2016HCV检验方法验证报告.doc

1、ELISA-(HCV)检验方法验证报告一、 准确度验证采用与明确诊断的结果进行对比获得准确度包括敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值等相关指标。检测方法与明确诊断比较的 2X2 列联表明确诊断检测方法 阳性 阴性 总数 阳性 A B A+B 阴性 C D C+D 总数 A+C B+D N=A+B+C+D 灵敏度（sens）=100%A/(A+C) 特异性（spec）=100%D/(B+D) 阳性预测值（PVP)= 100%A/(A+B) 阴性预测值（PVN)= 100%D/(C+D) 检验效能= 100%(A+D)/N注：预测值：测定为阳（阴）性样本实际为阳（阴）性的可能性。 检验效能：估计

2、检测结果与明确诊断总一致程度的指标，为所有检测结果中真正的阳性结果与真正的阴性结果所占的比例。 灵敏度与特异性 95%得分可信区间的计算方法如下： 100%（Q1-Q2)/Q3,100%(Q1+Q2)/Q3按照下列公式计算 Q1，Q2 ，Q3： 灵敏度： Q1=2A+1.962=2A+3.84Q2=1.96 1.962+4AC/(A+C)=1.963.84+4AC/(A+C)Q3=2(A+C+1.962)=2(A+C)+7.68特异性： Q1=2D+1.962=2D+3.84Q2=1.96 1.962+4BD/(B+D)=1.963.84+4BD/(B+D)Q3=2(B+D+1.962)=2(

3、B+D)+7.68注：公式中 1.96 为标准正态曲线下对于 95%可信区间所对应的变量值。 检测 100 例新鲜临床样本，包含 HCV 阳性样本，数据如下表所示：HCV 检测准确性验证数据试剂批号：2016075815 恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1432酶标仪编号：OB-02-13 实验人：夏诗雨 实验日期 20160815OD 值健康人血清01健康人血清02健康人血清03健康人血清04健康人血清05健康人血清060.004 0.007 0.007 0.008 0.008 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清07健康人血清08健康人血清09

4、健康人血清10健康人血清11健康人血清120.010 0.010 0.003 0.009 0.007 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清13健康人血清14健康人血清15健康人血清16健康人血清17健康人血清180.003 0.008 0.012 0.008 0.003 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清19健康人血清20健康人血清21健康人血清22健康人血清23健康人血清240.004 0.008 0.007 0.008 0.008 0.006阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清25健康人血清26健康人血清27健康人血清28健康人血清29健康人血

5、清300.003 0.007 0.005 0.006 0.006 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清31健康人血清32健康人血清33健康人血清34健康人血清35健康人血清360.007 0.006 0.004 0.007 0.008 0.005阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清37健康人血清38健康人血清39健康人血清40健康人血清41健康人血清420.006 0.007 0.009 0.008 0.004 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清43健康人血清44健康人血清45健康人血清46健康人血清47健康人血清480.007 0.008 0.0

6、06 0.007 0.008 0.008阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清49健康人血清50健康人血清51健康人血清52健康人血清53健康人血清540.003 0.006 0.007 0.005 0.006 0.006阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性健康人血清55健康人血清56健康人血清57健康人血清58健康人血清59健康人血清600.006 0.007 0.004 0.006 0.004 0.005阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性HCV P01 HCV P02 HCV P03 HCV P04 HCV P05 HCV P060.598 2.546 2.698 3.047 0.19

7、6 2.772阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P07 HCV P08 HCV P09 HCV P10 HCV P11 HCV P122.894 2.948 0.758 3.182 3.415 2.555阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P13 HCV P14 HCV P15 HCV P16 HCV P17 HCV P183.598 3.366 2.998 1.974 2.847 2.897阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P19 HCV P20 HCV P21 HCV P22 HCV P23 HCV P243.115 0.471 2.859 3.044 2.894 3

8、.447阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P25 HCV P26 HCV P27 HCV P28 HCV P29 HCV P302.847 2.854 3.241 3.154 3.541 2.887阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P31 HCV P32 HCV P33 HCV P34 HCV P35 HCV P361.887 2.847 3.054 0.714 3.554 2.897阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性HCV P37 HCV P38 HCV P39 HCV P40 2.954 2.832 3.059 0.153 阳性 阳性 阳性 阳性 HCV-IgM 检测方法与

9、明确诊断比较的 2X2 列联表明确诊断检测方法 阳性 阴性 总数 阳性 A (40) B (0) A+B(40) 阴性 C (0) D (60) C+D (60)总数 A+C (40) B+D(60) N=A+B+C+D (100) 灵敏度（sens）=100%A/(A+C)=100% 特异性（spec）=100%D/(B+D)=100% 阳性预测值（PVP)= 100%A/(A+B)= 100% 阴性预测值（PVN)= 100%D/(C+D)= 100% 检验效能= 100%(A+D)/N=100%灵敏度与特异性 95%得分可信区间的计算：灵敏度： Q1=2A+1.962=2A+3.84=8

