1、陵西中医学院 届硕士学住论文迭起等特点，符合中医“肾为元阳所居” 、“五脏之伤穷必及肾”及“ 顽症多痰”、“久病人络 ”之理。根据这些病机特点，结合肾小球局部的基本病理变化（辨病与辨证相结合），咀温肾化瘀立法，寓化瘀于温阳之中，组成安肾方，临床观察十余年，对慢性肾小球肾炎肾阳虚证疗效显著。温肾助阳药物的现代研究甚多，而对慢性肾小球肾炎凝血纤溶系统及活性， 的表达尚无报道。因此，本课题旨在通过观察安 肾方对慢性肾炎大鼠凝血纤溶系统的影响来探讨中药温肾复方治疗慢性肾炎的细胞分子生物学机理。童堡查竺垒壅墨全竺型堡墨查垦堡垒竺查墨竺塑墅生 一、理论基础慢性肾小球肾炎是维床常见病，多发病，其发病率高，具
2、有进行性鸯重鲍特点，严重威胁着人们的身体健康，也造成患者家庭和社会沉重的经济负担。目前西医对其尚无有效的治疗措施，而中医药正以其独特的疗效越来越受到人们的重视，成为目前研究肾小球肾炎的热点。（一）、现代医学对慢性肾小球肾炎的认识川、对慢性肾小球肾炎发病原因的研究慢性肾小球肾炎病因不明，般认为其起病有以下几种途径： 急性肾炎迁延不愈，病史超过年以上者，临床上可认为已进入慢性肾炎期。 急性肾炎经数周或数月治疗，临床症状及犀异常消失，肾功能正常，被认为已经 “痊愈 ”，但炎症仍继续缓慢进行，若干年后，可能因上呼吸道感染及其他感染，或劳累过度，临床症状又复出现，而成为慢性肾炎。 患者无明显肾炎表现，但
3、炎症缓慢发展，经若干年后可成为慢性肾炎，这一类可称为原发性肾小球肾炎。、对慢性肾小球肾炎发病机制的研究其发病机理和急性肾炎相似，是一个自身免疫反应过程。但为何导致慢性过程的机理尚不清楚，可能与机体存在某些免疫功能缺陷有关。免疫功能缺陷可使机体抵抗感染能力下降，招致微生物反复侵袭；机体又不能产生足够量的抗体以清除致病物质（抗原），致使抗原能持续存留机体内，并形成免疫复合物，沉积于肾组织，产生慢性炎症过程。此外，非免疫介导的肾脏损害在慢性肾炎的发生与发展中亦可能起重要作用，如健存肾单位代偿性血液灌注压增高，肾小球毛细血管襻跨膜压力及滤过压增高，肾小球内凝血纤溶障碍均可引致肾小球硬化。疾病过程中的高
4、血压，长期存在，可导致肾小球动脉狭窄、闭塞、加速肾小球硬化。、对慢性肾小球肾炎药物治疗的研究 药物治疗原则目前尚无特效治疗慢性肾炎的方法，原则上是对症治疗，包括休息，少量吃盐，适当限制蛋白质食物，利尿减轻水肿；降低高血压，预防治疗心力衰竭等；不使用有壁皇 墨兰堕！堡璺主兰堡堡墨 一肾毒性的药物，如庆大霉素、链霉素、磺胺类药等；应给予有效的利尿、降压药物，必要时可用激素和其他药物治疗。适当使用营养保护肾脏的药物，如肌苷、细胞色素等。利尿，降低高血压，预防心、脑并发症，是治疗的重点。 药物治疗近况控制慢性 肾炎病人的高血压：慢性肾炎时，剩余的和（或）有病变的肾单位处于代偿性高血液动力学状态，全身性
