1、安捷伦 1220 高效液相色谱仪操作规程1.目的：确保安捷伦 1220 高效液相色谱仪的正确使用和维护。2.适用范围：安捷伦 1220 高效液相色谱仪在使用中的操作。3.职责：化验员负责实施，品控部经理负责监督。4.操作规程4.1 工作原理HPLC 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成，工作时储备器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，
2、样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。4.2 操作步骤4.2.1 开机先 打 开 仪 器 电 源 ， 打 开 电 脑 桌 面 上 的 【 1220 联 机 】 图 标 ， 进 入 软 件视 图 介 面 ， 双 击 【 控 制 】 图 标 下 的 【 仪 器 状 态 】 图 标 ， 点 视 图 介 面 上的 【 开 启 】 图 标 ， 待 视 图 介 面 各 状 态 都 变 成 绿 色 后 ， 先 打 开 【 冲 洗 阀 】排 除 系 统 中 的 气 泡 ， 光 标 移 到 视 图 菜 单 【 梯 度 泵 】 ， 右 键 点 击 【 方 法 】将 【 流 量 】 改 成 3
3、mL/min,溶 剂 A （ 100%） 、 B（ 100%） 各 放 空 冲 洗3 5 分 钟 后 （ 无 气 泡 ） ， 关 闭 【 冲 洗 阀 】 。 将 【 流 量 】 设 为 所 需 流 速 ，用 纯 有 机 相 冲 洗 系 统 30 分 钟 ， （ 如 果 使 用 缓 冲 溶 液 与 盐 做 流 动 相 需 用10%的 有 机 相 +水 冲 冼 系 统 30 分 钟 后 更 换 流 动 相 ） 换 上 所 需 流 动 相（ 排 气 泡 ） 平 衡 仪 器 稳 定 。4.2.2 方法的建立点击视图菜单中的【仪器向导】双击视图菜单中的【创建新方法】 ，将方法改好后，点【文件】另存为【方
4、法】命名，点【控制】 【下载方法】点查看【在线信号】看基线是否平稳。4.2.3 序列的建立在视图菜单中点【序列】中的【编辑】 ，将序列中的【重复次】 【样品瓶】 【体积】 【样品 ID 】 【方法】 【文件名】 【样品制备】 （样品制备视情况设定）编好后点【文件】另存为【序列】设好文件名，保存。4.2.4 分析样品待仪器基线平稳后，查看软件上方的方法与序列是否是你所需要运行的序列，并检查好样品瓶与洗针瓶（需要才放，视方法而定）的位置与序列中设置的是否能对号入座，如果是的话就可以点【控制】下的【序列运行】4.2.5 数据分析打开电脑桌面上的【1220 脱机】 ，点视图上的【文件】打开一个【结果集
5、】或【数据】 选中所要处理的图谱，点视图上的【文件】打开【方法】 ，找到【积分事件】进行谱图优，将积分变化保存到方法，点视图【分析】 （如外标法）等所需峰出来后，点视图上的【定义单峰】后，点【分析单一级别校正】后点【检查校正】就能得出曲线。4.2.6 外标法需计算得出结果（按使用方法上的计算公式来计算）4.2.7 关机打 开 电 脑 桌 面 上 的 【 1220 联 机 】 图 标 ， 进 入 软 件 视 图 介 面 ， 双 击 【 控制 】 图 标 下 的 【 仪 器 状 态 】 图 标 ， 光 标 移 到 视 图 菜 单 【 梯 度 泵 】 ， 右键 点 击 【 方 法 】 将 【 流 量
6、 】 改 成 0mL/min,打 开 【 冲 洗 阀 】 【 应 用 】 再将 溶 剂 A （ 100%） 、 B（ 100%） 各 【 流 量 】 改 成 3mL/min 放 空 冲 洗3 5 分 钟 后 （ 无 气 泡 ） ， 关 闭 【 冲 洗 阀 】 。 将 【 流 量 】 设 为 【 1mL/min】 ，用 纯 有 机 相 冲 洗 系 统 60 分 钟 ， （ 如 果 使 用 了 缓 冲 溶 液 与 盐 做 流 动 相 需用 10%的 有 机 相 +水 冲 冼 系 统 90 分 钟 后 更 换 流 动 相 ， 换 上 纯 有 机 相 后排 气 泡 再 冲 洗 60 分 钟 ） 仪 器
7、 冲 洗 好 后 点 【 控 制 】 图 标 下 的 【 仪 器 状态 】 图 标 ， 光 标 移 到 视 图 菜 单 【 梯 度 泵 】 ， 右 键 点 击 【 方 法 】 将 【 流量 】 改 成 0mL/min,【 应 用 】 点 视 图 介 面 上 的 【 关 闭 】 图 标 ， 待 视 图 介面 各 状 态 都 变 成 灰 色 后 ， 关 掉 仪 器 上 的 电 源 ， 电 脑 关 机 。4.3 注意事项4.3.1 HPLC 必需使用色谱纯试剂与超纯水，溶剂需先脱气与过滤后使用，避免溶剂瓶直接日照，定期更换溶剂，避免使用对不锈钢有腐蚀性溶剂，不使用混溶性溶剂，样品的检测波长应至少大于
8、所用溶剂的截止波长 20nm 以上。水最好放在棕色瓶中，以防长菌（也可加入少许叠氮化钠或有机溶剂，抑制长菌。 ）4.3.2 选用色谱柱必须与仪器连接性好，减少死体积，新装到系统上的色谱柱需要进行初始化：先断开柱子与检测器间的管路，用流动相将色谱柱中的原有流动相或气泡移出色谱柱，再将色谱柱和检测器间的管路重新接好。4.3.3 玻璃吸滤头不能用超声波清洗，用 36%的浓硝酸浸泡 2 个小时左右。5. 仪器的保养与维护5.1 日常开机操作时需要进行系统的初始化和柱平衡，每天实验结束前都应该用适当的溶剂充分冲洗色谱柱，不同色谱柱所需的冲洗溶剂也不相同，请参考所用色谱柱的说明书进行操作。5.1 .1 定
9、期更换冲洗阀的 PTFE 过滤白头，在实验室中至少应备有510 个过滤白头，一般打开冲洗阀，以水为溶剂，流速为 5ml/min,系统压力大于 10bar 就应该更换冲洗阀中的过滤白头了。5.1.2 当使用缓冲盐做流动相的时候 ，采用手动控制密封垫清洗装置（乳胶管和流量调节器） ，一般维持每分钟几滴的流量清洗缓冲盐即可。5.1.3 使用自动进样器时，样品瓶上的盖密封垫为一次性用品，需要及时更换，而且在盖样品瓶时不能盖得过紧，以不漏为准，过紧对进样针会造成损伤。5.1.4 每天做完样品后，可关闭氘灯，节约灯能量，打开氘灯后需预热，新灯大概需要十几分钟的预热时间，如果灯的使用时间已经很长则预热时间也需适当延长，不要频繁的开关氘灯，否则影响寿命。氘是一种衰变元素，不建议提前购买储备
