1、齐齐哈尔医学院学报2015年第36卷第2期Journal of Oiqihar University of Medicine，2015，Vo136，No 2 低，但差异无统计学意义(t值分别为109，125，P005)。 对照组移植后各时间点与移植前比较，SNR改变差异无统计 学意义(方差分析，F=0139，P005)。 4组织学观察：冰冻切片荧光显微镜观察可见颈总动脉 内膜损伤处出现红色荧光分布，随着时间推移红色荧光呈逐 步向局部损伤血管壁中膜层及外膜层移行，细胞移植后损伤 局部血管壁组织普鲁士蓝染色示阳性细胞，主要分布于损伤 血管周围病变区。移植后各时间点均可见普鲁士蓝阳性细 胞，以3天最
2、多，其后呈逐渐减少趋势。 讨 论 传统上有关干细胞在体内分布和分化的研究，需在移植 后的一定时间内处死实验动物，组织切片后进行免疫荧光或 免疫组化分析。虽然大部分荧光标记物对细胞活力和增殖分 化影响较小。但存在许多不足之处：随着荧光衰减和细胞分裂 而标记强度下降，不适宜检测12个月以上的干细胞；更为 重要的是，上述传统的标记方法均需离体状态下进行病理学 切片分析，无法动态的纵向观察同一动物干细胞在体内的迁 徙、增殖情况 ；而且，与动物实验不同，干细胞移植后组织 取材、体外检测不适于人体，故寻找一种无创性手段对移植干 细胞进行活体实时示踪显得尤为重要 ，尤其高场MR设备 成为MRI探针检测的新途
3、径 。 本实验首次建立了sD大鼠颈总动脉内膜及外膜同时创 伤动物实验模型。该模型具有成功率高，制作简便的特点，较 单纯血管内皮或外膜损伤模型能进一步增强损伤后的细胞坏 死释放的信号强度，促使移植的干细胞归巢。同时在管壁外 放置袖套，MRI成像显示为清晰均匀低信号与急性期创伤血 管壁高信号改变形成鲜明对比，便于MRI清晰、准确示踪干 细胞移植后归巢现象。本组实验创伤血管壁的信号强度改变 逐渐减少，至12 d时，虽仍低于对照组，但差异无统计学意 义，分析信号强度改变的可能原因有：(1)标记细胞渐迁移出 管壁。(2)随细胞分裂细胞内铁被稀释。(3)细胞内铁释出 细胞。(4)由于免疫排斥反应细胞死亡。
4、 本实验首次构建双标纳米生物探针：BMSCsSPIO-DiI。 实验证实磁性纳米粒子SPIO及荧光染料(DiI)可以有效标记 大鼠骨髓MSCs，在含SPIO-DiI的培养基中BMSCs可继续增 殖，细胞形态无明显变化，此种标记方法安全有效，且标记对 159 细胞活力及增殖无明显影响。本实验应用无创MR活体成像 的方法，可以动态观察磁粒子标记后移植细胞在血管壁的迁 移过程，对于细胞治疗中移植过程的评价提供了可行方法。 同时本实验采用双标的研究方法，通过荧光显像与MR显像 相互验证，弥补了7TmicroMRI活体示踪的不足，排除了动物 实验过程中出血等影响MR信号改变的不确定因素，二者相 互补充可
5、以对移植干细胞的动态变化、迁移进行精确描述。 为下一步干细胞治疗疗效评价提供了可靠的实验依据。 当然，本实验尚存在一些不足，如观察时间有限；采用的 是自行合成的SPIO等，但笔者希望通过本研究能推动干细胞 移植治疗血管创伤的研究进展；同时为临床干细胞治疗疾病 的疗效评价提供客观依据，促进干细胞治疗的临床应用。 参考文献 Weissleder RMolecular imagirig：exploring the next frontierJ Radiology，1999，212：609-614 Corti R，Badimon J，Mizsei G，et al，Real time magnetic
6、resonance guided endomyocardial local deliveryJHeart，2012， 91：348-353 Yeh TC，Zhang W，Ildstad ST，Ho CIn vivo dynamic MRI tracking of rat T-cells labeled with superparamagnetic ironoxide particlesJMagn Reson Med，1995，33：200-208 Arbab AS，Bashaw LA，Miller BR，et a1Intracytop lasmic tagging of cells ferum
