1、 基 础 研 究 收 稿 日 期 :2005203231 ;修 回 日 期 :2005209227基 金 项 目 :国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No. 39900069 ,No.30170428 ,No. 30370641 ,No. 30570849) ;教 育 部 博 士 学 科 点专 项 科 研 基 金 (No. 20050560002 , No. 20050560003) ; 广 东省 自 然 科 学 基 金 重 点 项 目 (No. 37788 ,No. 05104541)作 者 单 位 :1. 100022 北 京 工 业 大 学 生 命 科 学 与 生 物 工程 学
2、院 病 毒 与 药 理 研 究 室 ;2.汕 头 大 学 医 学 院 肿 瘤 病 理 研 究室 ,3. 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 教 研 室 ( 3 通 讯 作 者 )食 管 癌 细 胞 N GAL 基 因 2416 + 84 区 段 存 在TPA 反 应 元 件许 丽 艳 1 ,2 ,李 恩 民 3 3 ,蔡 唯 佳 2 ,牛 永 东 3 ,袁 华 敏 2 ,常 静 霞 2 ,沈 忠 英 2 ,曾 毅 1TPA Response Elements Present in 2416 + 84 Position of NGAL Gene 5 Flanking Regionin the
3、 Esophageal Cancer Cells EC109XU Li2yan1 ,2 , L I En2min3 3 , CA I Wei2jia2 , N IU Yong2dong3 , YUAN Hua2min2 , CHAN G Jing2xia2 ,SH EN Zhong2ying2 , ZEN G Yi11. Institute of V i rology and Pharmacology , College of L i f e Science and B ioengineering , Bei jing Universityof Technology , Bei jing 10
4、0022 , China; 2. Institute of Oncologic Pathology , Medical College of S hantouUniversity , 3. Department of B iochemistry and Molecular B iology ( 3 Corres ponding author)Abstract :Objective The TPA response elements in N GAL promoter region and the sequences surrounding itspromoter region will be
5、determined. Methods The fragment 2416 + 84 of 5 flanking region of N GAL genewas amplified from esophageal cancer cells by PCR and then cloned into p GL32Basic (p GLB) and p GL32Enhan2cer vector (p GL E) , respectively. Then the constructed recombinant expression plasmid p GLB2416 or p GL E2416was a
6、dopted to cotransfect with pRL2TK into EC109 esophageal cancer cells stimulated with TPA (5ng/ ml) ornot. Relative luciferase activity of whole cell extracts from cells was measured with Dual Luciferase Report GeneAssay System (DLR) to verify whether there are TPA response elements in the region and
7、 the potential posi2tions were analyzed by bioinformatics. Results Relative luciferase activity of either p GLB2416 or p GL E2416 co2transfected with pRL2TK into EC109 cells following stimulation with TPA increased sharply ( t test , P 0. 01)by an average of 46. 82 or 46. 412fold , compared with con
