1、MRBiotech_MHE003-96_Human IL-2 ELISA Kit 1 明睿 生物 卓越 服务 人 IL-2 ELISA 试剂盒 Human IL-2 ELISA kit Catalog No. MHE003-96 Size 96T （仅供科研使用） 尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业体外诊断试剂生产技术制造。适用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中天然和重组 IL-2浓度， 仅供科研使用 。其他特殊体液标本请咨询。 使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分 。如有疑问，请联系上海明睿生物技术有限公司，电话：021-64181584
2、；传真：021-51163850； Email: 。 您将得到我们的技术支持。 试剂盒组成： 名 称 规 格 保存条件 抗体预包被酶标板 812 4 冻干标准品 2 支 0.5ng/支 4 标准品和标本稀释液（橙盖瓶） 1 瓶 20ml 4 浓缩生物素化抗体 （紫盖瓶） 1 支 4 生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶） 1 瓶 16ml 4 浓缩酶结合物 （棕盖瓶） 1 支 4(避光 ) 酶结合物稀释液 （紫盖瓶） 1 瓶 16ml 4 浓缩洗涤液 20 （白盖瓶） 1 瓶 50ml 4 显色底物（ TMB） （棕盖瓶） 1 瓶 12ml 4(避光 ) 反应终止液 （红盖瓶） 1 瓶 12ml 4 封
3、板胶纸 6 张 产品说明书 1份 检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA 法。抗人 IL-2单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IL-2 会与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人 IL-2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人 IL-2抗体与结合在单抗上的人 IL-2结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，若反应孔中有 IL-2，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在 450nm处测 OD值， IL-2浓度与 OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 IL-2的浓度。 MRBiotech_MHE003-96_Hu
4、man IL-2 ELISA Kit 2 双抗体夹心法 ELISA 示意图 标本收集: 1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐使用 EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。 3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于 -20， -70电冰箱内，避免反复冻融， 3-6月内检测。 5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备试验器材 (不提供，但可协助购买 ) : 1. 酶标仪 (450nm波长滤光片 ) 2. 进口品牌高精度加
5、液器及一次性吸头：0.5-10ul, 2-20ul, 20-200ul, 200-1000ul 3. 36恒温箱 , 双蒸水或去离子水，坐标纸。 可协助代购相关产品，请咨询。 注意事项: 1. 试剂盒使用前请保存在 2-8。复溶后的标准品应分装后，将其放在 -20 -70贮存。 2. 浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或 1000转 /分离心 1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打 4-5次使溶液混匀。 3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，微加热至 40使结晶完全溶解后
6、再配制洗涤液。（加热温度不要超过 50）使用时洗涤液应为室温。 4. 若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在 -20 -70贮存。避免反复冻融。 5. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。请提前咨询明睿生物科技有限公司。 6. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器 (使用最低频率 )，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 7. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。 8. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否则将影响试验结果。 9. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他
7、体液标本时，请按国家生物试验室安全防护条列执行。 检测前准备工作: 1. 请提前 20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释( 1:20)。未用完的放回 4。 3. 标准品 : 加入标准品 /标本稀释液0.5ml 至冻干标准品中，静置 15分钟，待其充分溶解后，MRBiotech_MHE003-96_Human IL-2 ELISA Kit 3 轻轻混匀 (浓度为1000 pg/ml )。然后根据需要进行稀释。 (建议标准曲线使用以下浓度：1000、 500、 250、 125、 62.5、 31.25、 15.62、 0 pg/ml)。复溶标准品原液（1000
