1、胡萝卜的组织培养（一） 组织培养1 准备（1） 器具准备： 高压蒸汽灭菌锅： 培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。手持喷雾器： 装 70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。 超净工作台： 用于无菌操作。 设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器， 常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml 锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒， 常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架 其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品（2） 试剂：MS 基本培养基2,4-D：生长素
2、类似物NAA：生长素类似物6-BA：细胞分裂素类似物酒精（体积分数 70%）：消毒次氯酸钠（体积分数 20%）：消毒无菌水2 .配制类别 化合物 称取量/mg扩大倍数体积/mL 1L 培养基的吸收量/mL大量元素储备液NH4NO3KNO3CaCl22H2OMgSO47H2OKH2PO4330003800088007400340020202020201000 50微量元素储备液KIH3BO3MnSO44H2OZnSO47H2ONaMoO42H2OCuSO45H2OCoCl26H2O16612404460172050552002002002002002002001000 5铁盐储备液FeSO47H
3、2ONa2EDTA556074602002001000 5有机物储备液肌醇烟酸维生素 B6维生素 B1甘氨酸20000100100204002002002002002001000 5A. MS 基本培养基配方：上述 4 种储备液+30g 蔗糖+8g 琼脂+蒸馏水定容至 1000mL （pH5.65.8）B. 分别向 MS 基本培养基中加入植物激素：（pH5.65.8）诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA3.灭菌：灭菌后冷
4、却置于常温下观察 3 天，检查灭菌是否彻底。4.取材接种：a将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。b在超净工作台上将萝卜用酒精消毒 30 秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理 30min，用无菌水清洗两到三次。c用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成 1cm 厚的横切片，选取有形成层的部位，切取 1cm2 的小块。d将组织块接种到培养基上，封口。贴上标签，写明材料、日期、编号。e将培养基放在 23-26C 的恒温箱培养。4 天后观察材料污染情况，14 天后，观察愈伤组织生长情况。5 观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。6 转接，培养：培养一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，培养一段时间后，胡萝卜的愈伤组织就可以诱导出试管苗。（二）露地栽培1培育壮苗:添加一定数量的生长延缓剂（如矮壮素、 PP333）同时打开瓶盖，持续一周。2 选用合适的培养基3 转栽试管苗:洗去附着在根系上的培养基4 移栽后的条件控制:保持空气湿度，遮挡强光，降低温度5 栽培