5、高血压则会加重这种病情，导致肾小球进行性损伤，故对慢性肾炎患者应积极控制高血压，防止肾功能恶化。钙离子拮抗剂；不少的临床研究证实钙离子拈抗剂，如硝苯吡啶、尼卡地平等治疗高血压和延缓肾功能恶化有着比较肯定的疗效。 受体阻滞剂：如美多心安、氨酰心安，对肾素依赖性高血压疗效较好。一受体阻滞剂有减少肾素作用，该药虽降低心排出血量，但不影响肾血流量和，故用于治疗肾实质性高血压。扩血管药物：如肼苯哒嗪也有降压作用，它与受体阻滞剂联合应用，可减少扩张血管药物刺激肾素、血管紧张素系统引起的副作用（如心跳加快、水钠潴留），并可提疗效。肼苯哒嗪一般每日，但须警惕该药诱发红斑狼疮样综合征的可能。对有明显水肿者，若肾
6、功能好，可加用噻嗪类利尿药；对肾功能差者（血肌酐），噻嚷类药物则疗效差或无效，应改用髓袢利尿剂。应用利尿药物时应注意体内电解质的紊乱情况，并要注意有加重高腊血症、高凝状态的倾向。血管紧张素转换酶抑制剂：近年来通过大量动物试验和对肾炎患者的临床观察已证明，该药物除有肯定的降压疗效外，还可降低肾小球内压，延缓肾功能的恶化，降低尿蛋白（绚和减轻肾小球硬化的作用。抗猛蛰照丝！返鲤鐾荭翅；堑玺塞竖塞盘越鉴查垦题受重视：亟窟垦丞：萎竖塑宜尘握旌塞堑塑怼基些差型竖塞（塑！ 竖瘟）鲍监压拯翅锺边塑动物塞坠置缝搓型查塞妊曲鳌定竖功能，越墨竖照瘟垄翅选的往厦！直厶达巍直盟殉商猛丛查塑基些显曼起直猛达鲞逮堡羞型 【
7、 翅鲢性竖痘！丕送垂绁查篮擅生性匿盔）卫丝塑益时间鲍座旦。丕坐堂鲞圭毯鱼邃自量自篮王坐啦然吐二篮堂盟垦直超！壹鱼拴熊宜酆擐给赶丞：怼送丝匿痘重廑塑丝！堂至赶塞笾 地座互注射：堡型达：壅互厦赶塞勉至 盥座：至洼盟：堡 墅逸匪蠹绝链凼盐邀基迭：垒鱼佳旦趟塞！趋然堂缍生！量厘复洼数；璺筮：逍亘堡昱查型！拯鲣鐾蔓 置生工 坠垒塑缒冀鲤鱼匹楚安肾方对免疫复合物型肾炎太鼠凝血纤露系统的影响堇！垒！鱼望！ 鱼 激素和细胞 药物：国内外对慢性肾炎是否应用激素和（或）细胞毒药物尚无统一看法，一般不主张应用。但也有学者认为，如患者肾功能正常或仅轻度受损，肾脏体积正常，尿蛋白兰 ，病理类型为轻度系膜增殖性肾炎、轻微
8、病变等，如无禁忌症，可试用激素和细胞毒药物，无效者逐步撤去。（）、中医对慢性肾小球肾炎的认识及研究进展、病名归属慢性肾小球肾炎相当于中医学中的“水肿” 、“腰痛”、“ 尿血”、“虚劳”等范畴。 内经 称为 “水 ”，如 灵枢。水胀篇 日： “水始起也，目案上微肿，如新卧起之状，其颈脉动，时咳，阴股问寒，足胫肿，腹乃大，其水已成矣，以手按其腹，随手面起，如显水之状，比其候。 ”、病因病机 古代医家：对于慢性肾小球肾炎相关症候的病因病机，历代医著多有论述。在 素问水热穴论篇 云； “故其本在肾，其末在肺，皆积水也 ”，又在 素问至真要大论篇 云： “诸湿肿满，皆属于脾。 ” 诸病源候论水病诸侯 云
9、： “水病无不由脾肾虚所为，脾肾虚则水妄行，盈溢皮肤而令身体肿满。 ”另有 丹溪心法水肿 云： 惟肾虚不能行水，惟脾虚不能治水 ”。叉 素问气交变大论 云： “岁土太过，雨流行，肾水受邪 体重烦冤 ”等等 现代医家：近年来，众多的中医工作者对慢性肾小球肾炎的病因病机进行了探讨。中医临床研究认为慢性肾炎发病不外内因、外因、诱因三类。内因以肾、脾、肝等脏腑功能虚损为主。吕仁和 【 认为本病病本在肾虚，涉及肝脾等脏，外因则为风、寒、湿、热等邪气的侵入。赵绍琴。提出了慢性肾病可遗传论和并非均为肾虚论，认为风湿热邪深入营血，络脉瘀阻，属实而非虚，且多热、多瘀为本病之病机特征。目前多数学者认为慢性肾炎是以
