1、第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会会论文集，1999，27页5冯建国，陶训，张安盛等利用人工卵繁殖的螟黄赤眼蜂防治棉铃虫研究中国生物防治，199713(1)68地衣芽孢杆菌菌株鉴定和生化特征的研究+黄福祥1马建彬1朱西儒1谢小保2(1广州大学生化学院生物系；2广东省微生物研究所)摘要：从广东省东莞市等地土壤，分离出能抑制巴拿马病(Fusariumspp)的23种细菌中，筛选摄有效的8号和16号两个代表菌种。经过形态观察、生化测定等试验。结果表明：这两种菌是革兰氏染色阳性反应，产生芽孢，8和l舻属于“弛衣芽孢杆菌”。本文首次发现8号地衣芽孢杆菌(Lichenlf
2、oymisspp),鉴定结果与前人报道的有所不同。关键词：地衣芽孢杆菌(Lichenifoymis spp)生化特性分类地位Studied on the Identification of Specie and the Characteresin the Bi-chemistry to Lichenifoymis sppHuang Fuxiang1 Ma Jianbin 1 Zhu Xim 1 Xie Xiaoba02(1 The department of biology,the school of biocbenmical engineering，Guangzhouuniversity,G
3、uangzhou，510405：2InstituteofMirobiologyinGuangdongProvince)Abstruct：The idandfication and characters of bacterium,which was isolated from the soil grown the diseased plants in thefieldweresearched in this paper,because they were resistance against with banana Banam(Fusarium spp)No8and 16species of a
4、mong 23 species of antagonistic bacteria,were identifiedtO Lichenifoymis spp by observing the phom and thebiochemic testsThe msults showed they WelTe positive reaction with Glam Stain and sperm sporeso 011No8a iicw specieofLichenifoymis spp，probablywasl_eportcd atfirstKey Words：Lichenifoymis sp the
5、hio-chemic characters Classification grad香蕉巴拿马病，是对香蕉危害最重要病害之一。香蕉感染了这种病后，会导致大面积的死亡，农民只有把染病植株毁掉。该病菌是由土壤传播，在土中能潜伏710年之久。当香蕉收到大面积的感染时，只能改种别的作物。所以，每年都让农民受到很大的损失，特别是风味好，市场价格高的“粉蕉”，受害最为严重，一般发病率达到35左右1。第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会迄今，还没有药能很好地抑制此病。有报导说，往后香蕉将可能难以大面积种植。我们从土壤中分离了20多各菌株，对巴拿马病有抑制作用的颉抗菌。所以，有较
6、大的发展前途，其中，有2个对此病有特别好的抑制作用，即：8号和16号。因此，本文对这两种菌进行鉴定，明确其分类地位，以便进行大批量的生产。1材料与方法1 1材料111菌种从来自广州市番禺区，东莞市等地的土壤中，分离对巴拿马病有较强抑制作用的8号和10号颉抗菌。112培养基牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCI 5 g，水1 000ml，pH74-76113生化测试由广东省微生物研究所提供。12方法121培养基削备牛肉膏蛋白胨培养基，分别在培养基上用“平板画线法“21获得8号和16号菌的单菌落。观察单菌落的形态和生长情况。l-22菌体染色在牛肉蠹蛋白胨培养基上，用8号和10号
