AAV病毒包装

1、第二代和第三代慢病毒包装系统将 HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由 HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1 顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。第一代包装系统中，除 vpu 之外的辅助基因都被保留下来， Env 包膜蛋白由 VSV-G 蛋白代替，应用 VSV-G 包膜的假。

2、一、包装细胞 293T 细胞的培养一、293T 细胞的冻存1. 随着传代的次数增加，293T 细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行冻存。2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。3. 倒去细胞上清液，加入 D-Hanks 液洗去残留的培养基。4. 加入 0.25%的胰酶，消化 10-20s 后倒去。5. 镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。6. 细胞计数。7.将细胞离心，1000rpm ，2min 。8. 根据计数结果加入细胞冻存液（70% 完全培养基+20%FBS+10% DMSO）重悬细胞，密度为 3106个/ml 。10. 第二天将细胞放。

3、 慢病毒载体包装构建过程 原理：慢病毒载体可以将外源基因或外源的 shRNA有效地整合到宿主染色体上， 从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、 肿瘤细胞、 内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞， 从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提 高目的基因或目的 shRNA的转。

4、慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广。

5、逆转录病毒（Retrovirus）是一类 RNA 病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒 RNA 为模板合成 cDNA，再通过 DNA 复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统，由逆转录病毒载体、辅助载体（表达病毒包装需要的蛋白质）和包装细胞系组成。逆转录病毒载体在外源基因表达、基因沉默、基因治疗、生物制药等得到广泛的应用。逆转录病毒载体主要优点：转染范围广，可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等；转入的外源基因可完全整合；对细胞感染率高；感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持。

6、慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广。

7、ITR缺陷对AAV病毒包装与感染力的影响*曹佐武1)* 林羿2) 程龙球2) 邹飞雁1)(1)暨南大学生殖免疫研究所，广州 510632，2)暨南大学生命科学技术学院，广州 510632)摘要 腺相关病毒(AAV)是一种复制缺陷性DNA病毒，其基因组两端的两个倒转末端重复序列(ITR)是rAAV包装复制所必需的自身结构ITR容易缺失并影响病毒颗粒的包装和感染力比较两个ITR完整的和一端ITR缺失的AAV病毒发现，一端ITR缺失的AAV载体质粒包装病毒的效率明显比ITR完整的质粒低用这两种AAV病毒感染293细胞、HeLa细胞和小细胞肺癌细胞NCIH446细胞，显示两个ITR完整的AAV病毒感染。

8、A Protocol for AAV vector production and purificationHiroaki Mizukami, Takashi Okada, Takashi Matsushita, and Keiya OzawaDivision of Genetic Therapeutics, Center for Molecular Medicine,Jichi Medical School1. IntroductionThe protocol describe at below is typical of methods that are used topropagate and purify AAV vectors for experiments both in vitro and in vivo.2. Principles of the Triple Plasmid Transfection SystemThe minimum regions in helper adenovirus that mediate the replication ofthe AAV v。

9、AAV病毒包装 摘要 一 AAV 293细胞的冻存 二 AAV 293 细胞的传代 三 AAV 293 细胞的复苏 四 AAV包装和浓缩 一 AAV 293细胞的冻存 随着传代的次数增加 AAV 293细胞会出现生长状态下降 突变等 为了防止此类现象的出现 我们需要在开始就对细胞进行大量冻存 以保证实验的稳定性和持续性 在细胞对数生长期进行冻存 增加细胞复苏成活率 1 去掉 细胞培养上清液 加入P。

10、AAV 病毒包装摘要 : (一) AAV-293 细胞的冻存 (二)AAV-293 细胞的传代 (三)AAV-293 细胞的复苏 (四)AAV包装和浓缩(一) AAV-293 细胞的冻存随着传代的次数增加，AAV-293 细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。1、去掉细胞培养上清液，加入 PBS 洗去残留的培养基;2、加入 0.25%的胰酶，消化 12min 后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。3、细胞。