1、仪器设备1、 医用微波炉；2、 水浴锅；3、 OLYMPUS BX51 荧光显微镜；4、 OLYMPUS DP11 数字显微照相机。FISH 试剂（1）1PBS：由 10PBS 溶液稀释而成，储存于 4；（2）20SSC（pH7.0） ；（3）2SSC，由 20SSC 溶液稀释而成；（4）25mg/ml 蛋白酶 K 消化液。（5）变性液(70甲酰胺+2SSC，pH7.0)：4ml 20SSC；8ml 蒸馏水；28ml 甲酰胺。每次新鲜配制。（6）杂交后洗涤液： 20SSC 4ml；蒸馏水 16ml；甲酰胺 20ml。每次新鲜配制。调节 pH前升至室温。实验步骤1、脱蜡：1）二甲苯脱蜡 3 次，
2、每次 5min；2）100酒精两次，每次 2min；3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。2、蛋白酶处理:1）每个染色缸 40ml 蛋白酶 K 消化溶液，配制方法如下：2SSC 40ml 倒人 Facal 管，在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。2） 37水浴槽中预热染色缸和蛋白酶 K 溶液。37孵育 20min。3） SSC 在室温下漂洗切片 3 次，每次 1min。4）梯度酒精脱水（-20预冷） 。3、变性：1）每一个立式染色缸配制 40ml 变性溶液；2）78水浴槽中平衡预热混合液染色缸；3）78孵育 8min；4） 即移入-20预冷 70%酒精的染色缸内 2m
3、in，再依次移入 80%、90%和 100%的-20预冷酒精内，每缸 2min；5）空气干燥。4、杂交：1）准备探针；2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；3）滴 10l 探针在切片的组织上，加盖玻片；4）盖上湿盒盖，37孵育 12h16h。杂交后的水洗：5）镊子小心去除盖玻片；6）43预热杂交后水洗溶液 40ml 水洗切片 15min；7）2SSC(37)洗两次，每次 10min；8）切片放人染色缸的 1PBS 内待检测，勿使切片干燥。检测：9）从 1PBS 中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理 4 张切片。10）每张切片使用 30l60l 罗丹明抗-地高辛抗体
4、或 FITC 卵白素，室温下孵育20min；11）去掉塑料盖膜，把切片放入含 1PBS 的染色缸。1PBS 室温下洗 3 次，每次 2min。扩增：12）从 1PBS 中取出切片，斜置切片使液体排出；13）每张切片滴 30l60l 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育 20min；14）去掉塑料盖膜，把切片放人含 1PBS 的染色缸。1PBS 室温下洗 3 次，每次 2min；15）从 1PBS 中取出切片，斜置切片使液体排出；16）每张切片滴 30l60l 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育 20min；17）1PBS 室温下洗 3 次，每次 2min。5、细胞核染色：1）张切片加 10l
5、20l DAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育 25ml；2）尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在-20冰箱。切片在染色之后 1h 内可以在显微镜下观察。PRINS 步骤1、常规脱蜡浸入 0.01mol/LPBS；2、用 0.2mol/L 盐酸处理 5min；3、蛋白酶 K(25g/m1)消化 37 15min；4、分别用 80，95和 100酒精脱水，室温干片；5、加 PCR 混合液 25L(10mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，1.5mmol/L MgCl2，各加200mol/L dATP，dCTP，dGTP，1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5l，引物 250ng，Taq DNA 聚合酶 2U)，加盖片；6、94变性 5min 后置入 65湿盒中 5min；7、用 0.1SSC 液，65洗 5min；8、片于 65 10s20s；用 4SSC-0.1吐温 20 液 42洗 5min，2 次；9、经 Buffer I 液洗后滴加 20羊血清封闭 30min；10、加地高辛抗体复合物(1:500)室温下 2h；11、Buffer液洗 5min；12、用 BCIP-NBT 显色 1h2h，在镜下控制，终止显色；13、用中性红或核固红衬染，酒精脱水，二甲苯透明，树脂封片。
