1、外科学(骨科)专业优秀论文 强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞在软骨损伤中的作用及分化因素的研究关键词：强直性脊柱炎 滑膜组织 破骨细胞 肿瘤坏死因子- 血管内皮生长因子 基质金属蛋白酶 发病机制摘要：背景： 强直性脊柱炎的主要病理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活
2、性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激
3、因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破
4、坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Spearman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较
5、与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成
6、纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性
7、表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，强直性脊柱炎组基质金属蛋白酶-3mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及Mankin 评分具有相关性(r=491, P=0024, r=728, P=0001)原位杂交技术联合酶组织化学检测可见在细胞内的棕黄色颗粒变成棕红色； 3成功分离强直性脊柱炎滑膜组织中单核巨噬细胞， TRAP 染色可见细胞大而多核，细胞浆内有红色颗粒；滑膜单核巨噬细胞与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测可见软骨表面不定型物质脱落，不平整，胶原暴露、断裂； 4原位杂交技术检测肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，可见强直性脊
8、柱炎滑膜组织衬里层及衬里下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，肿瘤坏死因子-mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及 Maukin 评分具有相关性(r=0634, P=0002；r=851，P=0001)、血管内皮细胞生长因子 mRNA 阳性细胞灰度值与TRAP 阳性染色面积比及 Mankin 评分具有显著相关性(r=598, P=0004；r=0851，P=0001)。 5第 3 代滑膜成纤维细胞成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶表达，可见成纤维细胞内有黑色颗粒，对照组阴性表达；免疫组织化学染色检测 I 型胶原，可见细胞内有黄色
9、颗粒，对照组阴性表达；放免法检测细胞内骨钙素含量，与对照组比较有统计学差异(Plt;001)；滑膜成纤维细胞培养第 18 天，茜素红染色可见钙结节形成。 结论： 1强直性脊柱炎滑膜组织存在 TRAP+细胞，对关节软骨具有破坏作用，是强直性脊柱炎关节软骨破坏的重要因素，其表达基质金属蛋白酶-3 是软骨破坏的重要途径之一。 2强直性脊柱炎滑膜组织中存在破骨细胞分化的环境：成纤维细胞表达成骨细胞特性、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子的表达，是构成强直性脊柱炎破骨细胞分化的重要环境因素。 3强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞也是强直性脊柱炎病理性成骨的重要因素。正文内容背景： 强直性脊柱炎的主要病
10、理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成
11、熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节
12、液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强
13、直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Spearman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE
14、染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞
15、被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，强直性脊柱炎组基质金属蛋白酶-3mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及Mankin 评分具有相关性(r=491, P=0024, r=728, P=00
16、01)原位杂交技术联合酶组织化学检测可见在细胞内的棕黄色颗粒变成棕红色； 3成功分离强直性脊柱炎滑膜组织中单核巨噬细胞， TRAP 染色可见细胞大而多核，细胞浆内有红色颗粒；滑膜单核巨噬细胞与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测可见软骨表面不定型物质脱落，不平整，胶原暴露、断裂； 4原位杂交技术检测肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，可见强直性脊柱炎滑膜组织衬里层及衬里下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，肿瘤坏死因子-mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及 Maukin 评分具有相关性(r=06