7、菌株，均以24h和48 h进行培养。培养24h后，进行“革兰氏染色。；培养48 h后，进行芽孢染色。最后，观察其菌体的形态特征。123 API 5 0 CHB”检测根据对8号和10号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为“地衣芽孢杆菌”。因此，决定用鉴定芽孢杆菌：“API 50CHB(地衣芽孢杆菌鉴定方法)” 进行菌种检测。具体步骤：在培养基中，将被测的菌种制成菌悬液，接种反应板中的每个小管。培养期间，菌种会发生糖发酵产酸，导致pH值下降，指示剂的颜色变化。结果组成该菌株的生化图谱，并用作菌种鉴定。12。4生化指标测定根据前人发现的地衣芽孢杆菌的形态和生化特性，对8号和10号地衣
8、芽孢杆菌进行相应的生化指标测定“1。具体步骤如下：在牛肉膏蛋白胨培养基上，用8号和10号菌株培养24h。然后，进行菌株的生长、产酸、水解、利用、分解等方面生化实验。试验每一个处理，重复3次。2 结果分析用试验的8号和16号菌株，与迄今为止发现的“地衣芽孢杆菌”标准菌株进行生化特征的对比。21菌种形态特征211地衣芽孢杆菌8号菌种观察结果经过单菌落分离和染色，该菌是“革兰氏阳性菌”，菌体均一，皆为长杆状，大小：长266k(见图版1)，有鞭毛，。产芽孢，芽孢中生(见图版2)，一般单生。生长温度范围广，最低25，最高达50，是属于芽孢杆菌。112第三届令国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国
9、生物农药研讨会图版1地衣芽孢杆菌8号菌营养体(100X)212单菌落特征侄37，牛肉膏蛋白瞧培养基中，培养24h，菌落呈圆形，边缘剧齿状，表面非粘稠状，菌落较小，直径23mm213 1 6号菌种观察结果图版2地衣芽孢杆菌8号菌芽孢形态(100X)经过单菌落培养分离，该菌旱革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，菌长-4，(见图版3)，一般单生，产鞭毛，。产芽孢，芽孢中生(见图版4)。生长温度广，最低25，最高达55。可能是一株芽孢杆菌。图版3 1 6号菌营养体(100 X) 图版4 16号菌芽孢形态(100 x)214单菌落特征在37。C，牛肉膏蛋白胨培养基中，培养24h，菌落呈圆剧齿状，表面湿润
10、有光泽和大量的黏液，菌落大，直径4-5ram2 2 API 50 CHB进行菌种检测根据对8号和16号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为芽孢杆菌，进一步用：API 50 CHB进行菌种检测(见表1)。表1 APl50 CHB检测列表空白甘油赤藓醇D一啊啦伯糖L一阿拉伯糖七叶灵柳酵纤维二糖麦芽糖乳糖第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会核糖D一木糖L一木糖阿东醇蜜二糖 十 +蔗糖 + +海藻 + 十菊糖 一 +B甲基-D一木糖 一 一 松三糖 一 一半乳糖 + 十一 绵子糖 + +葡萄糖 + + 淀粉 + +果糖 十 + 糖原 十 +甘露耱 + +
11、 木糖醇 一山梨糖 +一 一+ 龙胆二糖 一 一鼠梨糖 一 一十 D一松二糖 + +卫矛醇 一 一 D来苏糖 一肌醇 + + D一塔格糖 一甘露醇 + + D一岩糖 一 一山梨醇 + + L一岩糖 一 一!二里薹二望二笪墨楚蔓二 二 望二堕蕉竖 二 二+表示有反应表示没反应+一表示反应以有为主一+表示反应以无为主用以上结果，组成该菌株的生化图谱，并用来鉴定得出8号和16号是地衣芽孢杆菌。23地衣芽孢菌生化特性根据地衣芽孢菌的基本的生化特征”1进行相关的生化试验”1，对8号和10号两种地衣芽孢杆菌的一些生化特性进行比较(见表2)：表2地衣芽孢茵的一些生化特性比较名称8号 16号 名称8号 16号
