1、实训六.病毒液收取与血凝试验（HA）,一.试验的目的,掌握鸡胚培养病毒的收集方法 掌握微量血凝试验的整个操作过程,二.试验原理,一些动物红细胞(如鸡、豚鼠等)以及人“O”型血红细胞上有流感病毒受体，遇流感病毒可产生红细胞凝集现象，简称血凝。,三.实验材料,鸡胚或病毒液、恒温箱、蛋盘、镊子、酒精灯、3%的碘酊棉球、75%的酒精棉球、无菌瓶子、96 孔微量血凝反应板、微量移液器、吸头、微量震荡器、生理盐水、病毒阳性血清、1%的鸡红细胞等。,四.方法步骤,1收毒： 将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜，使血管收缩，以便得到无胎血的纯尿囊液。 用碘酒消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。切开壳膜及其
2、下面的绒毛尿囊膜，翻开到卵壳边上。 将鸡卵倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液。一个蛋胚约可收获6ml左右尿囊液。若操作时损伤了血管，则病毒会吸附在红细胞上，影响后续实验。收获的尿囊液经无菌试验后可在4以下的温度中保存。 观察鸡胚，看有无典型的症状。,2.血凝试验操作步骤,1) 在 96 孔 V 形微量反应板上进行,自左至右各孔加50ul 生理盐水。 2) 于左侧第 1孔加 50uL病毒原液或收获液,混合均匀后,吸 50ul 至第 2 孔,混合均匀后至 第 3 孔,依次倍比稀释,至第 11孔,吸弃50ul。稀释后病毒稀释度为第 1 孔1:2,第 2孔 1:4,第 3 孔 1:8最后一孔为对照。 3)
3、 自左向右依次向各孔加 1%鸡红细胞 50ul，置微型混合器上振荡1 分钟或以固定转圈震 荡反应板,使血球与病毒充分混合,在 37摄氏度温箱中作用 15-30 分钟,待对照孔红细胞已沉淀可观察结果。 4) 判断结果:以100%凝集的病毒最大稀释孔为该病毒血凝价,即一个凝集单位,不凝集者血细胞沉于孔低成点状。没有凝 集的红细胞沉积在 V 形孔的底部，把 96 孔微量血凝反应板倾斜适当角度时成线状流下，凝集的红细胞成絮状在 V形孔的壁上，不成线状流下。,15-分钟,15-分钟,血凝试验流程图,振荡min后,五.结果与分析,凡能使鸡血红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数， 称为该病毒的血凝度。,正确读出血凝结果,补充.实验报告的撰写,一.实验目的 二.实验原理(可省略) 三.实验材料 四.实验操作方法内容步骤 五.实验结果与分析 注意：要简明扼要，结果要清晰。,
