1、高效液相色谱仪操作规程一、目 的：建立高效液相色谱仪的标准操作规程二、适用范围：本规程适用于本公司高效液相色谱仪操作规程的操作三、职 责：质量检验员对本标准的实施负责四、正 文：1.工作原理高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由积分仪记录，得到的信号-时间曲线。2.系统适用性按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,包括以下要求：色谱柱的理论板数（N）：理论板数应高于各品种项下规定的最小理论板数，若理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数,应
2、改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。分离度和拖尾因子：除另有规定外,分离度应大于1.5T应在0.951.05之间。3.仪器组成本系统由LC-15ATvp溶剂输送泵、手动进样阀7725i、SPD-15Avp紫外检测器、Lcsolution工作站、电脑和柱温箱等组成。4.准备4.1根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（箭头依次朝上）。4.2检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4.3准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜过滤，用吸气减压装置脱气。4.4按标准操作规程配制样品和对照溶液，用合适的0.45m滤膜过滤。5.开机接通电源，依次开启
3、泵，检测器（在进样前30min打开）、Lcsolution工作站。5.1 LC-15C泵操作5.1.1逆时针转动泵的排液阀180，打开排液阀；5.1.2按泵的purge键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min(可设定)的流速冲洗，5min（可设定）后自动停止；5.1.3将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。5.2 SPD-15A检测器参数设定5.2.1检测器显示屏显示 （NM） abs (AV) range (AUFS) 1amp 254 0.000 0.001 D “ （NM）”项为波长，“abs (AV) ”项为吸光度，“range (A
4、UFS) ”项表示量程，“1amp”项表示氘灯。5.2.2泵显示屏显示如下： FLOW/PRESS PRESSURE P.MAX P.MIN 0.000 0 0 0“FLOW/PRESS”项为流速，“PRESSURE ”项表示压力，“P.MAX”项为最大压力，“P.MIN ”项表示最小保护压力，。5.2.3按pump 启动泵，待压力稳定后，可开始分析测定工作。5.2.4观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.1.1操作。5.2.5观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进
5、样。5.3启动【LC实时分析】 5.3.1打开电脑主机电源，确保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。5.3.2打开每一个单元的电源，并确保所有单元都没有显示任何错误信息。双击Lcsolution15C色谱在线色谱工作站，启动Lcsolution色谱在线色谱工作站单击仪器的分析，显示【LC实时分析】窗口。5.3.3检查分析仪器，单击助手栏中的（系统检查）图标，设置要检查的项、设置输出格式，设置每一项并单击运行，请确保没有任何仪器故障，并在【LC实时分析】窗口的状态栏显示区域中显示为就绪。5.4 建立新方法文件5.4.1点击LC实时分析左上角助手栏文件项，选择文件项里的新建
6、方法文件，在【仪器参数视图】中设置在分析中要使用的仪器参数，【仪器参数视图】分为正常和高级.单击正常显示一个标签,可以在其中输入分析条件,比如测量时间,泵流速,检测器波长,洗脱模式等,确保为每一个检测器设置LC停止时间和结束时间并应用到所有采集时间.5.4.2泵的洗脱分为等浓度和二元高压梯度洗脱,如方法使用到二元高压梯度洗脱,则点击LC时间程序在LC时间程序里设定对应的梯度和时间.5.4.3在【仪器参数视图】中设置好所有仪器参数后, 单击下载将设置传输到仪器,并且仪器将按照新的参数开始运行;点击LC实时分析左上角助手栏文件项,选择文件项的另存方法,将方法保存在易于找到的文件夹中。5.5执行单次
7、分析 5.5.1进入【LC实时分析】窗口后，确保显示就绪，且色谱图视图中的基线稳定后，单击LC实时分析窗口助手栏上的单次运行图标，出现【单次运行】屏幕，设置指定用于分析的方法文件，输入创建数据文件的名称，输入完毕后点击确定。然后将进样阀手柄置“LOAD”处，进样，将进样阀手柄转到“INJECT”位置，工作站自动采集数据，状态栏显示正在运行。5.6数据分析5.6.1双击Lcsolution在线色谱工作站，启动再解析，在助手栏中选择LC数据分析,在助手栏中选择相对应的文件序号进行数据处理分析。6.关机选关闭泵然后选主窗口右上角关闭框退出色谱工作站。用鼠标单击开始选关闭系统，选择关闭计算机，单击是。关闭检测器电源，用纯甲醇充分清洗泵和色谱柱，待压力降到正常水平关闭泵电源。
