样回收率试验结果（n=6）Tab.2 Result of recovery test加入浓度(added)/(gmL-1)样品浓度(original)/(gmL-1)测定浓度(found)/(gmL-1)回收率(recovery)/%平均回收率(averagerecovery)/%RSD/%81.68 96
15、.52 176.89 98.3981.76 96.49 175.96 97.19102.2 96.52 196.71 98.02 98.6 1.2102.2 96.49 197.67 99.00122.64 96.52 220.23 100.86122.64 96.49 217.35 98.542.8 样品含量测定取按照“2.2”项下方法制得的 3 个不同批号的两组平行样品，依“2.2”项下色谱条件进样，测定样品样品色谱图及含量，样品及对照品色谱图见图 3、图 4，含量测定结果见表 4；同时用紫外-可见分光光度法测定样品含量，比较高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法测定结果，显示两种方法测定结
16、果基本保持一致，但反相高效液相色谱法测定含量明显在准确度，精密度及重现性方面优于紫外-可见分光光度法。表 3 样品中格列喹酮的含量测定结果 （%，n=2）Tab.3 The assay results of gliquidone批号（Lot No） 含量（content）HPLC UV平均含量(average)HPLC UV1160926-1 95.95 94.68 95.6 93.81160926-2 95.89 92.891150327-1 95.21 93.78 95.8 95.01150327-2 95.92 96.211150728-1 95.65 95.02 95.9 94.711
17、50728-2 95.99 94.363 讨论3.1 检测波长的选择 图 3 对照品色谱图Fig.3 ChromatogramofReference substance图 4 样品色谱图Fig4 Chromatogram of Sample取格列喹酮对照品适量，用稀释剂稀释至适宜浓度，置 200-400nm 内扫描，结果显示格列喹酮在 310nm 的波长处有最大吸收，且峰型对称良好，因此，选择 310nm 作为检测波长。3.2 溶剂的选择 通过甲醇和乙腈及流动相溶解样品进行测定发现，流动相溶解峰型最好，峰面积精密度良好，保留时间稳定，故选择流动相作为溶剂 。 3.3 不同方法测定对比 对比药典
18、规定的紫外-可见分光光度法与本文选用的反相高效液相色谱法法测定含量，显示反相高效液相方法能够适用于格列喹酮片样品的含量测定，精密度和准确度与中国药典2015 年版二部中规定的方法相比具有更大的优势，检测灵敏度高，方法简单，为格列喹酮片含量测定检验提供准确、快速的定量定性分析方法，同时为质量标准的提高与质量控制提供实验依据。参考文献1 中国药典S2015 年版.二部.1125ChPS.2015. Vol.11252 熊婧,何积分,吴建敏，等.格列喹酮含量测定方法研究J.中国药师,2015,21(6):890Xiong Jing,He Jifen,Wu Jianmin,etal.Content d
19、eterminanttion of gliquidone tabletsJ.China Pharm,2015,21(6):8903 张帆,敬涛,白兆迪,等.改良后的大鼠原代肝细胞分离方法应用于格列喹酮肝摄取方式的考察 J中国医院药学杂志 2015,35(9):809ZHANG Fan，JING Tao，BAI Zhaodi， etal.Study on hepatic uptake of gliquidone in primary rat hepatocytes byusing improved isolation methodJ.Chin Hosp Pharm J,2015,35(9):80
20、94 孙锋利,曹和欣,何立群.糖肾宁对糖尿病肾病大鼠肾组织 AGEs 和 ROS 的影响J上海中医药大学学报 2014,28(9):57Sun Lifeng,Cao Hexin,He Liqun.Effect of“Tangshenning”on AGEs and ROS inrenal Tissues of Diabetic Nephropathy ratsJ.Acta Univ Tradit Med Sin Pharm Shanghai,2014,28(9):575 吴公平,雷玉萍,李荣玮,等.采用反相高效液相色谱法测定降糖类保健食品非法添加降糖化学药品检验方法的研究J.中国现代医学杂志
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