8、trols (empty vector p GLB or p GL E ) , and by an aver2age of 5. 17 or 7. 372fold than that of unstimulated control. Analysis by bioinformatics showed that there are atleast 4 putative TPA responsive elements in - 416 + 84 position of 5 flanking region of N GAL gene. Conclu2sion The TPA response ele
9、ments of N GAL gene located on - 416 + 84 position of its 5 flanking region inthe esophageal cancer cells.Key words :N GAL gene ; Esophageal cancer cells ; Gene expression regulation ; TPA response elements摘 要 :目 的 本 文 旨 在 对 N GAL 基 因 启 动 子 区 及 其 附 近 是 否 存 在 TPA 反 应 元 件 进 行 研 究 。 方 法 (1) 采 用 PCR 法 从
10、 食 管 癌 细 胞 中 克 隆 N GAL 基 因 5 侧 翼 区 2416 + 84 片 段 ,然 后 分 别 插 入 质 粒 p GLB和 p GL E , 构 建 p GLB2416 和 p GL E2416 荧 光 素 酶 报 告 基 因 表 达 载 体 ; (2) 将 p GLB2416 和 p GL E2416分 别 同 p RL2T K共 转 染 食 管 癌 细 胞 EC109 ; (3) 用 TPA 刺 激 转 染 的 EC109 , 检 测 细 胞 相 对 荧 光 素 酶 活力 ,通 过 相 对 荧 光 素 酶 活 力 变 化 判 定 N GAL 基 因 5 侧 翼 241
11、6 + 84 区 是 否 存 在 TPA 反 应 元 件 , 同 时 进行 生 物 信 息 学 分 析 。 结 果 无 论 是 p GLB2416 还 是 p GL E2416 , 与 p RL2T K共 转 染 食 管 癌 细 胞 EC109后 ,用 TPA 刺 激 ,与 其 相 应 的 空 载 体 相 比 ,转 染 细 胞 荧 光 素 酶 活 力 均 极 显 著 升 高 ( t 检 验 , P 0. 01) ,约分 别 升 高 46. 82和 46. 41倍 ;而 TPA 刺 激 组 与 没 有 TPA 刺 激 组 相 比 ,p GLB2416 和 p GL E2416 转 染EC109
12、细 胞 荧 光 素 酶 活 力 分 别 显 著 升 高 了 5. 17倍 和 7. 37倍 ( t 检 验 , P 0. 01) 。 生 物 信 息 学 分 析 显 示 ,N GAL 基 因 5 侧 翼 2416 + 84 区 段 至 少 存 在 4 个 潜 在 的 TPA 反 应 元 件 。 结 论 食 管 癌 细 胞 N GAL 基因 5 侧 翼 2416 + 84 区 段 存 在 着 TPA 反 应 元 件 。关 键 词 :N GAL 基 因 ;食 管 癌 细 胞 ;基 因 表 达 调 控 ; TPA 反 应 元 件中 图 分 类 号 :Q784 ;R735. 1 文 献 标 识 码 :
13、A 文 章 编 号 :100028578 (2005) 12207412040 引 言N GAL ( Neutrop hil Gelatinase2Associated Li2pocalin)基 因 是 lipocalin 家 族 的 一 个 新 成 员 ,全 长5 869bp ,包 括 7 个 外 显 子 ,位 于 染 色 体 9q34 区 域 ,单 拷 贝 ,蛋 白 编 码 区 长 度 591bp ,编 码 197 个 氨 基147肿 瘤 防 治 研 究 2005 年 第 32 卷 第 12 期酸 。 近 年 有 研 究 证 明 ,N GAL 基 因 的 蛋 白 产 物 具 有保 护 调
14、节 基 质 金 属 蛋 白 酶 29 ( Matrix Metalloprotei2nase29 ,MMP29)的 活 性 ,以 及 作 为 小 分 子 铁 化 合 物结 合 蛋 白 参 与 机 体 铁 代 谢 和 天 然 免 疫 反 应 等 功能 123 。 我 们 以 往 研 究 发 现 ,在 TPA (122o2tetrade2canoylp horbol2132acetate) 诱 导 永 生 化 食 管 上 皮 细胞 癌 变 过 程 中 N GAL 基 因 过 表 达 4 。 这 提 示 在 食管 癌 细 胞 N GAL 基 因 转 录 调 控 区 可 能 存 在 着 某 种TPA