7、oxides and transfeetion agent for cellular magnetic resonance imaging after cell transplantation：methods and techniquesJTransplantation，2013，76：11231130 Honig MG，Hume RIFluorescent earbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in longterm culturesJ J Cell Biol，1986，103(1)
8、：171187 Andrade W，Seabrook TJ，Johnston MG，et a1The use of the lipophilic fluoroehmme CMDil for tracking the migration of lymphocytesJJ Immunol Methods，1996，194(2)：181189 Thakur M，Lentle BCRepoof a summit on molecular imaging JRadiology，2013，236：753-755 Weissleder R，Stark DD，Engelstad BL，et a1Superpa
9、ramagetic iron oxide：pharmacokineties and toxicityJAJR，1989，152： 167173 Hoehn M，Kustermann EBlunk J，et a1Monitoring of implanted stem cell migration in vivo：a highly resolved in vivo magnetic resonance imaging investigation of experimental stroke in ratJ Proc Natl Acad Sci USA，2012，99：1626716272 Wan
10、g DS，Dake MD，Park JM，et a1Molecular imaging：A primer for interventionalists and imagemJ JJ Vasc Interv Radiol，2oo6，17：14o51423 (收稿日期：20141015) 孕早、中、晚期高蛋白膳食对子代大鼠HSL基因的影响 董艳梅张际绯孙要武钱学艳李省三程宇 薛海峰刘吉成 【摘要】 目的研究孕早、中、晚期高蛋白膳食(HPD)对子代成年肥胖及激素敏感性脂肪酶(HSL) 表达的作用，为不同孕龄妇女合理膳食及早期防治肥胖提供依据。方法孕早、中、晚期大鼠分别给予 HPD和标准膳食(sD)，
11、其子代分别为孕早期、中期、晚期高蛋白(EP、MP、LP)组和对照(CON)组，大鼠断 基金项目：黑龙江省博士后资助经费资助(LBHZ10007) 作者单位：161006齐齐哈尔医学院(董艳梅、张际绯、孙要武、钱学艳、李省三、程宇、薛海峰、刘吉成)；150000黑龙 江中医药大学博士后流动站齐齐哈尔医药科学研究所工作站(董艳梅) 通信作者：刘吉成 jJ 1J 11J 1J m 160 齐齐哈尔医学院学报2015年第36卷第2期Journal ofQiqiharUniversity ofMedicine，2015，o136，No2 乳后sD至成年高脂膳食诱导肥胖。分批处死大鼠取白色脂肪，FQPCR
12、法检测HSL mRNA的水平。结 果与对照组相比，EP、MP、LP组大鼠的体重降低(P005)，HSL水平升高。结论孕早、中、晚期HPD 可程序性升高子代HSL的水平，增加脂肪分解，减少成年肥胖的发生，其中孕中、晚期对肥胖的预防作用 较孕早期明显。 【关键词】肥胖；不同孕龄；HSL；子代 生命早期膳食对肥胖等慢性病的影响已成为研究的热 点。研究证明高蛋白膳食(HPD)可以减少脂肪合成和肥 胖。但不同孕龄HPD对子代成年肥胖的不同作用少见报 道。肥胖相关基因激素敏感性脂肪酶(hormonesensitive lipase，HSL)在脂肪分解代谢中具有重要作用。为此，我们拟 研究孕早、中、晚期HP
13、D对子代肥胖及HSL mRNA的影响，为 肥胖的早期防治提供依据。 材料与方法 1实验动物：Wistar近交系大鼠分别在孕早、中、晚期给 予HPD和标准膳食(SD)，其子代分别为孕早期、中期、晚期 高蛋白(EP、MP、LP)组和对照(CON)组，断乳后SD至成年， 将CON组大鼠随机分为高脂对照(HFC)组和CON组(标准 膳食)。EP、MP、LP和HFC组均高脂诱导肥胖。为动态观 察，各阶段各组分别处死8只大鼠，取白色脂肪组织检测HSL mRNA的水平。 2饲料：标准饲料参考USDA人类营养研究中心推荐的 配方AIN-93G配制。以此为基础分别添加猪油或干酪素，减 少豆油和碳水化合物含量，配
