1、,实验九 微生物的生理生化反应,一、目的要求,学习检测微生物代谢特性的试验方法 掌握淀粉水解试验、糖发酵试验、吲哚试验、石蕊牛乳试验的反应原理,二、基本原理,微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。 在所有生活细胞中存在的这些化学反应 被称为生理生化反应（酶促反应 ）。 人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作为重要的分类依据。,三、实验材料,1培养基： 淀粉培养基（固体）：1皿 糖发酵管：6支 蛋白胨水培养基：2支 葡萄糖蛋白胨水培养基：2支 石蕊牛乳培养基：2支2. 实验
2、菌种：枯草杆菌、大肠杆菌,四、实验内容,1. 淀粉水解试验（+平板划线法）： （1）倒平板 （2）用接种环在以划线的方式接上菌种。一块接B.S，另一块接 E.C。 （3）将接完种的平板倒置于37恒温培养箱，培养2。 （4）观察结果时，可打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，是碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明 圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。 透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以 “+”、“”表示有无透明圈）,（1）以液体接种的方式分别接种B.S和E.C于葡萄糖、蔗糖、乳糖培养基中。（2）接种后置于37恒温培养箱，培养2d。（3）观察结果时，看
3、各管颜色变化及杜氏小管有无气泡。产酸产气用“”表示；只产酸不产气用“+” 表示；不产酸也不产气用“”表示。,2. 糖类发酵试验（含碳化合物的分解利用）,糖发酵试验,（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于蛋白胨水培养基中。（2）接种后置于37恒温培养箱，培养2d。（3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈明显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色（注意：加入吲哚试剂后，不可再摇动，否则红色不明显）。以“+”、“”表示有无红色的玫瑰吲哚。,3. 吲哚试验：（含氮化化合物的分解利用）,
4、I-吲哚（indol）试验色氨酸吲哚玫瑰吲哚吲哚试剂,- +,VP实验,某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。,2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3十2CO2丙酮酸 乙酰甲基甲醇 CH3COCHOHCH3 CH3COCOCH3 乙酰甲基甲醇 KOH 丁二酮（二乙酰）,（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于石蕊牛乳培养基中。（2）接种后置于37恒温培养箱，培养14d。（3）观察结果时，看各管颜色变化及牛乳胨化的现象。,4 . 石蕊
5、牛乳试验：（利用蛋白质酪素的能力）,牛乳的主要成分为乳糖，蔗糖，蛋白质和酪素等成分。牛乳中加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原的指示剂（中性为黄色，酸性为红色，碱性为蓝色，石蕊被还原时，则部分或全部脱色）。由于各种细菌对牛乳的利用不同，引起培养基的变化也就不同，主要变化为：产酸：主要从乳糖产生酸，指示剂变红色酸凝或加有产气：产酸，并有牛乳的凝固（pH4.7以下）；如有气体形成，则凝块中有裂隙。凝乳酶产生：很少或无酸产生，牛乳凝固。胨化：部分或大部分牛奶变清亮。产碱：细菌产生蛋白酶可将干酪素分解产生胺或氨，使培养基的pH进一步升高，呈深蓝紫色。,五、实验报告,1细菌对各种生理生化试验反应的结果：,石蕊牛乳试验,五、实验报告,（1）淀粉等生物大分子物质能否不经分解而直接被细菌吸收？为什么？（2）假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？（3）解释在细菌培养中吲哚试验的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？,2. 思考题,