15、反 应 元 件 ,但 具 体 位 置 尚 不 清 楚 。 为 此 ,本 文通 过 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 检 测 系 统 对 N GAL 基 因5 侧 翼 2416 + 84 区 片 段 的 TPA 反 应 性 进 行 研 究 ,主 要 目 的 是 检 测 N GAL 基 因 启 动 子 区 及 其 附 近 是否 存 在 TPA 反 应 元 件 。 这 将 有 助 于 深 入 到 分 子 水平 揭 示 食 管 上 皮 细 胞 癌 变 过 程 中 N GAL 基 因 过 表达 机 制 。 现 将 有 关 实 验 方 法 与 结 果 报 告 如 下 。1 材 料 与 方 法1. 1 细
16、 胞 与 细 胞 培 养 食 管 癌 细 胞 系 EC109 由 中国 医 学 科 学 院 肿 瘤 研 究 所 林 晨 研 究 员 惠 赠 。 使 用199 培 养 基 ( Invitrogen) ,在 常 规 条 件 下 传 代 培 养 。1. 2 细 菌 菌 株 、 质 粒 及 主 要 试 剂 J M109 细 菌 菌株 、 萤 火 虫 荧 光 素 酶 报 告 基 因 表 达 载 体 p GL32Basic(p GLB)和 p GL32Enhancer (p GL E) 、 海 肾 荧 光 素 酶报 告 基 因 表 达 载 体 p RL2T K(内 参 照 质 粒 ) 、 双 荧 光素 酶
17、 报 告 基 因 分 析 系 统 均 购 自 美 国 Promega 公 司 ;转 染 试 剂 Fugene 6 reagent 购 自 德 国 Roch 公 司 。质 粒 提 取 试 剂 盒 购 自 德 国 Q IA GEN 公 司 。 实 验 质粒 p GLB2416 和 p GL E2416 ,采 用 PCR 法 从 食 管 癌细 胞 SH EEC (在 TPA 作 用 下 ,由 永 生 化 食 管 上 皮细 胞 恶 变 而 来 5 ) 中 克 隆 出 N GAL 基 因 5 侧 翼 区 2416 + 84 片 段 ,分 别 插 入 到 质 粒 p GLB 和 p GL E的 X ho
18、和 B gl 双 酶 切 位 点 ,测 序 鉴 定 。1. 3 瞬 时 转 染 与 TPA 诱 导 实 验 采 用 Q IA GEN公 司 质 粒 提 取 试 剂 盒 分 别 提 取 实 验 质 粒 p GLB2416和 p GL E2416、 对 照 质 粒 p GLB 和 p GL E 以 及 内 参照 质 粒 p RL2T K ,并 测 定 各 质 粒 含 量 。 质 粒 转 染 步骤 参 照 文 献 6 进 行 。 转 染 后 24h ,加 入 终 浓 度 为5ng/ ml 的 TPA (Sigma 公 司 ) 进 行 诱 导 。 继 续 培 养24h 后 ,收 获 细 胞 。 每 组
19、 实 验 样 品 3 个 实 验 孔 ,并 至少 进 行 3 次 重 复 实 验 。1. 4 双 荧 光 素 酶 活 性 检 测 双 荧 光 素 酶 活 性(DL R) 检 测 按 照 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 分 析 系 统( Promega 公 司 ) 操 作 手 册 及 文 献 6 所 述 方 法 ,在TD220/ 20 照 度 计 ( Turner Designs 公 司 )上 进 行 。1. 5 统 计 学 分 析 根 据 TD220/ 20 型 照 度 计 配 置的 软 件 包 计 算 出 各 组 相 对 荧 光 强 度 (萤 火 虫 荧 光 素酶 / 海 肾 荧 光 素
20、 酶 ) ,以 此 代 表 荧 光 素 酶 活 力 。 各 组实 验 数 据 均 计 算 平 均 值 及 标 准 差 。 应 用 SPSS 10. 0对 各 组 实 验 数 据 之 间 是 否 有 显 著 性 差 别 进 行 t 检验 。1. 6 生 物 信 息 学 分 析 应 用 转 录 因 子 数 据 库 ( ht2tp :/ / www. gene2regulation. com) 中 的 软 件 AliB2aba 2. 1分 析 预 测 N GAL 基 因 5 侧 翼 2416 + 84 区段 潜 在 的 TPA 反 应 元 件 序 列 及 其 位 点 。 相 关 参 数分 别 为 :
21、 Pairsim to known sites :64 ,Match widt h inbp :10 ,Min num of sites : 5 , Min match Conserva2tion :80 %。2 结 果2. 1 p GLB2416 或 p GL E2416 的 表 达 活 性 及 TPA反 应 性2. 1. 1 p GLB2416 的 表 达 活 性 及 TPA 反 应 性有 关 实 验 结 果 见 图 1 - A。 从 中 可 见 : (1) 在 没有 TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载 体 p GLB 相 比 ,转 染p GLB2416 的 食 管 癌 细 胞 EC
