1、农业微生物学实验,实验二培养基的制备和灭菌,1本实验的目的和要求了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法。,实验二 培养基的制备和灭菌,2实验内容和原理马丁氏培养基的配制 手提式高压蒸汽灭菌锅的使用生理盐水的配制,实验二培养基的制备和灭菌,马丁氏培养基 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。,马丁氏培养基配方如下：,葡萄糖 10g蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO47H2O 05g 琼脂 1520g 水 -1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉
2、素液0.3ml。,实验二培养基的制备和灭菌,高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。,实验二培养基的制备和灭菌,需用的仪器和试剂等KH2PO4、MgSO47H2O、蛋白胨，葡萄糖、琼脂、孟加拉红、试管、三角瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压蒸汽灭菌锅，牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸等。,实验二培养基的制备和灭菌,4实验步骤培养基的配制 称量 溶化
3、 调pH 过滤分装加塞包扎灭菌 无菌检查,马丁氏培养基的配制,1称量和溶化 按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液33ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。 2分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检查。 3链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45左右时才能加入。,灭菌操作步骤,1首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 2放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌
4、效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。,灭菌操作步骤,4加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 105kg/cm2，1213，25分钟灭菌。 5灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6将取出的灭菌培养基放入 37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。,实验二培养基的制备和灭菌,生理盐水的配制0.85%的氯化钠水溶液例如：100ml生理盐水配制：称取0.85克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，定容到100毫升。,实验二培养基的制备和灭菌,1. 制备培养基马丁氏培养基400ml/瓶，共3瓶 2.制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用）9ml/支 20支；90ml/瓶，4瓶（加玻璃珠） 3.灭菌121 25min,实验二 培养基的制备和灭菌,五、实验报告 1结果 检查培养基灭菌是否彻底。 2思考题 什么是选择培养基？它在微生物学工作中有何重要性？,