10、虚为主，虚实夹杂之证。支 宏伟 【 报道由于体质因素的变化，疾病因素的影响，生活与环境因素的改变等，使得慢性肾炎患者阴虚证增多，且阴虚证多向气阴两虚证转化。欧阳永红等 【 对慢性肾炎中医证型与红细艟免疫相关性研究和结果显示：本病患者均存在红细胞免疫功能障碍。肺脾气虚较其他证陕西中医学院届硕士学位论文型为轻；肺肾气虚、脾肾阳虚证的红细胞免疫及体液免疫强于肝肾阴虚和阴阳两虚），其证候改变有 “肾气虚一肾阳虚一肾阴虚 ”渐重的趋势。认为肺肾气虚是慢性肾炎早期阶段，抓紧治疗，疗效尚好。脾肾阳虚、肝肾阴虚为进一步发展的中间证型，治疗得当，可延缓进展。气阴两虚、阴阳两虚为本病终末阶段。、治疗概况 常用药物
11、常用中药：统计方齐方，共涉及到中药余味，以使用的频度（方中出现的次数）排序，出现频率最高的味药如下表所示，足见使用的药物相对集中 ”。表、肾炎常用中药统计表药物频率黄芪茯苓益母苴白术丹参泽泻生地黄党参甘苴白茅根山药车前子常用成药：本病常用成药为六味地黄丸、肾炎温阳片、肾炎消肿片、肾康宁片、肾炎四味片、知柏地黄丸、济生肾气丸、活血丸、壮腰健肾丸、肾炎康复片、肾炎舒片。 治则治法扶正固本，补肾益气为先：肾元亏虚是肾小球疾病发生的内在基础，肾多虚证又是大家的共识。因此，扶正固本，补益肾气当为本疾病的首要治则。祛除邪气： 导致肾小球疾病发生的外邪和随着疾病发生发展而产生的痰湿瘀等病理产物是影响疾病进程
12、和预后的另一个方面。因而祛除邪气是治疗中的重要一环。 单味中药治疗谢俊霞掣墙使用雷公藤多甙片治疗成人原发性肾病综合征例，结果显示有效率达，说明雷公藤治疗本病有很好疗效。金亚明等明用黄蜀葵花胶囊治疗慢性肾炎湿热症例，治疗组有效率，明显优于肾炎四味片组的。圭堡查壁垒垦墨全竺型堡墨查璺垦垒堑堡丝旦堂皇 一黄芪多糖能明显改善系膜细胞增生性肾炎大鼠尿和血中自细胞介素的含量，抑制系膜细胞的增生和基质的堆积，并能减少免疫复台物的沉积 。重组水蛭素能够减少肾小球内纤维蛋白相关抗原沉积，减少肾小球系膜细胞增殖和肾小球硬化，减轻蛋白尿和低蛋白血症，改善肾功能 。 专方治疗曹恩泽等口用肾康颗粒（黄芪、薏苡仁、白花蛇
13、舌革、白茅根、益母草等）治疗例慢性肾炎患者，结果治疗组的免疫功能、血脂、氧自由基指标均明显改善，与单纯西药对照组有显著性差异。楼季华等拉拥健脾益肾法（黄芪、党参、仙灵脾、杜仲、桑枝、蕙苡仁、茯苓、丹参为主）加减治疗单纯性系膜增生性肾小球肾炎患者例，结果总有效率达以上。唐利群 镧益气活血系列方（即清热膜肾冲剂和补肾膜肾冲剂）由黄芪、党参、白术、山药、丹参、益母草、仙灵脾、巴戟天、肉苁蓉等组成，治疗例膜性肾炎患者，总有效率为，清热膜肾冲剂组的疗效尤佳，达，中药组的疗效比激素组明显提高（哟），且从实验室指标可见中药组蛋白尿、血浆自蛋白、血脂均较治疗前明显改善。达展云等 【 】 观察中药保肾活觑汤（川