22、109 的 相 对 荧 光 素 酶 活力 极 显 著 升 高 ( t 检 验 , P 0. 01) ,约 升 高 6. 42倍 。(2) 在 5ng/ ml TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载 体 p GLB相 比 ,转 染 p GLB2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对荧 光 素 酶 活 力 升 高 更 显 著 ( t 检 验 , P 0. 01) ,约 升高 46. 82 倍 。 ( 3 ) 转 染 p GLB2416 的 食 管 癌 细 胞EC109 , TPA 作 用 (5ng/ ml)与 没 有 TPA 作 用 相 比 ,前 者 的 相 对 荧 光 素 酶
23、活 力 极 显 著 升 高 ( t 检 验 , P 0. 01) ,约 升 高 5. 17倍 。 上 述 实 验 结 果 提 示 ,N GAL基 因 5 侧 翼 2416 + 84 区 段 是 启 动 子 所 在 部 位 ,启动 基 因 表 达 的 基 础 水 平 很 高 ,而 且 具 有 明 显 的 TPA反 应 性 ,说 明 在 N GAL 基 因 5 侧 翼 2416 + 84 区 段存 在 较 强 的 TPA 反 应 元 件 。2. 1. 2 p GL E2416 的 表 达 活 性 及 TPA 反 应 性有 关 实 验 结 果 见 图 1 - B。 从 中 可 见 : ( 1) 在没
24、 有 TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载 体 p GL E 相 比 ,转 染p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对 荧 光 素 酶活 力 极 显 著 升 高 ( t 检 验 , P 0 . 01 ) , 约 升 高32 . 25倍 。 (2) 在 5 ng/ ml TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载体 p GL E 相 比 , 转 染 p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞EC109 的 相 对 荧 光 素 酶 活 力 升 高 更 显 著 ( t 检 验 ,P 0 . 01) ,约 升 高 46 . 41倍 。 ( 3 ) 转 染 p GL E2
25、416的 食 管 癌 细 胞 EC109 , TPA 作 用 (5 ng/ ml) 与 没 有TPA 作 用 相 比 ,前 者 的 相 对 荧 光 素 酶 活 力 极 显 著升 高 ( t 检 验 , P 0 . 01) ,约 升 高 7 . 37倍 。 上 述 实验 结 果 表 明 ,N GAL 基 因 启 动 子 元 件 接 受 增 强 子作 用 ,与 之 协 调 的 能 力 是 很 强 的 ,而 且 表 现 出 明 显的 TPA 诱 导 特 性 。247 肿 瘤 防 治 研 究 2005 年 第 32 卷 第 12 期图 1 pGLB2416 或 pGLE2416 在 食 管 癌 细 胞
26、EC109 中 的 表 达 活 性 及 TPA反 应 性A (1) 表 示 与 转 染 空 载 体 p GLB 相 比 ; (2) 表 示 在TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载 体 p GLB 相 比 ; (3) 表 示 转 染 p GLB2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 , TPA 作 用 与 没 有 TPA 作 用 相 比 。B (1) 表 示 与 转 染 空 载 体 p GL E 相 比 ; (2) 表 示 在5ng/ ml TPA 作 用 下 ,与 转 染 空 载 体 p GL E 相 比 ; (3) 表 示 转 染p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞 EC1
27、09 , TPA 作 用 ( 5ng/ ml ) 与 没 有TPA 作 用 相 比 。 上 述 相 对 荧 光 素 酶 活 力 检 测 实 验 ,实 验 组 与 对照 组 每 次 实 验 三 个 平 行 样 本 ,并 至 少 重 复 3 次 。2. 2 p GLB2416 与 p GL E2416 TPA 反 应 性 的 比 较有 关 实 验 结 果 见 图 2。 从 中 可 见 : (1)无 论 是 否有 TPA 作 用 ,与 转 染 p GLB2416 相 比 ,转 染 p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对 荧 光 素 酶 活 力 均 极显 著 升 高 (
