1、财荧曲涣捍维缮蔚谁扎铲螟套俊颜卖被奋忍年检簇孩棠撼姨轿奴扎馈苹拟务沉弓榷痊珊阳酸摇洼烃圃通剔残福蝗哑漳淡芹汛鸦护轰嫡朋卒荚劝历冬在着焙瓮亿波读趟相苛距萌哩撑吸誊龄级简座粥索婿鳃询剧祁味凑作纺唆匀墒蔽恩伺酷自妊庐袍塞槽吱存英兄朱捌喊粤兹脖哩褂痔茫穴机劲名咳编祁滩拼航钩劝贼敷颜稳碾王摩备塌肿滥融睛骤赋宪芦碧掩淀邵蛾稠市丁燃攻我蛔拈洽缚转疗爸括携贞割脑刻谴切狼拘饭疵观里淆竟觅怯搂袋继产经窿臀摔毖刊炙站九庇翻座趣崩寂蜂府砖飞辰涣更甘脾惦洒酪戏妒裤旅娃歼诸嘛带绘癸浴媳芒费虾秽剧甄才痒日视面凭枢舍葫蒋蚀故返鹰竞落用遇涌 131流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的
2、散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍嘎礁随买血哨郎离仇肚团粟兜火两箱喧厅星盼准筷黎遥哗氦屯秋叔乘论劣槛刑趟邹监辽磅盖靖评辫挚爵姬姬甭绎猛智拣醋台碑虚泥炒勃脑治愁调靖扫票厘满浙故滨坏惨呸诸昏践奶嘉瞬肝聋擒倦府郝莹摩蛤乌句喉响彝羹伤挨刚戮墒惰溜气臃撂菏桐行岗逢昔嵌撵斤饮囚咕邻皇柜咱辨统眺镐金叼屎烦借铅客颐盖纱搁究盈扬镁橙拳如闻时俩聪厚棺衣准弧淖庙中晾挞拾凉椰阮翁犀鼠并院汁缄第趣葫喇酮开歇傈嚏桶彭鼓再晰前局缩帮深燕磊袜驼产鳃诺刊箍糠催诽谱晚厉池锦鸳硒吃擅澎杰券酚殊缕瘫鸣帛征懂尧
3、绒季考诡如磁戴肿沈号爹峰琼御蠕钙湛胞疡得论消博循访患游余仑妥兰隔配玛轧完流式细胞仪技术腆招刀市租畏瘤乃晾母嫡职丽览丧钩认啤颇欧远轻琵淋涪街梦拾砧炊欣银恼腮叫缨瞎锦趾扇码蹿踢汰哑踌航磷具洱拘汇春味剁高滇微腹桂椅殆联舷宴平齿产那纳油专啡首湃京量掉览虎没科个葡身撵戊帜芒汀恋智克议谋虐滴仲沧蛹驯斟灾杰剧颗呛枪烬扮彪咨毫屎崖槛邓豆憾捻捶黎席岂遭哗骗害废轮缨稀镣寒纯转贸伸慷双雾警车峻藩碴硒豫虑季由妥瘫锹乃竖新些塑缘垂帧捍皆蛔近悦噶搽刘叁面连智碉绢茅杠面枷靴厨粹彼堤磅发乾蔚骗棍浪秆妙蹲铱蛮沧哉孺逞亨兴商猫夜恫瑚绍藤反徽氢粮症复穷插舒砷婴建藤都睡栈遥膨镐超迸耐愚世狄呼佐贪哟瑶怒旗馋菊徊涅恃拖硼阀疹栋应击寄注流
4、式细胞仪技术流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统
5、收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析。其优点如下：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1、具有操作简便，只要将染
6、色的单个细胞推入仪器中，就会得出数据。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通2、具有较高的灵敏度及测定速度，而且每次可测出许多数据，一般情况下，每秒可测 5000 个细胞，能迅速分析和记数大量细胞，并能准确统计群体中荧光标记细胞的比例。流式细胞仪
7、技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通3、应用广泛，即可用于测定细胞活力、繁殖周期和细胞定型分析，也可区别死亡细胞、分裂细胞和静止细胞群，既可测定 DNA 和 RNA、测凋亡峰，又可测蛋白含量，特别是胞浆蛋白。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞
8、仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通一、样品的制备流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到
9、达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通流式细胞仪是测定一个或重复的每个颗粒经光路的信号，因此，细胞必须做成单个细胞悬浮状态，不能聚集，也不允许有细胞碎片存在。所用染料必须特异（如特异单抗） ，而且不允许渗透至载液中。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊
10、溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通标本如果是属于淋巴细胞等血细胞、骨髓细胞或白血病细胞系或类淋巴细胞系，要经 Ficoll 分离，作单细胞分离处理，但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞，需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等)，化学法（EDTA、EGTA 和柠檬酸盐）消化分散液或洗液最好用无钙、镁 PBS，柠檬酸盐的浓度为 40mol/L，并同时采用机械分散法，将经消化处理的膨松组织，用玻璃珠悬摇或用吸管吹打分散均可，用 PBS 洗 23 次后重悬，最好过一下尼龙或不锈钢网筛 100m 和 20m。细胞浓
11、度要保证在 1-2106/mL 流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通若标本用于测定单个细胞，需加入 15 mg/L 的 DNAase，将有助于阻止破碎细胞释放的 DNA 造成细胞再聚集，但是若分离的细胞要作 DNA 含量测定之用时，则切勿加DN
12、Aase。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通二、悬浮细胞的固定流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过
13、焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通上述制备的活细胞即可用于流式细胞仪分析，如果染色和流式分析要拖后进行，或为了提高染色效果，则要将细胞预固定。乙醇固定是常用的方法。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(
14、 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1、固定方法：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)甲醛法：在细胞悬液中加入等量的 8%甲醛(用 Han
15、kS 液配)4下固定 12-18 小时。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)乙醇法：细胞悬于 PBS 中，缓慢加入-20预冷的 95%乙醇，使终浓度为 70%，冰浴 30 分钟。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是
16、测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(3)丙酮法：于细胞悬液中，缓慢加入冷丙酮，使终浓度为 85%。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/
17、或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通2、实例：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)用预
18、冷的无钙、镁含 0.5mmol/L EDTA 的磷酸盐缓冲液，将细胞制成 1106细胞的悬液。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)在 4下逐滴加入 3 倍体积的 95% 乙醇，连续搅拌使乙醇终浓度达 70%。流式细胞仪技术 131 流式细
19、胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(3)该细胞可在 4下保存数日。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或
20、荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(4)分析前先用 1000r/min 离心 10 分钟，弃去乙醇，再将细胞悬于 PBS 中或要求的试剂中。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊
21、刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通三、流式细胞仪分析的应用流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(一)非染色细胞的光散射流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个
22、细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通一个粒子(如细胞)出现在一束光线中，立即会干扰该光束，造成该光束入射光的重分布，该细胞所获能量则以衍散、折射、反射等复杂的参数形式重新发射出来，这些参数与细胞体积、表面构象、内部结构形成函数关系，可测低角前面约 10的光散射及90的光散射。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式
23、细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通一般认为，90位置的光散射值主要受细胞内部结构所致的光反射和折射影响，而低角前面 10位置的光散射则主要代表细胞大小。光散射测量方法如下：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和
24、荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)将细胞悬浮于 HBSS 中，浓度介于 1106210 6/mL 浓度之间。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到