17、34, P=0002；r=851，P=0001)、血管内皮细胞生长因子 mRNA 阳性细胞灰度值与TRAP 阳性染色面积比及 Mankin 评分具有显著相关性(r=598, P=0004；r=0851，P=0001)。 5第 3 代滑膜成纤维细胞成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶表达，可见成纤维细胞内有黑色颗粒，对照组阴性表达；免疫组织化学染色检测 I 型胶原，可见细胞内有黄色颗粒，对照组阴性表达；放免法检测细胞内骨钙素含量，与对照组比较有统计学差异(Plt;001)；滑膜成纤维细胞培养第 18 天，茜素红染色可见钙结节形成。 结论： 1强直性脊柱炎滑膜组织存在 TRAP+细胞，对关节软骨具有破坏
18、作用，是强直性脊柱炎关节软骨破坏的重要因素，其表达基质金属蛋白酶-3 是软骨破坏的重要途径之一。 2强直性脊柱炎滑膜组织中存在破骨细胞分化的环境：成纤维细胞表达成骨细胞特性、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子的表达，是构成强直性脊柱炎破骨细胞分化的重要环境因素。 3强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞也是强直性脊柱炎病理性成骨的重要因素。背景： 强直性脊柱炎的主要病理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎
19、性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细
20、胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不
21、十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Sp
22、earman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之
23、间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=
24、0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，强直性脊柱炎组基质金属蛋白酶-3mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及Mankin 评分具有相关性(r=491, P=0024, r=728, P=0001)原位杂交技术联合酶组织化学检测可见在细胞内的棕黄色颗粒变成棕红色； 3成功分离强直性脊柱炎滑膜组织中单核巨噬细胞， TRAP 染色可见细胞大而多核，细胞浆内有红色颗粒；滑膜单核巨噬细胞与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测
25、可见软骨表面不定型物质脱落，不平整，胶原暴露、断裂； 4原位杂交技术检测肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，可见强直性脊柱炎滑膜组织衬里层及衬里下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，肿瘤坏死因子-mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及 Maukin 评分具有相关性(r=0634, P=0002；r=851，P=0001)、血管内皮细胞生长因子 mRNA 阳性细胞灰度值与TRAP 阳性染色面积比及 Mankin 评分具有显著相关性(r=598, P=0004；r=0851，P=0001)。 5第 3 代
26、滑膜成纤维细胞成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶表达，可见成纤维细胞内有黑色颗粒，对照组阴性表达；免疫组织化学染色检测 I 型胶原，可见细胞内有黄色颗粒，对照组阴性表达；放免法检测细胞内骨钙素含量，与对照组比较有统计学差异(Plt;001)；滑膜成纤维细胞培养第 18 天，茜素红染色可见钙结节形成。 结论： 1强直性脊柱炎滑膜组织存在 TRAP+细胞，对关节软骨具有破坏作用，是强直性脊柱炎关节软骨破坏的重要因素，其表达基质金属蛋白酶-3 是软骨破坏的重要途径之一。 2强直性脊柱炎滑膜组织中存在破骨细胞分化的环境：成纤维细胞表达成骨细胞特性、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子的表达，是构成强直性脊柱炎破
27、骨细胞分化的重要环境因素。 3强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞也是强直性脊柱炎病理性成骨的重要因素。背景： 强直性脊柱炎的主要病理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造
28、血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破
