1、第15章 免疫学检测方法及其原理,1解释血清学反应的概念和特点2叙述抗原抗体检测方法及用途3简述免疫标记技术的原理和方法4简述T细胞功能检测的方法,学习目标,第1节 抗原和抗体的检测,一、原理,利用抗原抗体在体外特异性结合后出现的各种现象,可对样品中的抗原或抗体进行定性、定位和定量的检测,未知,抗体,抗原,已知,抗原,抗体,检测,检测,二、特点,3可见性,是抗原抗体检测的基本原理,是抗原抗体亲和度大小的体现,是形成可见复合物的关键,1特异性,2可逆性,三、常见的抗原抗体反应种类,1凝集反应(agglutination),颗粒性抗原(细菌或细胞)与相应抗体结合后,在一定条件下,出现肉眼可见的凝集
2、物,称凝集反应,直接凝集反应间接凝集反应,玻片法试管法,定性试验,如血型鉴定,半定量试验,如肥达反应,将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒状载体表面,成为致敏颗粒(免疫微球),再与相应抗体结合出现凝集现象称为间接凝集反应。,2沉淀反应(precipitation),可溶性抗原(血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌滤液等)与相应抗体结合,在一定条件下,形成肉眼可见的沉淀物,称沉淀反应。,(1)单向琼脂扩散试验,(2)双向琼脂扩散试验(3)对流免疫电泳3补体参与的反应(complement mediated reactions),4免疫标记技术(immunolabelling technique)
3、,(1)免疫荧光法(immunofluorescence technique),(2)免疫酶技术(immunoenzymatic techinques, EIA),图15-5 ELASA操作原理示意图,(3)放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA),第2节 免疫细胞及其功能的检测,一、免疫细胞数量的检测,流式细胞术,二、免疫细胞功能的检测,1T细胞功能的检测,(1)淋巴细胞转化试验,(2)细胞毒试验,2B细胞功能检测,B细胞增殖试验抗体形成细胞测定,3检测细胞免疫功能的皮肤试验,正常机体对特定抗原产生细胞免疫应答后,再用相同抗原做皮肤试验,即出现以局部红肿为特征的迟发性超敏反应,细胞免疫正常者呈阳性反应,而细胞免疫低下者则呈阴性反应。,第3节 细胞因子的检测,1生物活性检测2免疫学检测法3生物学检测,第4节 HLA分型技术,一、血清学分型技术,1HLA-类抗原的检测,HLA-A、B、C抗原型别鉴定常规使用微量补体依赖淋巴细胞毒试验(CDC试验)。,2HLA-DR、DQ抗原检测,二、细胞学分型技术,LA-Dw和HLA-DP抗原的特异性可用混合淋巴细胞反应(MLR)检测。,三、分子生物学分型技术,1聚合酶链反应与SSP分型法,2PCR-SSO分型法,3SBT分型法,