14、芎、当归、补骨脂、肉从蓉等）对系膜增生性大鼠的作用，结果表明治疗组大鼠尿蛋白定量、肾脏病理改变及系膜区增殖细胞核抗原阳性细胞数的改变均较病理模型组明显减轻。 辨证治疗慢性肾炎分型论治颇为复杂，年第属全国中医肾病学术会议讨论的辨证分型方案将慢性肾炎分为本证和兼证，如下表所示：证型肺肾气虚治法补益脾肾方剂益气补肾汤加减本脾肾阳虚 温补脾肾 附子理中丸加减证肝肾阴虚气阴两虚滋养肝肾益气养阴杞菊地黄丸加减参芪地黄汤加减标证 兼外感证 兼永湿证 兼湿热证 兼血瘀证 兼湿浊证堕里主垦兰垦！生曼主兰堡垒圭 一一 一、中医药治疗慢性肾炎的机理研究中药对免疫功能的影响肾小球肾炎主要与免疫反应介导的炎症有关，中药
15、对免疫学的影响一直是个重要的研究方面。青藤碱。能使膜性肾小球肾炎模型动物尿蛋白、血肌酐、尿素氮、循环免疫复合物（）及血与尿中的微球蛋白（）均明显降低。商陆皂苷甲。治疗肾炎大鼠，对血清中炎性细胞因子、肿瘤坏死因子（）、白细胞介素）和白细胞介素（）的产生有显著的抑制作用。大黄。 ”能明显拮抗一、及植物血凝素对肾小球系膜细胞的刺激作用，并能改善系膜增殖型肾炎大鼠系膜区基质的堆积，可能与抑制肾小球分泌 有关。 中药对脂质过氧化损伤的影响除免疫因素外，氧自由基等非免疫因素对肾小球肾炎的发生发展也起了重要作用。因此，通过减少氧自由基及脂质过氧化损伤而减轻、延缓肾脏损害已成为防治肾小球疾病的重要手段。人参皂
16、甙。能清除反应性氧代谢产物，保护抗氧化酶活力，抗脂质过氧化，降低尿蛋白，并能够轻度改善肾小球基底膜增厚，减少上皮下电子致密物沉积，显著改善足突融合。补肾活血泄浊汤。 ”可使阿霉素肾病大鼠血清和肾组织过氧化脂质（）明显降低，肾组织超氧化物歧化酶（）活性明显升高，肾脏病理损伤减轻。川芎嗪能显著降低慢性肾炎患者的血清水平、升高活性，川芎嗪 “治疗组在血肌酐、尿素氮，及血、尿纤维蛋白降解产物（）等指标的改善方面亦明显优于对照组。 中药对血液高凝状态的影响慢性肾炎患者体内存在着高凝状态。其程度往往与肾脏病变的严重性和活动性相致。慢肾消口服液啪（黄芪、茯苓、银花、益母草、地龙等）可降低血栓素（国）含量，提
17、高一酮基一前列腺素。（）含量。表明该方具有调整和的平衡，抑制血小板聚集释放，纠正高凝状态的作用，这一作用将有助于免疫复合物的清除及肾小球病理改变的修复。中药藏红花、灯盏花素啪可抑制环氧化酶，抑制生成，从而抑制血小板聚集，减轻血小板释放炎症介质，改善血液高凝状态，减轻膜性肾炎大鼠尿蛋白。中药肾复康 “（雷公藤、三七、益母草、黄芪等）能消除膜往肾炎大鼠蛋白尿，提高血浆总蛋白和自蛋白，降低血肌酐、尿素氮和胆固醇，抑制安肾方对免覆复合物型肾炎走鼠凝血纤溶系统的影响的升高和一。的降低。 中药对肾血流动力学的影响内皮素（）能收缩肾血管，影响肾灌流，降低肾小球滤过率。肾康宁口服液 ”能降低血浆内皮素含量，改