28、t 检 验 , P 0. 01) ,约 分 别 升 高 5. 77 (没有 TPA 作 用 ) 和 7. 17 (有 TPA 作 用 ) 倍 。 (2) 转 染p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对 荧 光 素 酶 活力 ,有 TPA 作 用 与 没 有 TPA 作 用 之 间 的 差 值 为48. 35 (55. 85 7. 50) ;相 对 而 言 ,转 染 p GLB2416 的则 为 6. 69 (7. 79 1. 30) ,不 足 前 者 的 1/ 7。 这 表 明在 TPA 作 用 下 , 与 转 染 p GLB2416 相 比 , 转 染p GL E
29、2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对 荧 光 素 酶 活力 升 高 的 幅 度 要 大 得 多 。 这 些 实 验 结 果 提 示 ,在 体现 应 答 TPA 刺 激 时 N GAL 基 因 启 动 子 的 作 用 在 增强 子 协 助 下 会 显 著 增 强 。图 2 pGLB2416 与 pGLE2416 的 表 达活 性 及 TPA反 应 性 比 较无 论 是 否 有 TPA 作 用 ,与 转 染 p GLB2416 相 比 ,转 染p GL E2416 的 食 管 癌 细 胞 EC109 的 相 对 荧 光 素 酶 活 力 均 极显 著 升 高 ( t 检 验 ,
30、P 0. 01) 。 上 述 相 对 荧 光 素 酶 活 力 检测 实 验 方 法 同 图 1。2. 3 生 物 信 息 学 分 析 结 果应 用 转 录 因 子 数 据 库 ( http :/ / www. gene2reg2ulation. com)中 的 软 件 AliBaba2. 1 , 对 N GAL 基 因5 侧 翼 2416 + 84 区 段 潜 在 的 TPA 反 应 元 件 序 列及 其 位 点 的 分 析 预 测 结 果 见 图 3。 从 中 可 见 ,在N GAL 基 因 5 侧 翼 2416 + 84 区 段 贯 穿 整 个 序 列共 存 在 4 个 潜 在 的 同 一
31、 类 型 TPA 反 应 元 件 序 列 。这 表 明 , N GAL 基 因 在 DNA 序 列 上 存 在 着 应 答TPA 刺 激 的 结 构 基 础 。3 讨 论我 们 以 往 研 究 发 现 ,N GAL 基 因 在 人 食 管 上 皮细 胞 癌 变 中 显 著 过 表 达 4 ,具 有 促 进 癌 细 胞 侵 袭 的功 能 7 ,同 时 可 能 还 在 癌 细 胞 的 不 良 分 化 中 发 挥 作用 8 。 这 些 研 究 结 果 提 示 ,N GAL 基 因 可 能 是 人 类的 一 个 重 要 的 新 癌 基 因 ,但 在 食 管 癌 等 肿 瘤 细 胞 中图 3 NGAL
32、基 因 5侧 翼 区 - 416 + 84 部 位 潜 在 的 TPA反 应 元 件 示 意 图注 :加 黑 及 下 划 线 所 示 序 列 分 别 为 转 录 起 始 位 点 (g) 、 翻 译 起 始 位 点 (atg) 、 TA TA 盒 以 及 生 物 信 息 学 分 析 所 预 测 出 的 TPA 反 应 元 件347肿 瘤 防 治 研 究 2005 年 第 32 卷 第 12 期过 表 达 调 控 的 机 制 不 明 。近 年 ,Cowland 等 9 研 究 发 现 ,在 型 肺 泡 上 皮 细胞 A549 培 养 液 中 加 入 细 胞 因 子 IL21 可 诱 导 N GAL
33、基 因 表 达 上 调 10 倍 以 上 。 而 Gombart 等 10 则 研 究发 现 ,C/ EBP 因 子 (增 强 子 元 件 CCAAT 特 异 性 结 合蛋 白 因 子 ) 缺 陷 鼠 中 性 粒 细 胞 N GAL 基 因 的 转 录 减弱 。 这 些 实 验 结 果 提 示 , IL21 和 C/ EBP 等 因 子 的作 用 分 别 与 型 肺 泡 上 皮 细 胞 和 中 性 粒 细 胞 中 N GAL基 因 的 表 达 相 关 。 然 而 ,我 们 最 近 的 研 究 结 果 表 明 ,在 食 管 癌 细 胞 中 ,N GAL 基 因 的 转 录 与 IL21 和 C/
34、EBP 等 因 子 的 作 用 均 没 有 关 系 (另 文 发 表 ) 。 这 提 示在 食 管 癌 等 肿 瘤 细 胞 中 可 能 存 在 着 另 外 一 种 机 制 控制 着 N GAL 基 因 的 转 录 。 以 往 我 们 曾 研 究 证 明N GAL 基 因 的 启 动 子 位 于 其 5 侧 翼 - 152 + 84 区段 11 ,而 通 过 本 文 的 实 验 结 果 来 看 ,在 N GAL 启 动 子及 其 附 近 区 域 ( - 416 + 84)存 在 着 TPA 反 应 元 件 。这 说 明 TPA 是 导 致 食 管 癌 细 胞 N GAL 基 因 过 表 达的 一
