1、免疫学专业优秀论文 人巨细胞病毒 M 抗原表位的筛选与初步应用研究关键词：人巨细胞病毒 疱疹病毒 免疫抑制 抗原表位 检测试剂盒 抗体检测摘要：人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗 HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMV
2、MME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠
3、抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能
4、在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预
5、防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。正文内容人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度
6、同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体
7、性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞
8、的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一
9、定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠
10、抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g
11、标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HC
12、MV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HC
13、MV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 H
14、CMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗
15、 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首
16、先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属
17、 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的
18、gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山
19、羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV I
20、gG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在
21、成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的
22、一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;
23、HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40
24、份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显
25、性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对C
26、MVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME
27、抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HC
28、MV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾
29、病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMV
30、MME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 F
31、ITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG
32、阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临
33、床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，
34、ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现
35、分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原
36、表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能
37、够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot
38、结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVMME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细
39、胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，A
40、D2 能够与 6 份血清反应，CMVMME 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。人巨细胞病毒属 疱疹病毒亚科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中 HCMV 的感染呈现不显性临床症状，但对于免疫抑制人群能造成严重疾病，甚至导致生命的危险。目前 HCMV 临床检测手段并不完善，也没有一种有效的疫苗能够预防病毒的感染。 本实验以噬菌体展示技术
41、为手段，以标准羊抗HCMV 多抗为靶标，通过正常山羊 IgG 抗体消减筛选到一个 gM 抗原表位CMVMME，核心序列为-(由于专利问题序列未公开)。经计算机分析及Blast 搜索，CMVMME 与 gM 蛋白某一肽段高度同源；Western Blot 方法证实鼠抗 CMVMME 抗体不仅能够特异结合 HCMV 病毒粒子，也能特异结合重组表达的 gM多肽。表明 CMVMME 是 gM 的一个线性表位。 为初步研究单氨基酸突变对CMVMME 结合抗体活性的影响，将 CMVMME 中的关键氨基酸人工单突变为甘氨酸，ELISA 和 western Blot 结果发现将谷氨酰胺突变为甘氨酸后，CMVM
42、ME 结合HCMV 多抗的活性明显下降，而其它氨基酸单突变后 CMVMME 活性未见明显变化。提示单氨基酸突变时谷氨酰胺残基影响着 CMVMME 特异结合 HCMV 多抗的活性。 为证实鼠抗 CMVMME 多抗具有中和抗体性质，通过病毒中和实验，分别用 50 g 标准 HCMV 多抗 B65275G、鼠抗 CMVMME 抗体、正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理 50TCIDlt;,50gt;HCMV 病毒，发现用鼠抗 CMVMME 抗体处理后的病毒的感染能力大大降低；用 FITC 标记病毒即刻早期蛋白表达的方法发现分子量为 68KD 的病毒即刻早期蛋白在细胞内的表达数量明显减少。标准羊抗 HCMV
43、多抗 B65275G 几乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗体和正常山羊抗体处理的病毒与不加任何抗体处理的病毒感染能力无明显变化，表明鼠抗 CMVMME 多抗是一种具有中和作用的抗体，它能在一定程度上阻断 HCMV 对细胞的侵袭。 为了验证 CMVMME 与 HCMV 感染的人血清之间的特异性结合反应，首先采用两个不同生物公司生产的 HCMV IgG ELISA 检测试剂盒分别与 40 份人血清反应，发现有 8 份血清均为 HCMV IgG 阳性。在这 8 份 IgG 阳性人血清中，重组表达的已知的 gB 抗原表位区 ADl 能够与 5 份血清反应，AD2 能够与 6 份血清反应，CMVMME
44、 能够与 3 份血清发生特异性结合反应。将 AD1、AD2 和 CMVMME 混合则有7 份血清与之反应，表明三种抗原与 HCMV 抗体反应具有一定的互补性。 本研究在 HCMV 诊断和预防研究上进行了摸索和探讨，取得了一定的结果，这将为进一步研究诊断和预防 HCMV 的试剂打下良好的基础。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamend
45、obj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋 Kx 時 k,褝仆? 稀?i 攸闥-) 荮vJ 釔絓|?殢 D 蘰厣?籶(柶胊?07 姻Rl 遜 ee 醳 B?苒?甊袝 t 弟l?%G 趓毘 N 蒖與叚繜羇坯嵎憛?U?Xd* 蛥?-.臟兄+鮶 m4嵸/E 厤U 閄 r塎偨匰忓tQL 綹 eb?抔搉 ok 怊 J?l?庮 蔘?唍*舶裤爞 K 誵Xr 蛈翏磾寚缳 nE 駔殞梕 壦 e 櫫蹴友搇6 碪近躍邀 8 顪?zFi?U 钮 嬧撯暼坻7/?W?3RQ 碚螅 T 憚磴炬 B- 垥 n 國 0fw 丮“eI?a揦(?7 鳁?H?弋睟栴?霽 N 濎嬄! 盯 鼴蝔 4sxr?溣?檝皞咃 hi#?攊(?v 擗谂馿鏤刊 x 偨棆鯍抰Lyy|y 箲丽膈淢 m7 汍衂法瀶?鴫 C?Q 貖 澔?wC(?9m.Ek?腅僼碓 靔 奲?D| 疑維 d袣箈 Q| 榉慓採紤婏(鞄-h-蜪7I冑?匨+蘮.-懸 6 鶚?蚧?铒鷈?叛牪?蹾 rR?*t? 檸?籕
