1、选修一 生物技术实践 高考复习,考试范围：生物学选修1课本实验1、2、4、5、8、10、11,实验1 大肠杆菌的培养和分离,大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧型的肠道杆菌。,一、无菌操作（课本P20-21）,目的：防止杂菌污染 要求： (1)各种器皿必须是无菌的 (2)各种培养基必须是无菌的 (3)接种等操作过程要避免杂菌污染,（1）消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。,消毒与灭菌的概念及两者的区别,（2）灭菌的定义：,以化学或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,常用
2、的消毒和灭菌的方法：,1.高压蒸汽灭菌：器皿、一般的培养基,2.灼烧灭菌：接种环,3.G6玻璃砂漏斗过滤：含尿素等受热分解的培养基,4.紫外线灭菌：空气,5.酒精等化学药剂消毒：生物材料、实验员的手等,水,无机盐,碳源：有机碳（如糖类、蛋白胨、牛肉膏）异养微生物所需的碳源无机碳（如 NaHCO3、 CaCO3 、 CO2 ）自养微生物所需的碳源,氮源：NO3-、NH4+、NH3 、含氮有机物为不能固氮的微生物所需氮源N2固氮微生物所需氮源,生长因子：维生素、氨基酸、碱基有机小分子不同的微生物所需的生长因子不同,二、微生物的营养,三、培养基种类 a.固体培养基成分：+琼脂（作为凝固剂）作用：分离
3、（纯化） 细菌、计数、保留菌种 等种类：平面培养基 斜面培养基 b.液体培养基不加琼脂，其它成分 与固体培养基相同作用：扩大培养,LB培养基与MS培养基： 成分不同：添加的营养物质成分、生长调节剂成分不同。 用途不同： LB培养基：用于细菌培养 MS培养基：用于植物组织培养,四、培养基制备方法 1.计算 2.称量 3.溶化 4.调pH值 5.加塞包扎 6.灭菌 7.倒平板,五、分离细菌方法（课本P23、27）,1、划线分离法(1)接种环灼烧、冷却、蘸取菌液；(2)在平板上第一次划线；(3)接种环灼烧、冷却后直接从第一次划线末端开始第二次划线，重复3次；(4)将培养皿倒置，无菌培养24h，在划线
4、末端出现单菌落。,倒置原因：防止冷凝水滴落污染培养基，达不到分离的目的。,2、涂布分离法,4）将培养皿倒置，在37恒温箱中培养2448h。,1）稀释菌液（10-510-7倍）课本P26图5,2）取0.1ml菌液滴在平板中央,3）用玻璃刮刀将菌液涂布在整个平板上,两法比较：（课本P20） 划线分离法：方法简单，但不易形成单菌落 涂布分离法：单菌落更易分开，便于记录，但操作复杂些。,大肠杆菌的培养和分离实验步骤：课本P22-23,培养基灭菌,将LB液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌,将灭菌后冷却到60的LB固体培养基倒入灭菌过的培养皿中，制作平面培养基.,将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中，
5、然后在37摇床中震荡培养12h。,用接种环取震荡培养后的菌液，并在固体培养基上划线，然后将划线后的培养皿倒置与37的恒温培养箱中培养1224h，观察划线末端的菌落生长情况.,用接种环取单菌落，用划线法接种于斜面上，在37的恒温培养箱中培养24h，再放入4的冰箱中保存 。,实验2 分离以尿素为氮源的微生物 （课本P25-27）,一）有些细菌含有 脲酶 ，它们可以通过降解尿素 作为其生长的 氮源 。 反应式：二）尿素固体培养基的配置：0.025g葡萄糖，0.12gNaCl，0.12gK2HPO4， 水15mL，0.25mg酚红和0.5g琼脂糖），加上封口膜后 灭菌 ，待冷却至60时，加入通过 G6
6、玻璃漏斗 过滤（使之 无菌 ）的10mL尿素溶液，摇动，混合均匀后待用。,三）培养基各成分的功能 1、葡萄糖：为微生物生长繁殖的碳源和能源； 2、NaCl和K2HPO4的作用：为微生物生长繁殖提供必要的无机盐 ； 3、酚红的作用： 作为指示剂 ； 4、琼脂糖的作用： 作为培养基的凝固剂 ； 为何不选择琼脂？ 四）取样注意点：只取悬液 五）实验结果：全营养培养基中的菌落 较多 。尿素固体培养基上的菌落 较少 ，并且菌落周围具有 红 色的环。,实验4 果汁中的果胶和果胶酶 （课本P33-34）,一）果胶的化学组成、作用和性质 组成：由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成。 作用：粘合剂 性质：不溶于乙醇
7、（提取果胶）,二）果胶酶的种类 果胶酶和果胶甲酯酶 提取自：黑曲霉、苹果青霉等,三）鉴定果胶酶的活性 通过果汁的出汁率和澄清度,1.概念：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的酶制剂。,一、固定化酶,实验6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测（课本P38-39）,2.酶的固定化方法：,（1）固定化酶提高了酶的稳定性，可较长时间地贮存和使用。 （2）酶固定化后催化反应的过程可管道化和自动化，利于工业化使用。 （3）固定化酶可反复使用，更经济。 （4）酶不溶解在催化反应的溶液中，产物更易纯化。,3.固定化酶的优点：,二、a-淀粉酶的固定化,5mg a-淀粉
8、酶溶于4mL蒸馏水中,加5g石英砂搅拌30min,石英砂和酶溶液一起灌注到注射器中,10倍体积水以1mL/min流速洗涤未吸附的游离淀粉酶,实验8 果酒和果醋的制作 （课本P45-50）,一）用葡萄制作葡萄酒,挑选消毒冲洗匀浆,挑选：选成熟果，除青、病、烂果,消毒：高锰酸钾溶液中浸泡5min将微生物杀死，包括野生酵母,冲洗：流水清洗,匀浆：低速打浆，避免将籽打碎,在干酵母中加入少量温水调成糊状，再加一小撮蔗糖混匀（活化酵母菌）。,装量：不超过2/3 条件：2530，23天,二）用果汁制作果酒,制取果汁,装瓶,发酵,取酒,需要过滤,比例：2L发酵罐、1L果汁、 200g蔗糖、1g干酵母,前3天主
9、要是需氧呼吸（负压） 后7天主要是厌氧呼吸,虹吸法,果醋发酵装置（课本P49）,（发酵瓶）,1、乙瓶中锯末量：八分满（80%）,2、乙瓶下口的玻璃管：下管：出醋上管：通入空气（管内要塞有脱脂棉球，管的另一端要升至锯末之上）,3、检测：醋酸生成和发酵完成,实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 （课本53-54）,一、泡菜的腌制1、菌种：假丝酵母、乳酸菌2、原理：在无氧条件下，将菜中的糖和其他营养物分解为有机酸、醇类物质及亚硝酸盐。3、白酒和盐的作用白酒：抑制泡菜表面杂菌生长；调味剂增加醇香盐： 灭菌；渗出蔬菜中水分；调味。4、无氧环境的创造：水封,二、亚硝酸盐的测定测定原理亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。标准曲线以亚硝酸钠质量为横坐标，以光密度值为纵坐标，作标准曲线。计算方法,实验11 植物的组织培养（课本P59-61）,生根培养基：含NAA，不含BA,若使用自然生长植物，需要消毒,高考顺利,前程似锦,未稀释,稀释,