12、革兰氏反应运动性接触酶厌氧生长VP反应VP培养液中的pH值最低生长温度C最高生长温度。C卵黄反应溶酶菌中葡萄糖 +阿拉伯糖 +木糖 +甘露醇 +水解淀粉 +水解马屎酸盐(4周) 一利用柠檬酸盐 +利用丙酸盐 +从N03产生N02 +分解酪素 +114+坫船+“坫一第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会7NaCl + -i- 分解酪氨酸plq 57 + + o02 一 一+表示有反应表示没反应+一表示反应以有为主一+表示反应蚪无为主从上面两种地衣芽孢的形态结构和生化特性的比较得出：，两种菌虽同属地衣芽孢杆菌，但其单菌落的特征明显不同，其单个菌体的长度也有所不同。而生
13、化特征除了生长范围和VP培养液中的pH值不同外，其他的生化特性都相同。2 4两种地衣芽孢杆菌8号和10号与模式菌种的比较241生化特征的比较把8号和10号地衣芽孢杆菌，与1 9 8 3年以前的发现的21种地衣芽孢“1进行一系列生化特征的比较(见表3)。从表3中可看出：8号16号两种地衣芽孢杆菌和21种地衣芽孢杆菌的生化特征大部分相同，8号菌只有生长的最高温度和VP培养液中的pH值与其他的地衣芽孢杆菌有所不同外，其他的大部分相同。16号菌与102、6598、8048、9259、9789、9945、12139、13438号菌基本相同很可能是同种。因数据有B艮要进行进一步的实验。242鉴定菌种与模式
14、菌种的比较本研究菌种与褚西宁等(1991)”分离了一株芽孢杆菌相比较，结果见4：表3地衣芽孢杆菌待鉴定菌种与模式菌株生化特征的对啦_-一-+十十+十+十+一-一一-努“鲇巧“弱鲐钙郛弱临博坫坫坫埒仔”H恬蝤u“拍拍孙“弘舶舶让舶+十+斗一一+6847O9995。墨；哪鼢兰詈詈詈嗡嗡螂孵第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会t 21种苗都能在葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇产酸。都能水解淀粉。不能水解马尿酸盐。都能利用柠檬酸钠，丙酸盐都能从N03产生N02。都能分解酪素，不能分解酪氮酸。麦墨猫)Q呈地蠢莹孢j至蕾盎的比寝琶拄曼 酋住古尘I些2 生基垂廑l蔓2 差孢友式
15、 亡翌L酸8号 2-66 25-50 中生 无16号 2-40 25-55 中生 无鉴 Z：Q 2：丝 ： 互*CK一产乳酸的芽孢杼菌，革兰氏染色均为阳性。从表4可以看出：该产乳酸菌和8号和16号的生长温度、大小和产乳酸都不同。因为没有该菌的样本，不能进一步的研究。所以，初步认为：该产乳酸菌和8号和16号是不同的菌。2结论与讨论被鉴定8号菌是革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，产芽孢，芽孢中生，长2-661tM一般单生，产鞭毛，生长温度广，最低25。C，最高达50是一株芽孢杆菌。生化特征与以前的发现的地衣芽孢杆菌大部分相同，但其生长温度，在VP培养液中的pH值，与以前报道的地衣芽孢杆菌有所不同
16、。所以，8号菌有可能是该属的一个新种。经116过查新证明，目前，尚未见有相同报道。由于时间关系，条件有限，不能做深入试验，其有待进一步的研究。16号菌也属于呈革兰氏阳性菌，菌体形状、产鞭毛，、产芽孢以及方式，同8号，但是，菌体长2-4r晡1，生长温度广，最高达55。C。是一株地衣芽孢杆菌。生化特征与以前报道的102、6598、8048、9259、9789、9945、12139号菌基本相同，所以很可能是同一种。从土壤中提取的8号和1 6号菌是地衣芽孢杆菌属。对香蕉的巴拿马病有很好的抑制作用，通过对这两种菌的形态特征的研究、分类地位的鉴定，使人们能更好的利用这两种菌，来控第三届全国绿色环保农药新技
17、术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会制制香蕉巴拿马病，解决生产实际问题。参考文献【1中国农作物病虫害编辑委员会编中国农作物病虫害(下册)1981，北京：农业出版社1849-i8502黄秀丽微生物学实验指导高等教育出版社，19993赵斌，何绍江主编微生物学实验北京：科学出版社20024Bio Merievx IDENYIFICATION AND SUSCEPTIBILITY TESTING API ATB SYSTEM5戈登海恩斯帕格著蔡秒英，刘津太，战立克译芽孢杆菌属北京：农业出版社19836楮西宁，卫军，陈海波，刘东兴，袁滔著微生物学通报1991，18(3)茁二磊鬲磊焉磊-对广东省微生