14、制出高脂饲料和高蛋白饲料。 3指标计算：基因相对含量=待测基因mRNA的浓度 Bactin mRNA的浓度。 4荧光定量聚合酶链反应：采用FQPCR两步法。 5统计分析：采用单因素方差分析，运用SPSS 190统计 软件处理数据，组间两两比较采用Dunnettg t检验。 结 果 1大鼠体重：CON和HFC组大鼠断乳、高脂诱导肥胖前 和后的体重分别为395、2027和3295克，EP、MP、LP组大 鼠在断乳时的体重分别为330、308、285克，高脂诱导肥胖 前的体重分别为1894、1862、1849克，高脂诱导肥胖后的 体重分别为1978、2947、2902克。动态观察可见，各实验 组大鼠
15、的体重均低于对照组，尤其是在接触高脂膳食(母乳、 诱导肥胖的高脂膳食)后更加明显(P005)。说明不同孕 龄给予HPD可以降低子代成年肥胖的发生，其中孕中、晚期 HPD降低子代肥胖的作用更明显。 2HSL mRNA的表达：见图1，EP、MP、LP组大鼠白色 脂肪组织中HSL mRNA的表达持续高于CON和HFC组。 动态观察发现，HSL基因在高脂诱导肥胖后升高更加明 显。说明不同孕龄给予HPD可持续升高子代HSL基因的 表达，其中孕中期、晚期HPD升高子代HSL基因的作用更 明显。 图1 白色脂肪组织中HSL基因的表达 讨 论 阶段 营养素是孕期的主要宫内环境因素。孕期低蛋白膳食将 导致子代血
16、压升高，影响的程度与干预时间密不可分，其中孕 晚期营养不良对后代健康的影响更严重 。本研究中孕早、 中、晚期HPD大鼠子代各阶段的体重均低于对照组，而且孕 中期、晚期大鼠子代的体重降低较孕早期明显。说明不同孕 龄HPD可以持续降低子代成年肥胖的发生，其中孕中期、晚 期HPD预防子代肥胖的作用较孕早期明显。 HSL可将DG水解为FFA及甘油，FFA可经B氧化供能， 也可被重新酯化成TG及磷脂。文献报道脂肪细胞的最大脂 解能力和HSL水平成强的线性相关 。Ray报道肥胖者皮 下脂肪HSL蛋白水平下降 ，非肥胖患者中有肥胖家族史者 HSL的脂解能力下降 。本文各实验组HSL基因的表达从 断乳时起持续
17、高于对照组。说明不同孕龄给予HPD可持续升 高子代HSL的表达，促进脂肪分解代谢，缓解脂代谢紊乱，降低 体脂含量和肥胖的发生。因而HSL是防治肥胖的候选基因。 参考文献 1Stepien M，Gaudichon C，Fromentin G，et a1Increasing protein at the expense of carbohydrate in the diet downregulates slucosc utilization as glucose sparing effect in ratsJPLoS One，2011，6 (2)：e14664 2 EllisHutchings R
18、G，Zucker RM，Grey BE，et a1Altered health outcomes in adult offspring of Sprague Dawley and Wistar rats undernourished during early or late pregnancyJBirth Defects Res B Dev Reprod Toxicol，2010，89(5)：396-407 3Large V，Arner P，Reynisdottir S，et a1Hormone-sensitive lipase and activity in relation to lipo
19、lysis in human fat cellJJ Lipid Res，1998，39：16881695 4 Ray H，Pinteur C，Frering V，et a1Depotspecific differences in perilipin and hormonesensitive lipase expression in lean and obese JLipids in Health and Disease，2009，8：58 5 Sztalryd C，Komaromy MC，Kraemer FBOverexpression hormone sensitive lipase prevents triglyceride accumulation in adipocyteJ J Clin Invest，1995，95：2652-2661 (收稿日期：20l41216) 8 6 4 2 0 0 O 0 一量茸孟，1H、 * 弓 靛霉