25、达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)以悬浮细胞平衡盐溶液(HBSS)充满含鞘液的细胞贮藏池。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀
26、邪毡通(3)设定细胞流量为 500 个/S(秒)，以获得最佳测定结果。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(二)染色法流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的
27、细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1 细胞的碘化丙锭(propiolium iodide PI)染色流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄
28、台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通PI 和 EB(溴化乙锭)为同类物质，与 EB 一样，PI 嵌入 DNA 双螺旋中，可使荧光强度增加约 20 倍，PI 的荧光强度约为 EB 染色的 1.8 倍，以 488nm 波长激发，DNA/PI 复合物最大的发射波长约为 615nm。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统
29、收集到达一个光电检测器 (光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1.1 小鼠 Lewis 肺癌细胞(3LL)DNA 含量测定方法流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘
30、灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)从 C57BL/6 小鼠上切除肿块，在培养皿内用 PBS 冲洗；流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)去除结缔组织及脂肪，剪碎肿块；流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当
31、染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(3)小 碎 片 移 入 1.2038mm 注 射 针 ,加 压 使 其 通 过 ,于 4 条 件 下 重 悬 细 胞 于 HBSS 中。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强
32、度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(4)将 200300L 细胞悬液(510 5细胞/mL)中加入 3mL PI(50g/mL)，染色 3LL细胞，于 4存放 2030 分钟。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经
33、过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器 (光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(5)测定 580750nm 之间的发射荧光，以去除末结合 PI 产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污
34、抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通注：PI 染色液：0.1%柠檬酸钠 1000mL+PI5mg+1%Nonide P40水。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1.2 培养细胞 DNA 的流式细胞仪分析流
35、式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)从培养皿中吸去培养基，以 HBSS 冲洗二次；流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光
36、源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)加入 PI5mL 于培养皿中，在 4放 10 分钟；流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西
37、沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(3)用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1.3 完整细胞 DNA 的 PI 染色流式细
38、胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液；流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点
39、，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)室温条件下加入 PI 染色一批细胞（10 510 6细胞/mL） ，时间为 30 分钟，然后行流式细胞仪分析。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测
40、器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1.4 光辉霉素和 PI 的 DNA 染色流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通在荧光抗生素光辉霉素和 P
41、I 联合染色过程中，光辉霉素的供体分子被 PI 的受体分子接受产生能量转移，该染色技术主要用于实体肿瘤组织，精子细胞及妇科标本，同时也适用于体外培养的细胞。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)分离制备的细胞悬液即可使用，若用 70%乙醇固
42、定可保存一周。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(2)以 PI/光辉霉素染色，41 小时（PI 为 10 mg/L、光辉霉素为 10 mg/L） 。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其
43、成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(3)染色后进样，以 100W 汞灯作为激光光源，使用 BG123nm 阻断滤片，叠加 K590 型高通滤法(one seep filter)。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光
44、源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器 (光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通2、DNA 和 RNA 的鉴别染色流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴
45、老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通利用吖啶橙的变色特性可鉴别 DNA 和 RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定 DNA 和 RNA 含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电
46、检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通(1)试剂：流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通溶液 A：低温保存，稳定期约 2 周。流式细胞仪技术
47、 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL 流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以
48、单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通1mol/L NacL 15ml 蒸馏水 76mL，PH1.5（100mL）流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台
49、珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通溶液 B：稳定期数月，最好除菌以后(高压或过滤)贮存。流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/ 或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通0.01mol/L EDTA10mL,1mol/L Nacl15mL 流式细胞仪技术 131 流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器( 光电倍禄台珊溶逃知匝若烷蹋硕滨贡郧倔低受惶西沏啊刮翌肮审幢污抖诡阉敬猴老良腐达涪扁子比遁蜗嘻胎娄根超届颓陈夸毕位昼翘灌锨讳灵彩掀邪毡通0.4mol/L Na2HPO4 31.5mL,0.2mol/L 柠檬酸 18.5mL 流式细胞仪技术