35、 种 调 节 因 素 。 推 测 TPA 可 能 是 通 过 细 胞 内 信 号传 递 途 径 激 活 了 某 种 TPA 反 应 元 件 结 合 蛋 白 ,导 致N GAL 基 因 过 表 达 。p GLB 和 p GL E 是 两 种 不 同 性 质 的 萤 火 虫 荧 光素 酶 报 告 基 因 表 达 载 体 。 p GLB 空 白 载 体 上 无 任 何的 启 动 子 或 增 强 子 等 基 因 转 录 调 控 元 件 。 把N GAL 基 因 5 侧 翼 - 416 + 84 区 段 DNA 插 入p GLB ,主 要 目 的 就 是 要 考 查 N GAL 基 因 的 这 一 区段
36、 DNA 启 动 基 因 表 达 的 基 础 水 平 。 p GL E 空 白 载体 上 插 有 一 个 强 增 强 子 ,即 SV40 大 T 抗 原 基 因 的增 强 子 。 把 N GAL 基 因 5 侧 翼 - 416 + 84 区 段DNA 插 入 p GL E ,主 要 目 的 就 是 要 考 查 N GAL 基因 启 动 子 区 DNA 接 受 增 强 子 作 用 的 能 力 ,评 价N GAL 基 因 表 达 的 诱 导 特 性 。 综 合 本 文 研 究 所 获得 的 各 项 实 验 结 果 来 看 , N GAL 基 因 5 侧 翼 区 -416 + 84 这 一 区 段
37、DNA ,启 动 基 因 表 达 的 基 础 水平 很 高 ,接 受 增 强 子 作 用 的 能 力 很 强 ,且 表 现 出 非 常明 显 的 TPA 诱 导 特 性 。关 于 TPA 反 应 元 件 ,较 早 就 有 研 究 报 道 ,但 效应 细 胞 种 类 不 同 , TPA 反 应 元 件 的 序 列 会 有 很 大 变化 。 迄 今 被 研 究 报 道 的 TPA 反 应 元 件 主 要 有 如 下三 种 类 型 : A P21 复 合 因 子 结 合 型 12 ,元 件 典 型 序列 为 T GA ( C/ G) TCA , GA TA 家 族 蛋 白 结 合型 13 ,元 件
38、典 型 序 列 为 GA TA box , Sp1 样 家 族蛋 白 结 合 型 14 ,元 件 典 型 序 列 为 GGGGCGGGGC。生 物 信 息 学 分 析 发 现 ,在 N GAL 基 因 - 416 + 84区 段 存 在 4 个 Sp1 型 TPA 反 应 元 件 ,但 究 竟 是 哪一 个 或 几 个 在 实 际 中 发 挥 作 用 ,以 及 是 否 存 在 新 的TPA 反 应 元 件 ,均 需 进 一 步 实 验 鉴 定 。 最 近 ,我 们联 合 运 用 定 点 突 变 、 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 检 测 系 统和 凝 胶 滞 留 等 实 验 技 术 手 段
39、 研 究 证 明 ,N GAL 基 因的 TPA 反 应 元 件 位 于 其 5 侧 翼 - 95/ - 94 左 右 ,并且 很 可 能 是 一 种 新 结 构 类 型 形 式 ,而 EC109 食 管 癌细 胞 核 内 也 的 确 存 在 着 某 种 核 蛋 白 因 子 能 够 与N GAL 基 因 这 一 区 域 的 相 应 片 段 ( - 107 - 82) 相结 合 (另 文 发 表 ) 。总 之 ,在 N GAL 基 因 - 416 + 84 区 段 发 现 存 在TPA 反 应 元 件 是 十 分 有 意 义 的 。 这 既 有 助 于 深 入 到分 子 水 平 揭 示 为 什
40、么 食 管 上 皮 细 胞 癌 变 中 N GAL 基因 过 表 达 ,同 时 也 有 助 于 进 一 步 认 识 TPA 细 胞 信 号传 递 途 径 网 络 在 肿 瘤 发 生 发 展 中 的 作 用 机 制 。参 考 文 献 :1 Tschesche H , Zolzer V , Triebel S , et al. The human neutro2phil lipocalin support s t he allosteric activation of matrix metal2loproteinasesJ . Eur J Biochem , 2001 , 268 (7) : 19
41、1821928. 2 Yang J , Goetz D , Li J Y , et al. An iron delivery pat hway me2diated by a lipocalinJ . Mol Cell , 2002 ,10 (5) : 104521056. 3 Flo T H , Smit h KD , Sato S , et al. Lipocalin 2 mediates an in2nate immune response to bacterial infection by sequestrating i2ronJ . Nature , 2004 ,432 (7019)
