1、中国组织工程研究第仃眷第11期20130312出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research March 12,2013 Vo1 17No11 wwwCRTERorg doi：103969jissn2095-43442013“007 ：wwwcrterorg 卫光曦 万朝霞，戴红卫王谋限翩性应激对垫糖尿病模型大鼠的影响 ，中国组织I程研究201317(11)：1946-1950 限制性应激对1型糖尿病模型大鼠的影响米 卫光曦，万朝霞，戴红卫，王谋 重庆医科大学附属口腔医院，重庆市口腔疾病与生物医学研究中心，重庆市400015 1946 文章亮
2、点： 实验组大鼠在施加应激后血清中促肾上腺皮质激素，皮质酮的浓度均显著升高，体质量下降，表明动物 已处于应激状态。实验后2周，大鼠应激标识物的浓度、血糖及体质量趋于稳定，作者认为，这一现象 可能是由于动物自身产生了相应的适应性调节，从而导致机体对应激刺激的敏感度降低。 关键词： 组织构建；组织构建实验造模；限制性应激；1型糖尿病；SD大鼠；促 肾上腺皮质激素；皮质酮；其 他基金 摘要 背景：限制性应激为构建心理应激的一种方法。 目的：建立合适的糖尿病及限制性应激模型，分析限制性应激与1型糖尿病的关系。 方法：选取48只雄性SD大鼠，在腹腔内注射链脲佐菌素构建1型糖尿病大鼠模型。建模成功后将其
3、随机分为2组，实验组施加限制性应激，对照组不施加。于施加限制性应激后的1，2，3和4周分别处 死实验组和对照组的大鼠各6只，检测相关应激标识物：促肾上腺皮质激素、皮质酮以及胰高血糖素在 血清中的浓度。并定期进行空腹血糖测试。 结果与结论：实验组大鼠在施加限制性应激1周后血糖及胰高血糖素增高显著高于对照组(P167 mmolL)。随机分为2组，每组 24只。实验组需要施加限制性应激(8 hd)，施加的时间 选定为每晚的10：O0至次日的6：00；对照组不施加限 制性应激。两组大鼠在施加应激后第2，3，4，5周随机 各取6只处死。处死后的大鼠进行检测应激指标促。肾上 腺皮质激素、血清皮质酮含量，同
4、时再处死前每7 d在上 午对大鼠进行一次空腹血糖测试。 促肾上腺皮质激素、皮质酮及胰高血糖素的测定：各组 大鼠在麻醉后心脏穿刺取血2 mL置于肝素抗凝管， 37恒温水浴2 h，离心半径16 cm，3 000 rmin离心 20 min，取上清液(血浆)，测定促肾上腺皮质激素、皮 质酮及胰高血糖素的含量；将血液和血浆标本采用血常 规检测及放射免疫分析法分别测定(具体方法根据试剂 盒说明书的指示操作)。 主要观察指标：两组大鼠应激标识物的检测。 两组大鼠血糖及体质量变化。 统计学分析：所得数据均采用SPSS 14O统计软 件处理，以x+s表示，采用完全随机原则设计组间各指 标在不同时间均数比较的f
5、检验。 2结果 21 实验动物数量分析实验选用大鼠48只，分为2 组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。 22 两组大鼠应激标识物的检测 用放射免疫分析法 测定血浆中的促肾上腺皮质激素、皮质酮水平均显著高 于对照组(P005或PO01)，见图1，2。 23两组大鼠血糖及体质量变化由于糖尿病的影响， 两组大鼠均出现血糖及胰高血糖素升高，体质量下降的 趋势。其中大鼠血糖不会随着时间的推移而持续升高， 而体质量却在持续降低，这在不同阶段的大鼠中差异有 显著性意义fP0o5)。在同一阶段处死的大鼠中，实验 组大鼠的胰高血糖素及空腹血糖值均明显高于对照组 (P001)，体质量则低于对照组(P0o5)。见
6、图35。 1948 ROBox 1200,Shenyang 110004 wwwCRTERorg 卫光曦，等 嚷熟性虚激对1氆糖尿病模挚大鼠的影响 c一。 3讨论 3_1 实验动物筛选SD大鼠的生物学特性包含：大 鼠是昼伏夜动杂食动物。喜啃咬，性情较温顺，抗病 力强。大鼠汗腺不发达。嗅觉灵敏。对噪声敏感。 对营养缺乏敏感。对湿度要求严格，相对湿度为 40一70。大鼠的肝脏再生能力强，如切除 60一70还能再生。不能呕吐。垂体、肾上腺功 能发达，应激反应敏感，行为表现多 圳。 SD大鼠上述众多特性显示，该种动物是非常适合 构建糖尿病和应激模型的。 |SsN 20954344 CN 21-1581