10、3.84Q2=1.96 1.962+4AC/(A+C)=1.963.84+4AC/(A+C)=3.84Q3=2(A+C+1.962)=2(A+C)+7.68=87.68100%（Q1-Q2)/Q3=91.24%100%(Q1+Q2)/Q3=100%灵敏度 95%得分可信区间为（91.24%，100%）特异性： Q1=2D+1.962=2D+3.84=123.84Q2=1.96 1.962+4BD/(B+D)=1.963.84+4BD/(B+D)=3.84Q3=2(B+D+1.962)=2(B+D)+7.68=127.68100%（Q1-Q2)/Q3=93.98%100%(Q1+Q2)/Q3=1

11、00%特异性 95%得分可信区间为（93.98%，100%）二、 重复性验证1、 日内重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的检测条件下（仪器设备、实验人员） ，对同一批号试剂进行同一天 20 次测量，计算均值， SD 及 CV。试剂批号：2016055811 恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1432酶标仪编号：OB-02-13 实验人：夏诗雨 实验日期：2016.07.06序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10低值 0.590 0.693 0.638 0.611 0.769 0.683 0.589 0.532 0.681 0.619中值 1.188

12、1.154 1.217 1.174 1.339 1.238 1.131 1.240 1.248 1.346OD 值高值 2.188 2.162 2.425 2.287 2.273 2.354 2.160 2.260 2.404 2.522序号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20低值 0.570 0.678 0.634 0.580 0.635 0.544 0.618 0.654 0.595 0.546中值 1.253 1.383 1.352 1.286 1.229 1.278 1.322 1.235 1.176 1.251OD 值高值 2.431 2.275 2.333

13、2.223 2.358 2.218 2.361 2.267 2.389 2.263低值样本：均值 X1= 0.623 ， SD1= 0.059 ，CV 1= 9.5% 中值样本：均值 X2= 1.276 ， SD2= 0.070 ，CV 2= 5.5% 高值样本：均值 X3= 2.312 ， SD3= 0.097 ，CV 3= 4.2% 2、 日间重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的检测条件下（仪器设备、实验人员） ，对同一批号试剂进行 20 天，每天 1 次测量，计算均值，SD 及 CV。试剂批号：2016055811 恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1

14、432酶标仪编号：OB-02-13 实验人：夏诗雨日期 07.06 07.07 07.08 07.09 07.10 07.11 07.12 07.13 07.14 07.15低值 0.612 0.556 0.560 0.650 0.639 0.625 0.604 0.608 0.501 0.597中值 1.168 1.167 1.245 1.452 1.343 1.270 1.378 1.268 1.173 1.224OD 值高值 2.255 2.191 2.226 2.336 2.171 2.100 2.183 2.390 2.210 2.207日期 07.16 07.17 07.18 07

15、.19 07.20 07.21 07.22 07.23 07.24 07.25低值 0.682 0.646 0.718 0.663 0.614 0.587 0.650 0.589 0.611 0.546中值 1.273 1.146 1.247 1.174 1.297 1.244 1.278 1.203 1.214 1.208OD 值高值 2.196 2.098 2.272 2.183 2.283 2.164 2.308 2.267 2.169 2.387低值样本：均值 X1= 0.631 ， SD1= 0.050 ，CV 1= 7.9% 中值样本：均值 X2= 1.228 ， SD2= 0.0

16、77 ，CV 2= 6.3% 高值样本：均值 X3= 2.233 ， SD3= 0.082 ，CV 3= 3.7% 3、 仪器设备重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的实验人员，不同的仪器设备中对同一批号试剂进行同一天 20 次测量，计算均值， SD 及 CV。试剂批号：2016055811 洗板机 01：01-F00-1432 洗板机 02：01-F00-1431实验人员：夏诗雨 恒温箱编号：01-F00-0966酶标仪编号：OB-02-13实验员 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01低值 0.606 0.658 0.589 0.565 0.667 0.613

17、0.574 0.627 0.626 0.563中值 1.189 1.248 1.193 1.257 1.286 1.245 1.204 1.224 1.147 1.203OD 值高值 2.246 2.293 2.300 2.257 2.246 2.195 2.315 2.275 2.168 2.305实验员 02 02 02 02 02 02 02 02 02 02低值 0.613 0.593 0.566 0.603 0.663 0.636 0.596 0.554 0.512 0.571中值 1.253 1.187 1.221 1.236 1.371 1.263 1.207 1.219 1.1

18、69 1.280OD 值高值 2.184 2.251 2.236 2.168 2.271 2.415 2.329 2.293 2.184 2.314低值样本：均值 X1= 0.591 ， SD1= 0.040 ，CV 1= 6.8% 中值样本：均值 X2= 1.241 ， SD2= 0.049 ，CV 2= 3.9% 高值样本：均值 X3= 2.264 ， SD3= 0.063 ，CV 3= 2.8 % 试剂批号：2016055811 恒温箱 01：01-F00-0966 恒温箱 02：01-F06-6172洗板机编号：01-F00-1432 实验人员：夏诗雨 酶标仪编号：OB-02-13实验

