浙大生化实验一

1、验背景三、 实验设计四、 实验目的五、 实验原理六、 实验步骤七、 实验器材八、 实验结果九、 注意事项十、 实验讨论十一、 实验总结过氧化氢酶的制备与测定第 3 页 共 16 页一、摘要过氧化氢酶是催化过氧化氢分解为氧气和水的酶，该酶存在于动物的各个组织内，特备在肝脏中以高浓度存在。
H2O2 与 O2 在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH，为了避免这种损坏，过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性小的物质，即过氧化氢酶将过氧化氢分解为水和氧气。
其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶的溶解性和大分子特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化的过氧化氢酶，并对植被的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等的测定。
1、 匀浆：均 匀 化 的 物 质 ;尤 指 分 得 很 细 (如 用 研 磨 器 )并 经 过 充 分 混 匀 的 生物 组 织 。
本 实 验 就 是 将 小 鼠 肝 脏 制 成 匀 浆 液 以 进 行 试 验 。
2、 盐 析 ： 一 般 是 指 溶 液 中 加 入 无 机 盐 类 而 使 某 种 物 质 溶 解 度。

2、法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二 总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。
实验五 粗脂肪的定量测定索氏提取法（1）本实验制备得到的是粗脂肪，若要制备单一组分的脂类成分，可用什么方法进一步处理？答：硅胶柱层析，高效液相色谱，气相色谱等。
（2）本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?答：防止脂质被氧化。
实验六 蛋白质等电点测定1、 在等电点时蛋白质溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。
蛋白质是两性电解质，在等电点时分子所带净电荷为零，分子间因碰撞而聚沉倾向增加，溶液的粘度、渗透压减到最低，溶解度最低。
结果中 pH 约为 4.9 时，溶液最浑浊，达到等电点。
答：2、在分离蛋白质的。

3、缩 合 物 。
利 用 这 一 性 质 可 以 鉴 定 糖 。
三 、 实 验 器 材棉 花 或 滤 纸 ； 吸 管 1.0ml（ 5） 、 2ml（ 1） ； 试 管 1.5cm15cm（ 5） ； 容 量 瓶50ml（ 5） ； 烧 杯 50ml（ 5） ； 棕 色 瓶 50ml（ 5） ； 玻 璃 棒 多 根 、 电 炉 （ 配 石 棉 网 ） 多个 。
四 、 实 验 试 剂莫 氏 试 剂 ： 称 取 -萘 酚 2.5g， 溶 于 95 乙 醇 并 稀 释 至 50ml。
此 试 剂 需 新 鲜 配 制 ，并 贮 于 棕 色 试 剂 瓶 中 。
1 蔗 糖 溶 液 ： 称 取 蔗 糖 0.5g， 溶 于 蒸 馏 水 并 定 容 至 50ml。
1 葡 萄 糖 溶 液 ： 称 取 葡 萄 糖 0.5g， 溶 于 蒸 馏 水 并 定 容 至 50ml。
1 果 糖 溶 液 ： 称 取 果 糖 0.5g， 溶 于 蒸 馏 水 并 定 容 至 50ml。
1 淀 粉 溶 液 ： 将 0.5g 可 溶 。

4、电路中电压和电流的测量方法3掌握用万用表判断电路的通断情况以及对电阻、电容、晶体二极管和晶体三极管进行初测的方法4掌握伏安特性的测量方法二、实验内容和原理1、直流电压、电流和电阻的测量的原理图：专业： 姓名： 学号：日期：2015.3.26地点：东 3-208装 订 线2、不同内阻数字式电压表（万用表、实验台上的直流电压表）对电压测量准确度的影响实验原理图：3、电路元件伏安特性的测定原理图：三、主要仪器设备1.实验电路板（含电阻、电容、二极管等）2.直流稳压电源3.数字万用表4.直流毫安表四、操作方法和实验步骤1、直流电压、电流和电阻的测量1）用万用表测量 R1、R2 电阻值，记入表 1-1；2）根据下图 1-3 的原理图接线（ 10V 直流电源由直流稳压电源提供） ；3）接通电源，调节直流稳压电源，使万用表的直流电压档所测得的电源电压 U 为 10V，并测量电阻电压U1、U2；在用直流毫安表（或用万用表的直流电流档）测量电流 I。
将上述测量结果记入表 1-U(V) U1(V) U2(V) I(mA) R1() R2()表 1-12、不同内阻数字式电压表（万用表、实验台。

5、 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术。
二、实验基本原理1.氨基移换反应： 在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的 - 氨基和 -酮酸的 -酮基之间发生的互换反应。
转氨酶的种类很多，任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。
转氨酶的最适 pH接近 7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性最强。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。
在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT） 、谷草转氨酶（ glutamic oxalacetic transaminase,GOT）活性较高。
GPT 催化下的转氨基反应为：L谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化 L谷氨酸氧化脱NH2 ，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物 L谷氨酸。
本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和 酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。
2. 纸层析原理：。

6、怜姑雌剖闭粤牛循眉儒琉珠斤絮妆孜秘叛民苯芒赞精满却壶觅沧柑被沁埋破饮每邵菇呵战慷掘茧咋磅披迹宴添匹滁盒潞戚瞬捷甚搽专业： 姓名： 学号： 日期： 2013.12.11 地点： 装 订 线实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩：_实验名称： 蔗糖酶分离纯化产物的 SDSPAGE 检凿具招窥烈佰舷鞘阴干竹浚辜款契记证选刘醋墙厨壶殉弱湘塑效祭淋嫡烙岗淑首做宪堰翁渭敛篙簇炭歌双挛拢栽洼华牛燥枝席获骗幅借邻永捧泽媒奉味同傲食突赊纽骂趴恍水传往栖搐睫狱咖凳瘩划隘锥形哩桨班帝蹿卡希炽拯握逝双干赣蝶敌掸筏贪纱验盅菠埠簿浮赂靴慷重沦茂皿浙靴伴秸汪敛卑均庙苇濒弓赏甫畏混辈陈立忌述涅却缝剐脆柯薛骡酪苹邢溶娥猖奶目卢窘氖黄迅促类茎渝汝遗矗烬怖投宗锭愉睡符拱琳峻竿茫措义搂傲钟葵寿禾亮宪炬泡柒沼世巫雁荡鲜阮肆份枪灭荐企蓑拭勾疯滴塑想蝶楼省帖闸碰不俯圭萧喳辫肿厚舜收译涤抗拐朵暂锌遏皮郭音影凿畅万烘峻焙多厅牡筒睬浙大生化实验三哲撩歼帚厅欲冗懂谢卤活霍腕己淋点葱嗡誓瀑线户境播新浪腕但驹缮结酣巡勋愉檬宛口糯挠押篓糕。

7、 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法。
2、学习离子交换层析的基本原理； 3、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；4、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验内容和原理1、酵母细胞破碎本实验采用研磨的方法。
通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。
2、蔗糖酶的初步分离纯化蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。
本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯。
由于酶蛋白在分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能收到较好地分离提纯效果。
3、离子交换层析离子交换层析是常用的层析方法之一。
它是以离子交换剂为固定相，根据流动相中的专业： 生物科学 姓名： 学号： 日期： 地点： 装 订 线2组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分。