42、: 9172921. 4 许 丽 艳 , 李 恩 民 , 熊 华 淇 , 等 . N GAL 基 因 在 永 生 化 食 管 上 皮细 胞 恶 性 转 化 中 过 表 达 的 研 究 J . 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进展 , 2001 ,28 (6) :8392843. 5 Shen Z , Cen S , Shen J , et al. Study of immortalization andmalignant transformation of human embryonic esophageal epi2t helial cells induced by HPV18 E6 E
43、7 J . J Cancer Res ClinOncol , 2000 ,126 (10) : 5892594. 6 许 丽 艳 ,李 恩 民 ,蔡 唯 佳 ,等 . N GAL 基 因 5 侧 翼 区 转 录 调 控 元件 的 分 段 定 位 鉴 定 J . 肿 瘤 防 治 杂 志 ,2004 ,11 (5) :4492453.7 李 恩 民 ,许 丽 艳 , 蔡 唯 佳 , 等 . SHEEC 食 管 癌 细 胞 中 N GAL 基因 的 功 能 J . 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ,2003 ,35 (3) :2472254. 8 林 珏 龙 ,许 丽 艳 ,李 恩 民
44、,等 . 封 闭 N GAL 基 因 表 达 对 SHEEC食 管 癌 细 胞 微 丝 骨 架 的 影 响 J . 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展 ,2004 ,31 (5) :4092415. 9 Cowland JB , Sorensen OE , Sehested M , et al. Neut rophil ge2latinase2associated lipocalin is up2regulated in human epit helialcells by IL21beta , but not by TNF2alpha J . J Immunol ,2003 ,171
45、(12) : 663026639. 10 Gombart AF , Kwok SH , Anderson KL , et al. Regulation ofneutrophil and eosinophil secondary granule gene expression bytranscription factors C/ EBP epsilon and PU. 1 J . Blood ,2003 ,101 (8) : 326523273. 11 黄 瑞 燕 ,许 丽 艳 , 许 晓 玲 , 等 . N GAL 基 因 5 侧 翼 区 启 动 子 的克 隆 与 鉴 定 J . 肿 瘤 防
46、治 研 究 , 2005 ,32 (6) :3252328. 12 Heinrich R , Livne E , Ben2Izhak O , Aronheim A. The c2J undimerization protein 2 inhibit s cell transformation and act s as atumor suppressor geneJ . J Biol Chem , 2004 ,279 (7) :570825715. 13 Schnekenburger M , Morceau F , Duvoix A , et al. Expressionof glutat hio
47、ne S2transferase P121 in di. erentiating K562 : roleof GA TA21 J . Biochemical and Biophysical Research Com2munications , 2003 ,311 (4) : 8152821. 14 Kim E , Muga SJ , Fischer SM. Identification and characteriza2tion of a phorbol ester2responsive element in t he murine 8S2li2poxygenase gene J . J Biol Chem , 2004 , 279 ( 12 ) : 11188211197.编 辑 : 安 凤 447 肿 瘤 防 治 研 究 2005 年 第 32 卷 第 12 期