8、 pg/ml ）若未用完请分装后放入 -20以下电冰箱内保存，保存两个月。已稀释的标准品请废弃。 4. 生物素化抗体工作液：按当次试验所需要得用量，使用前 20分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体( 1:30)成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致生物素化抗体量不足，可向明睿公司单独购买生物素化抗体。（须提供抗体批号） 5. 酶结合物工作液：按当次试验所需要得用量，使用前 20分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物( 1:30) 成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致浓缩酶结合物量不足，可向明睿公司单独购买浓缩酶结合物。（须提供酶结合物批号） 标准品稀释方法图例： (以 500u
9、l/管为例，也可根据实际用量来稀释，如 200ul/管 ) 500ul 500ul 500ul 500ul 500ul 500ul Standard 洗涤方法: 1. 自动洗板机：要求注入的洗涤液为 350ul，注入与吸出间隔 15 30秒。洗板 5次。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液 350ul，静置 30秒后甩尽液体，在厚迭吸水纸上拍干。洗板 5次。 操作步骤: 1从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压实自封条，密封口袋，放回 4。 2空白孔加标准品和标本稀释液 ，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品 (100ul/孔
10、)，用封板胶纸封住反应孔， 36孵箱孵育 90分钟。 3提前 20分钟准备生物素化抗体工作液。 4洗板 5次。 5空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液 (100ul/孔 )。用新封板胶纸封住反应孔， 36孵箱孵育 60分钟。 6提前 20分钟准备酶结合物工作液。避光室温 (22-25 )放置。 7洗板 5次。 8空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液 (100ul/孔 )。用新封板胶纸封住反应孔， 36孵箱，避光孵育 30分钟。 9打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 10洗板5 次。 11加入显色底物 (TMB)100ul/孔，避光 36孵箱，避光孵育 1
11、5分钟。 12加入终止液 100ul/孔, 混匀后即刻测量 OD450值(3分钟内) 。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。 13实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。 建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。 结果判断: 1. 每个标准品和标本的 OD值应减去空白孔的 OD值。 1000pg/ml 500pg/ml 250pg/ml 62.5pg/ml 31.25pg/ml 15.62pg/ml125pg/ml MRBiotech_MHE003-96_Human IL-2 ELISA Kit 2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标， OD值作纵坐标，
12、以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的 OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3. 若标本 OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 Human IL-200.20.40.60.811.21.41.61.820 500 1000 1500pg/mlOD450注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。 灵敏度、特异性和重复性: 灵敏度：最小可测人 IL-2达 7pg/ml。 特异性：不与 IL 1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF及 sTNF-RII等反应。 重复性：板内，板间变异系数均 8%。 IL-2简介 ： 白细胞介素 2(IL
13、-2)是 T细胞和NK 细胞产生的 15.5kD糖蛋白，在机体的免疫应答中起重要作用。 Morgan等人首先报道的名称是 T细胞生长因子（ T cell growth factor ， TCGF），1979年在第二届细胞因子研究会上定名为 IL-2。 IL-2的其它名称包括T 细胞替代因子（T cell replacing factor,TRF）、T细胞促分裂因子（ T cell mitogenic factor ， TMF）淋巴细胞条件培养液 （lymphocyte-conditioned medium， LCM） 和杀伤辅助因子（killer helper factor ，KHF ）等。
14、IL-2最重要的作用是诱导 T淋巴细胞增殖（从 G0期进入 S期）和分化。人胸腺中的 T细胞前体表达 IL-2R并分泌低水平的IL-2，这种自分泌作用可促进胸腺细胞增殖。 IL-2参与调节T细胞受体基因的重排和表达。IL-2能诱导NK 细胞增殖，增强 NK细胞的活性，诱导 LAK 细胞和 TIL，并刺激它们产生细胞因子。高剂量IL-2 能引起单核巨噬细胞增殖和分化，并增强单核巨噬细胞杀肿瘤细胞的作用。 IL-2也能刺激已活化的 B细胞增殖，活化 B细胞表达高亲和力 IL-2受体，其中 a链由B 细胞促分裂原诱导表达，而 链由IL-2或 IL-4诱导表达。 IL-2除了支持 B细胞生长外，还能促进免疫球蛋白（ IgM和 IgG）分泌，诱导 J链合成从而加速 IgM的装配和分泌。 IL-2还刺激少突神经胶质细胞产生髓碱性蛋白，对该种细胞的增殖则呈双向性调节。在体内， IL-2有抗肿瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫调节等作用。可溶性 IL-2R作为免疫抑制剂，对白血病、移植排斥和自身免疫病可能有治疗作用。 上海明睿生物技术有限公司 电话：021 6418 1584 传真：021 5116 3850 Email: Vno:04/09 4