18、物研究所欧阳友、陈仪本老师指导，以及提供试验条件表示衷心感谢放线菌LA5菌株产生的抗真菌抗生素的初步研究+曾会才+邬国良余风玉李振华(中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737)摘要：对放线菌LA5菌株的抑菌谱进行了初步测定，结果表明：放线菌LA5菌株对辣椒疫霉菌Phytophthoracapsici、稻瘟菌毋订cularia grisea、香蕉炭疽菌Colletotrichummusae、香蕉枯萎镰刀菌Fusarium oxysporumspcubense、香蕉黑星病菌Phyllosticta musBJum和芒果炭疽菌Colletotrichum“oeosporiodles
19、等6种植物病原菌表现很强的抗菌活性，对茄子腐皮镶刀菌Fusa旷Jum solani具有明显的抑效果；通过阳离子交换层析法对LA5菌株产生的抗生素进行了分离纯化，获得了抗生素LA5的结晶，理化性质测定结果表明，这种抗生索属水溶性、弱虢眭抗生素，对光、热稳定，符合农药贮藏稳定性要求。关键词：放线菌LA5菌株抑菌谱抗真菌抗生素Testing on Antifungal Spectrum of and Isolation and purification ofAntagonistic produced by Aetinomycetales Strain LA5ZENG HuiCaiWU Guo-lia
20、ng YU Feng-Yu LI ZhengHuaSupervisor：Vice ProL Zeng Huicai+基金项目：中国热带农业科学院科技基金重点支助项目。+作者简介：曾会才(1964一)男，博士，副研究员，E-mail：zhc081126COITI。+Supportedbytheseiencc andTcchnologyFoundationofChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience+Corresponding author：Zeng HuiCai，PhD。Associate Professor,Emaihzhc081126corn11
21、7地衣芽孢杆菌菌株鉴定和生化特征的研究作者： 黄福祥， 马建彬， 朱西儒， 谢小保作者单位： 黄福祥,马建彬,朱西儒(广州大学生化学院生物系)， 谢小保(广东省微生物研究所)本文读者也读过(8条)1. 王晓丽.朱小翠.王永山.诸玉梅.刘小娟.周宇.王冉 8株芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究会议论文-20102. 李金婷.路福平.李玉.王建玲.LI Jin-ting.LU Fu-ping.LI Yu.WANG Jian-ling 高效降解羽毛角蛋白菌株的筛选与鉴定期刊论文-天津科技大学学报2010,25(6)3. 燕红.杨谦.YAN Hong.YANG Qian 两株芽孢杆菌产纤维素酶的诱导机
22、理研究期刊论文-林产化学与工业2006,26(3)4. 付石军.孙建义 中性植酸酶在水产中的应用期刊论文-中国饲料2005(2)5. 姜明姣.肖克宇.田业强 芽孢杆菌植酸酶及其在水产养殖中的应用期刊论文-畜牧与饲料科学2007,28(2)6. 聂庆霁.史玉峰.王玲.何斌.李雪影.王睿勇 地衣芽孢杆菌nju-1411-1降解羽毛角蛋白过程中含硫化合物的变化期刊论文-江苏农业科学2010(4)7. 袁科平.邹世平.李谷.何力.周群兰.YUAN Ke-ping.ZOU Shi-ping.LI Gu.HE Li.ZHOU Qun-lan 一株水产地衣芽孢杆菌的鉴定及培养基优化期刊论文-福建农林大学学报（自然科学版）2011,40(1)8. 蒋若天.宋航.蒲宗耀.陈松.刘成君.卢涛 一株产高温淀粉酶的地衣芽孢杆菌的分离和筛选会议论文-2007本文链接：http:/