29、骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨
30、细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Spearman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属
31、蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测
32、钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，强直性脊柱炎组基质金属蛋白酶-3
33、mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及Mankin 评分具有相关性(r=491, P=0024, r=728, P=0001)原位杂交技术联合酶组织化学检测可见在细胞内的棕黄色颗粒变成棕红色； 3成功分离强直性脊柱炎滑膜组织中单核巨噬细胞， TRAP 染色可见细胞大而多核，细胞浆内有红色颗粒；滑膜单核巨噬细胞与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测可见软骨表面不定型物质脱落，不平整，胶原暴露、断裂； 4原位杂交技术检测肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，可见强直性脊柱炎滑膜组织衬里层及衬里下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统
34、计学差异(Plt;001)，肿瘤坏死因子-mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及 Maukin 评分具有相关性(r=0634, P=0002；r=851，P=0001)、血管内皮细胞生长因子 mRNA 阳性细胞灰度值与TRAP 阳性染色面积比及 Mankin 评分具有显著相关性(r=598, P=0004；r=0851，P=0001)。 5第 3 代滑膜成纤维细胞成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶表达，可见成纤维细胞内有黑色颗粒，对照组阴性表达；免疫组织化学染色检测 I 型胶原，可见细胞内有黄色颗粒，对照组阴性表达；放免法检测细胞内骨钙素含量，与对照组比较有统计学差异(Plt;00
35、1)；滑膜成纤维细胞培养第 18 天，茜素红染色可见钙结节形成。 结论： 1强直性脊柱炎滑膜组织存在 TRAP+细胞，对关节软骨具有破坏作用，是强直性脊柱炎关节软骨破坏的重要因素，其表达基质金属蛋白酶-3 是软骨破坏的重要途径之一。 2强直性脊柱炎滑膜组织中存在破骨细胞分化的环境：成纤维细胞表达成骨细胞特性、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子的表达，是构成强直性脊柱炎破骨细胞分化的重要环境因素。 3强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞也是强直性脊柱炎病理性成骨的重要因素。背景： 强直性脊柱炎的主要病理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于
36、相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节
37、细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞
38、是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯
39、胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Spearman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂
40、交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯
41、胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，强直性脊柱炎组基质金属蛋白酶-3mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及Mankin 评分具有相关性(r=491, P=0024, r=728, P=0001)原位杂交技术联合酶组织化学检测可见在细胞内的棕黄色颗粒变成棕红色； 3成功分离强直性脊柱炎
42、滑膜组织中单核巨噬细胞， TRAP 染色可见细胞大而多核，细胞浆内有红色颗粒；滑膜单核巨噬细胞与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测可见软骨表面不定型物质脱落，不平整，胶原暴露、断裂； 4原位杂交技术检测肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，可见强直性脊柱炎滑膜组织衬里层及衬里下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Plt;001)，肿瘤坏死因子-mRNA 阳性细胞灰度值与 TRAP 阳性染色面积比及 Maukin 评分具有相关性(r=0634, P=0002；r=851，P=0001)、血管内皮细胞生长因子 mRNA 阳性细胞灰度值
