1、实验6 植物种子生活力的快速测定,种子生活力：指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。,实验目的 实验原理 实验材料与设备 实验步骤 数据处理与结果分析 注意事项 思考题,实验目的,了解种子生活力快速测定的方法理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理,TTC法,凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化-还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚染色
2、的部位或深浅来鉴定种子的生活力。,实验原理,TTC还原反应如下：,氯化三苯基四氮唑 三苯甲腙,活种子,死种子,BTB溴麝香草酚蓝法,活细胞呼吸释放CO2， CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变； BTB变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。,染料染色法,有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。所以可根据种子胚部是否被染
3、色来判断种子的生命力。,活种子,死种子,材料、设备及试剂,（一）材料：小麦种子 （二）仪器设备：1. 小烧杯；2. 刀片；3. 镊子；4. 温箱 （三）试剂：1. 0.12-0.5TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH70.5，不宜久藏，应现用现配）。2. 0.02-0.2靛红溶液或5红墨水（酸性大红G）3. BTB溶胶,BTB法,煮沸的1BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培养皿（1/3皿）； 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软不硬)； 将培养皿置于35 下培养 1hr，对光观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。,实验步骤,TTC/红墨水染色法,将
4、种子用温水（30）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（30-35）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。,不同方法测定种子生活力统计表,数据记录与处理,沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 溶胶倒至培养皿1/3处； 取完好小麦种子，将种胚向下插入BTB琼脂胶。,注意事项,思考题,TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据有何不同?,
