1、流式细胞仪分析技术及应用 流式细胞术 flowcytometry FCM 是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速 精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下 通过荧光探针的协助 从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选 细胞不被破坏 测量快速 大量 准确 灵敏 定量 流式细胞术的特点 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪 是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质 如大小 内部结构 DNA RNA 蛋白质 抗原等 进行快速测量并可分类收集的高技术 第一节概述 采
2、用激光作为激发光源 保证其具有更好的单色性与激发效率 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术 保证检测的灵敏度和特异性 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析 保证了检测速度与统计分析精确性 一 工作原理 1 液流系统 2 光学系统 3 数据处理系统 1 流式细胞仪的基本结构 基本过程 细胞在液柱中与激光束相交时向周围360 立体角方向散射的光线信号 它的强弱与细胞的大小 形状 胞内颗粒折射等有关 主要分为前向散射光和侧向散射光 二 散射光的测定 前向散射光 forwardscatter FS 激光束照射细胞时 光以相对轴较小角度 0 5 10 向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性 信号强弱与细胞体积大小成正比 前向散射光示意图 侧向散射光 sidescatter SS 激光束照射细胞时 光以90 角散射的讯号 用于检测细胞内部结构属性 侧向散射光示意图 测得的FS与SS信号通过计算机处理 可得到FS SS图 由此可仅用散射光信号对未染色的活细胞进行分析或分选 此为血细胞分类的基本原理 但不能分析表面分子 淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 光散射测量最有效用途 从非均一群体中鉴别出某些亚群