43、与TRAP 阳性染色面积比及 Mankin 评分具有显著相关性(r=598, P=0004；r=0851，P=0001)。 5第 3 代滑膜成纤维细胞成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶表达，可见成纤维细胞内有黑色颗粒，对照组阴性表达；免疫组织化学染色检测 I 型胶原，可见细胞内有黄色颗粒，对照组阴性表达；放免法检测细胞内骨钙素含量，与对照组比较有统计学差异(Plt;001)；滑膜成纤维细胞培养第 18 天，茜素红染色可见钙结节形成。 结论： 1强直性脊柱炎滑膜组织存在 TRAP+细胞，对关节软骨具有破坏作用，是强直性脊柱炎关节软骨破坏的重要因素，其表达基质金属蛋白酶-3 是软骨破坏的重要途径之一。
44、 2强直性脊柱炎滑膜组织中存在破骨细胞分化的环境：成纤维细胞表达成骨细胞特性、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子的表达，是构成强直性脊柱炎破骨细胞分化的重要环境因素。 3强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞也是强直性脊柱炎病理性成骨的重要因素。背景： 强直性脊柱炎的主要病理学特点是病变关节内早期滑膜组织异常增生，大量单、多核细胞浸润，血管翳形成，侵蚀骨、软骨表面，于相接毗邻处形成局灶性骨、软骨破坏灶，晚期脊柱周围韧带、滑膜、椎间盘骨化强直，并同时伴有全身或关节局部骨质疏松表现。骨质丢失及软骨破坏是炎性关节病及多种类风湿性疾病中的一个常见的临床特点，来自关节炎动物模型和类风湿性关节炎的研究结果已
45、经确定，破骨细胞在炎性关节疾病发病过程中数量及活性都有所增加，在骨质破坏/丢失中起关键性作用。大量的研究证明破骨细胞及其前体来源于骨髓造血系统的单核巨噬细胞系，外周血单核巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、脾细胞及牙槽巨噬细胞等都可以被分化成有活性的的破骨细胞。在破骨细胞前体分化为成熟的破骨细胞过程中，成骨细胞/基质细胞的作用是必需的，是破骨细胞成熟、发育及分化过程中的重要调节细胞。没有成骨细胞/基质细胞参与并与成骨细胞/基质细胞的接触，前体破骨细胞就不能分化为成熟破骨细胞，成熟破骨细胞也不能活化为功能性破骨细胞。分子水平研究破骨细胞的分化也是近年来研究的热点，护骨素/细胞核因子 B 受体活化因子配基/细
46、胞核因子 B 受体活化因子系统、巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子- 等都可以促进破骨细胞的分化成熟。分化成熟的破骨细胞通过分泌酸、溶酶体酶及蛋白酶来降解骨基质，其中基质金属蛋白酶-3 是软骨基质降解中的一种较为重要的酶，并在强直性脊柱炎外周血及关节液中都有表达。在强直性脊柱炎滑膜部位聚集大量的单核巨噬细胞组成了滑膜增生的重要组成成份，这些细胞是否是破骨前体细胞，他们是否参与了局灶性软骨的破坏，其破坏途径是否与基质金属蛋白酶-3 有关，滑膜组织中是否存在与其分化有关的因子，都不十分明确。 目的： 本研究采用强直性脊柱炎患者骶髂关节及髋关节部位的滑膜组织，通过检测及培养滑膜
47、组织中破骨细胞、基质金属蛋白酶-3 及其与软骨破坏之间的关系，探讨破骨细胞对软骨的破坏作用及破坏途径；通过检测强直性脊柱炎滑膜组织中成骨细胞及破骨细胞分化因子肿瘤坏死因子-、血管内皮细胞生长因子的表达，探讨强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞的分化因素及分化途径。 方法： 采用强直性脊柱炎患者骶髂关节或髋关节部位的滑膜组织及软骨，制备石蜡切片和冰冻切片，经 HE 染色及甲苯胺蓝染色观察软骨组织病理学改变并进行 Mankin 评分，酶组织化学 TRAP 染色观察 TRAP+细胞的阳性染色面积及分布，采用 Spearman 相关分析分析其与 Mankin 评分间的相关性；原位杂交技术检测滑膜组织中基质金属
48、蛋白酶-3mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组间图像灰度值的差异；酶组织化学联合原位杂交技术检测 TRAP+细胞上基质金属蛋白酶的表达，分析 TRAP+细胞与基质金属蛋白酶-3 的关系；分离纯化培养强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞，并与正常关节软骨共培养，HE 染色及电镜检测软骨的破坏程度，进一步探讨 TRAP+细胞对软骨破坏的破坏作用及破坏途径。 原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中肿瘤坏死因子-mRNA、血管内皮生长因子 mRNA 的表达，采用图像分析系统比较与正常对照组图像灰度值之间的差异，与 TRAP+染色面积及基质金属蛋白酶-3mRNA 进行 Spearman 相关性分析
49、；分离纯化培养滑膜成纤维细胞，取第 3 代滑膜成纤维细胞进行成骨鉴定：钙钴法检测碱性磷酸酶、免疫组织化学法检测 I型胶原，茜素红染色检测钙结节及放射免疫法检测骨钙素的含量。 结果： 1强直性脊柱炎滑膜组织酶组织化学-TRAP 染色可见滑膜组织衬里层及滑膜软骨交界部部分细胞被染成红色，对照组阴性，两组阳性细胞染色面积比具有统计学差异(Plt;001)；HE 染色及甲苯胺蓝染色强直性脊柱炎软骨破坏程度，并行组织病理学 Mankin 评分，评分与 TRAP 阳性染面积比具有显著相关性(r=0712, P=0001)； 2原位杂交技术检测强直性脊柱炎滑膜组织中基质金属蛋白酶-3mRNA 的表达可见滑膜衬里层及滑膜下层细胞有棕黄色颗位沉着，对照组阴性表达，两组图象灰度值比较有统计学差异(Pl