19、员 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01低值 0.558 0.659 0.629 0.547 0.674 0.638 0.557 0.627 0.564 0.668中值 1.235 1.362 1.245 1.159 1.283 1.315 1.246 1.280 1.331 1.211OD 值高值 2.374 2.433 2.252 2.181 2.292 2.307 2.226 2.222 2.178 2.317实验员 02 02 02 02 02 02 02 02 02 02低值 0.601 0.601 0.584 0.582 0.530 0.612 0.699 0

20、.657 0.572 0.594中值 1.373 1.285 1.266 1.206 1.148 1.192 1.281 1.274 1.329 1.248OD 值高值 2.087 2.188 2.186 2.226 2.091 2.297 2.383 2.272 2.166 2.388低值样本：均值 X1= 0.603 ， SD1= 0.047 ，CV 1= 7.8% 中值样本：均值 X2= 1.260 ， SD2= 0.062 ，CV 2= 4.9% 高值样本：均值 X3= 2.228 ， SD3= 0.096 ，CV 3= 4.3 % 4、 实验人员操作重复性：使用低值、中值、高值样本，

21、分别在相同的仪器设备中，不同的实验人员对同一批号试剂进行 20 次随机测量，计算均值， SD 及 CV。试剂批号：2016055811 实验员 01：夏诗雨 实验员 02：张雪芳洗板机编号：01-F00-1432 恒温箱编号：01-F00-0966酶标仪编号：OB-02-13实验员 01 01 01 01 01 01 01 01 01 01低值 0.631 0.611 0.676 0.627 0.593 0.545 0.649 0.590 0.507 0.620中值 1.262 1.244 1.363 1.276 1.199 1.242 1.293 1.346 1.240 1.267OD 值高

22、值 2.500 2.227 2.138 2.282 2.119 2.177 2.295 2.355 2.289 2.196实验员 02 02 02 02 02 02 02 02 02 02低值 0.579 0.684 0.638 0.596 0.529 0.628 0.672 0.614 0.706 0.625中值 1.284 1.377 1.252 1.214 1.159 1.335 1.252 1.225 1.114 1.193OD 值高值 2.230 2.293 2.452 2.358 2.280 2.434 2.278 2.204 2.291 2.183低值样本：均值 X1= 0.62

23、7 ， SD1= 0.051 ，CV 1= 8.1 % 中值样本：均值 X2= 1.240 ， SD2= 0.066 ，CV 2= 5.3% 高值样本：均值 X3= 2.300 ， SD3= 0.102 ，CV 3= 4.4 % 三、 临界点验证使用有证标准物质，如卫生部临检中心或者康侧斯坦质控品，使用正常人血清为基质稀释液，进行梯度稀释，进行重复检测以确定可以获得近 50%阳性及近 50%阴性结果的那个稀释度，确定临界点（C50） 。试剂批号：2016095818 标准品名称：康彻斯坦质控品标准品批号：201302001洗板机编号：01-F00-1432恒温箱编号：01-F00-0966酶标

24、仪编号：OB-02-13实验人：夏诗雨 实验日期：2016.09.23序号 1 2 3 4 5 6稀释液量（ul ） 0 200 400 400 500 600稀释比例 0 1:10 1:20 1:30 1:40 1:50终浓度（NCU/ml） 8 0.8 0.4 0.27 0.2 0.16检测结果 S/C.O. 2.730 0.895 0.526 0.291 0.168 0.119预测临界点曲线方程式：y=1.213x-0.044预测临界点（C50 ）： 0.15NCU/ml 临界值： 0.140 HCV 临界点验证数据（C50 连续测试 40 次）试剂批号：2016095818 洗板机编号

25、：01-F00-1432 酶标议编号：OB-02-13恒温箱编号：01-F00-0966 实验人：夏诗雨 实验日期：2016.09.23临界值：0.140序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10OD 值 0.163 0.132 0.127 0.116 0.132 0.208 0.104 0.182 0.165 0.158结果 + - - - - + - + + +序号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20OD 值 0.173 0.175 0.159 0.219 0.130 0.208 0.164 0.177 0.179 0.135结果 + + + + - + + +

26、 + -序号 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30OD 值 0.133 0.188 0.168 0.097 0.136 0.136 0.114 0.137 0.125 0.169结果 - + + - - - - - - +序号 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40OD 值 0.098 0.122 0.106 0.146 0.092 0.137 0.203 0.156 0.138 0.166结果 - - - + - - + + - +检测阳性结果数： 20 检测阴性结果数： 20 阳性结果百分比： 50% 最终确定临界点（C50 ）： 0.15NCU/ml 四、 验证小结通过本次 ELISA HCV 项目检验方法验证实验，测得该方法的灵敏度与特异性，基于对所测样本代表性的抽样误差估计，其 95%得分可信区间分别为（91.24%，100%） ，（93.98%，100%） 。而对该方法重复性的评价结果，表明日内、日间、仪器设备间及实验操作人员间的重复性结果变异系数均较小，日内、日间、仪器设备间及实验人员操作间重复性小于 10%。临界点验证实验确认了该方法的临界点，约为 0.15NCU/ml。