7、R C0DEN：ZLKHAH 32 关于构建糖尿病大鼠模型的评价 目前，用链脲 佐菌素以构建1型糖尿病性大鼠模型的方法已经比较成 熟 J。但是作者在实验中发现，在将链脲佐菌素粉剂与 柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(pH 42-45)调和后，应该即刻 就对大鼠的腹腔进行注射。这样大鼠建模成功的概率比 较高。如果在链脲佐菌素粉剂与柠檬酸一柠檬酸钠缓冲 液调和后15 min以上，其成功的比例就很低。而这与以 往提到的在调和后30 min内就注射，有少许出入。作者 认为这可能因为链脲佐菌素粉剂不能受潮，如果与缓冲 液调和时间过长，则可能会引发链脲佐菌素的失活。 33 关于限制性应激大鼠模型的评价应激是指机体
8、在受到各种因素的刺激时所出现的非特异性的全身反 应。任何躯体或心理的刺激，只要到达一定强度，除了 引起与刺激因素直接相关的特异性变化外，都可以引起 一组与刺激因素的非直接关系的全身非特异反应。这种 对各种刺激的非特异性反应称为应激，而刺激因素被称 为应激源。而应激源往往来自于环境因素；机体的内在 因素；社会心理因素。在这些因素之中，普遍认为社会 心理因素对糖尿病患者的影响最大，它可以影响糖尿病 患者的血糖水平10-11】。而目前实际生活中的绝大多数糖 尿病患者往往处于各种负面情绪的影响下，但是他们却 没有意识到这种负面情绪可能会进一步使他们的病情 恶化。 关于应激可以加重糖尿病的机制问题，许多
9、学者认 为。这些负面的社会心理因素会刺激到患者的下丘脑一 垂体一。肾上腺轴(HPA)和交感神经系统。这会导致皮质类 固醇，肾上腺素，神经肽Y的释放增多。皮质类固醇作 为一种应急激素，它会促发葡萄糖的生成，增强脂解作 用，以及减少B细胞的胰岛素的分泌并且降低了机体对 胰岛素缺乏的敏感性 伯】。在葡萄糖和脂肪的代谢机制 上肾上腺素的作用和皮质类固醇相似。而神经肽Y可以 通过调节脂解作用，增加脂肪形成可以间接诱导肥胖症 及一些代谢综合征。由此可见这些均可导致糖尿病病情 的恶化。 在以往的国内外试验中，尝试构建心理应激的方式 有很多。例如，冰敷法，剪尾法，高温刺激等不同方式 来尝试使实验样本产生并达到
10、预期的心理应激反 应14-15。其中由于通过制动来引发的限制性应激在强 度，频率，持续的时间等方面便于控制，所以目前被国 内外广大学者所采纳。实验所采用的制动器是由作者跟 1949 卫光曦。等 限劫性应激对1型糖尿病模型大鼠的影响 WWWCRTERorg 据限制性应激所需要的条件自制的一个制动器I j。它在 不会过分加压的情况下，可以限制大鼠的自由活动(力量 可以调节)，同时不会影响到大鼠饮水和呼吸。在将大鼠 从制动器放回笼中后方便对其进行冲洗保持里面环境 的清洁，完全符合限制性应激制动的要求。在实验中相 较于对照组，实验组的大鼠在施加应激后大鼠血清中促 肾上腺皮质激素，皮质酮水平均出现了显著
11、的升高。同 时也出现体质量下降的生物适应性变化，表明动物处于 应激状态。其内分泌系统对应激刺激发生反应，进行了 适应性调节。同时实验组大鼠的胰高血糖素及空腹血糖 也明显高于对照组，由糖尿病引发体质量下降的幅度均 大于对照组。这说明在限制性应激状态下，1型糖尿病 大鼠的病情进一步恶化了。但是作者实验中发现，在实 验的后2周大鼠的应激标识物的浓度，血糖及体质量趋 于稳定。这可能是由于频繁的采用相同模式的制动法， 导致动物自身产生了相应的适应性调节。从而导致机体 对应激刺激的敏感度降低。 综上所述，限制性应激会升高大鼠空腹血糖及胰高 血糖素，从而进一步加重大鼠1型糖尿病病变。 基金赞助：重庆市教委科
12、学技术研究项目基金资助课题 (KJ09031 6)。 者贡萄f_设计为通讯作者，实施为第一、四作者，评估 者为第三作者，盲法评估。 益 乒 包课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济组 织直接或间接的经济或利益的赞助。 伦理要獭实验过程中对动物的处置符合2009年(Ethical issues in animal expe rimenfafj0n相关动物伦理学标准的条 例。 者翩文章为原创作品，数据准确，内容不涉及泄密， 无一稿两投，无抄袭，无内容剽窃，无作者署名争议，无与他 人课题以及专利技术的争执，内容真实，文责自负。 4参考文献 1950 Allan FN，Willis T Diabete
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