18、善一氧化氮合成不足，最终改善肾血流动力学，减少免疫复合物沉积，延缓肾组织的病理进程。补阳还五汤。 ”能降低慢性肾炎患者含量、改善降钙素基因相关肽代谢失衡状态。白茅根 ”对凝血酶生成有促进作用，并缓解肾小球血管痉挛，从而使肾血流量及肾小球滤过率增加而产生利尿效果：同时肾缺血改善，肾素产生减少，使血压恢复正常。陡西中匡学院届硕士学位论文二、实验材料与方法（一）、实验动物健康大鼠只，雄性，月龄，体重，由陕西省中医药研究院实验动物中心提供，编号：；动物质量合格证号：医动字第 号。（二）、实验用药及试剂、安肾方组成及制备：组成： 附片红花肉桂刺蒺藜山茱萸淫羊藿熟地葫芦巴丹皮鹿角霜制备： 由陕西省中医医院
19、煎药室将上述药物煎煮所得。、阳性药物：潘生丁，批号，安徽省全椒丰泽药业有限公司提供、造模药物：牛血清白蛋自（），公司提供碳化二亚胺盐酸盐（），公司提供无水乙二胺、羊毛腊、石蜡油、由西安化玻站提供阳离子化牛血清白蛋白，由西安交通大学医学院制备，具体方法如下 【 】 ： 取无水乙二胺（）液，加重蒸馏水，再加盐酸，调整值到，冷却至，进行搅绊，加入天然牛血清白蛋白（）溶于重蒸馏水的溶液，搅拌后再加炭化二亚胺盐酸盐（）维持，持续搅拌，保持值，最后加（值）醋酸缓冲液，终止反应。 将上述溶液冷冻干燥，在重蒸馏水中透析，得干粉。保存于备用。取上述粉剂，加磷酸盐缓冲液，即阳离子化牛血清白蛋自，（等电点从提高到，
20、在生理条件下，带阳离子）。临用前配置。缓冲液，费氏不完全佐剂，参考文献方法自备，方法如下：兰堡互壁垒墨墨全竺型堡叁苎墨兰圭堑堡垒丝塑墅竺费式不完全佐剂：称羊毛脂，逐滴加入优质石蜡油，边滴边研磨，装于疫苗瓶中，高压灭菌（磅分钟）后存于冰箱中（ ）备用。的缓冲液：分别配置、，、的、溶液适量，然后按比例（：）配成为的缓冲液，高压灭菌后存于冰箱中备用。、试剂小鼠抗大鼠单克隆抗体（公司）一抗体（兔抗人、鼠多抗）（ 公司）生物素藕联兔抗小鼠（，中山公司）生物素藕联羊抗兔（，中山公司）（三）、主要实验仪器代谢笼大鼠套梅特勒电子天平（ ）一次性注射器清洁工作台高压灭菌锅透析带（截流范围） 由北京鼎国生物技术有
21、限公司提供（四）、实验方法：参考文献川，将只 周龄，体重 健康大鼠按统计学方法随机分为组，除正常组为只外，其余每组只，分别为正常对照组，慢性肾炎模型组，安肾方高、中、低剂量治疗组，潘生丁治疗组。正常对照组第一周第一天予生理盐水给大鼠腋下及腹股沟作多点皮下注射，第二周起予生理盐水腹腔注射，连续天，每天，第三周起予生理盐水尾静脉注射，次周，共周，同时予生理盐水灌胃，共周。肾炎模型组第一天将溶于的缓冲液中，加入费氏不完全佐剂混匀成悬浊液，给大鼠腋下及腹股沟作多点皮下注射，第二周起进行腹腔注射，共一周，第一天至第七天的剂量依次为、，第三周起以 溶于中尾静脉注射，次周，共周， 同时予生理盐水灌胃，共周。安肾方高、中、低剂量治疗组造模方法同肾炎模型组，第二周起以安肾方灌胃， 欠日，共周，潘生丁治疗组造模方法同肾炎模型组，第二周起以临床成人用量的倍灌胃，共周。
