1、,微生物的生理生化反应,实验九、十,一、目的要求,1.了解细菌的一般生化反应；2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。,二、实验材料,菌种：大肠杆菌；枯草杆菌；变形杆菌；自己划线分离的大肠杆菌。培养基：糖发酵培养基（紫红色液体）H2S试验用培养基（固体、试管） 蛋白胨水培养基(吲哚实验） (液体） 淀粉水解用培养基（固体、平板） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）(液体）,三、实验原理及方法,由于各种微生物的新陈代谢类型不同，因此，对各种物质 利用后所产生的代谢产物也不同，我们可以用化学反应来测定 微生物的代谢产物，这种反应称为生化反应。生化反应常用来鉴别在形态或其它方面不易区别的微生 物，例如：肠
2、道细菌中，大肠杆菌和伤寒杆菌，二者在形态上 不易区分，但前者能发酵乳糖，后者不能。因此可以从它们能 否发酵乳糖来区别它们，所以微生物的生化反应是微生物分类 鉴定的重要依据之一。,微生物的生理生化反应原理,1、糖发酵试验（含碳化合物的分解利用）,绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源，但是细菌的分解糖类的能力上有相当大的差异。,发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范围pH5.26.8, pH6.8紫色） 发酵后产生的气体： 甲烷、 H2 、 CO2等（杜氏小管内有气泡）,微生物的生理生化反应原理,2、产硫化氢试验,某些菌能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢（H2S），H2S遇
3、金属盐类，如铅盐、铁盐等，则形成黑色的硫化铅或硫化铁的沉淀物。从而可断定H2S的产生与否。 本实验采用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养，看是否有黑色沉淀。,微生物的生理生化反应原理,3、甲基红试验,某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，加入培养基中的甲基红指示剂pH4.2（红色）-6.3（黄色），可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。,微生物的生理生化反应原理,4、淀粉水解试验（生物大分子的分解利用）,微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解的区域，遇碘不再呈蓝色，这
4、可作为细菌产生淀粉酶的证据。,结果：有水解圈淀粉水解实验阳性；无水解圈淀粉水解实验阴性.,用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种（或点种），另取少量大肠杆菌在平板的另一边接种，在各培养皿底部标明菌名和组别。置37温箱中培养1620小时。,5吲哚试验（含氮化化合物的分解利用）,吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。,微生物的生理生化反应原理,四人一组操作,配制各类培养基,用无菌操作技术接种,37培养24h,观察并分析实验结果,接种方案,.糖发酵试验：经培养后，指示剂呈黄色者表示为性
5、，同时观察小套管中有无气泡产生。“+”表示产酸；“”表示产酸产气；“-”表示阴性。 2.H2S试验：培养后取出观察，看有无黑色沉淀产生.有“+”3.吲哚试验：在培养液中先加入乙醚约1毫升（使呈明显的乙醚层），充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，使乙醚层浮于培养基的上面，这时再沿管壁慢慢加入吲哚试剂510滴，观察有无红色出现。有红色环出现者为阳性，黄色者为阴性。 4、淀粉水解试验：打开皿盖，滴加少量碘液于培养基上，轻轻旋转培养皿，使碘液均匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解。透明圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小。 5、甲基红试验（MR试验）：沿管壁加入甲基红指示剂34滴上层呈红色者为阳性。,实验结果,试验结果：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应； “”表示产酸产气（糖发酵）,思考题,细菌的生化反应试验意义何在？,
