1、中国NMO/MS诊断标记的筛选与评价,开题报告,开题报告,多发性硬化(Multiple Sclerosis, MS)是一种炎症介导的中枢神经系统自身免疫性疾病，主要涉及细胞免疫。,视神经脊髓炎 (Neuromyelitis optica (Devics disease, NMO)也是一种中枢神经系统的炎症性脱髓鞘性综合症，特点主要是严重的视力损害和脊髓损害，在早期被认为不累及大脑，它与体液紊乱有关。,临床孤立综合征(CIS) 排除其他疾病的情况下,中枢神经系统脱髓鞘事件的急性或亚急性单次发作,持续时间在24h以上。CIS患者临床表现为脊髓、脑干或视神经受累,但是在疾病的时间演变和空间进展方面尚
2、不能满足多发性硬化的诊断标准。CIS患者可以有MS、视神经脊髓炎、横断性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎等多种转归。,一、概念,鉴别的分界点在那里？,开题报告,如何从早期预估它的转归,CIS,NMO,MS,？,二、研究背景,二、研究背景,开题报告,如何区分？,诊断试验,诊断标准,新的诊断标记,二分类数据,灵敏度,特异度, 似然比,优势比（包括集群二分类）,有序数据连续数据,经验ROC, 拟合ROC,ROC面积, 固定FPR面积等,二、研究背景,开题报告,Sen= P(T+ |D+ )=TP (TP+ FN) =TPR Spe= P(T- |D- ) =TN (FP+TN) J = Sen+Spe-1
3、=TPR-FPRLR+ =TPR/ FPR = Sen/ (1- Spe)LR- = (1- TPR)/ (1- FPR) = (1- Sen) /Spe,二、研究背景,开题报告,中国NMO/MS的诊断标准或西方国家的诊断标准是否符合中国的患者,？,现有的诊断指标系统评价,NMO-IgG的系统评价,新型诊断标记物筛选与评价,缺乏,X水平区分MS与NMO的ROC曲线,二、研究背景,开题报告,1. NMO-IgG可能是区分MS与NMO的高特异性生物标记 2.通过蛋白质组学筛选新型诊断标记物可能有助于进一步 区分MS与NMO，提高二者的诊断准确率,新型诊断标记物筛选,根据单项试验的敏感度、特异度和R
4、OC曲线等指标，同时进行多项试验联合应用、新旧指标综合分析与评估，优化中国MS或NMO患者的诊断与鉴别诊断方案，从而有助于推动我国MS或NMO研究的进展。,（1）中国NMO-IgG血清学的流行病学,临床开展NMO-IgG检测意义,开题报告,（2）了解NMO-IgG对中国NMO/MS的区分作用。,（3）对确诊的首次的MS/NMO或CIS的患者NMO-IgG情况进行前瞻性研究，追踪疾病的转归自然病史的追踪（阳性，阴性，不同滴度等亚组分析追踪转归与预后（生存分析等）。 （4）治疗追踪（能不能作为end-point评价指标）等。,二、研究背景,开题报告,前瞻性研究,二、研究背景,开题报告,1. NMO
5、-IgG可能是区分MS与NMO的高特异性生物标记 2.通过蛋白质组学筛选新型诊断标记物可能有助于进一步 区分MS与NMO，提高二者的诊断准确率,新型诊断标记物筛选,根据单项试验的敏感度、特异度和ROC曲线等指标，同时进行多项试验联合应用、新旧指标综合分析与评估，优化中国MS或NMO患者的诊断与鉴别诊断方案，从而有助于推动我国MS或NMO研究的进展。,二、研究背景,开题报告,2.通过蛋白质组学筛选新型诊断标记物可能有助于进一步区分 MS与NMO，提高二者的诊断准确率,二、研究背景,开题报告,用于生物标记的体液,二、研究背景,开题报告,二、研究背景,开题报告,CSF蛋白组学的一些文献,二、研究背景
6、,开题报告,但是，毕竟蛋白组学是近年新兴的学科，不同于基因组学，它反映了转录后蛋白装配、修饰等过程，其技术亦日新月异，仍是将来发现疾病标记的重要方法。而在中国，MS患者的脑脊液蛋白组学的研究尚未深入，针对MS、NMO、CIS或治疗前后亚群的蛋白质分析也是目前亟待回答的问题。当然诊断的标记如能筛选出，同样仍需要我们从灵敏度、特异度、一致率、优势比、Youden 指数、ROC曲线下面积进行评价它的诊断确准度。,正如许多的生物标记的筛选一样，候选的标记结果往往得不出肯定的结论，而且难于重复，蛋白质组学在上述MS的脑脊液研究中结果亦是如此。,三、研究目的、意义,开题报告,课题设想、目的、意义,首先回顾
7、性的分析现有的诊断标记的诊断准确度，探讨旧方法对诊断的贡献值及不足之处，为新方法的开展与评估提供理论的依据,其次检测我国MS,NMO,CIS及对照组NMO-IgG抗体的诊断确准度指标，为其临床应用打下基础。,再次,通过蛋白组学的方法筛选对诊断MS,NMO有鉴别意义的生物标记,并评估其诊断的准确度。,最后,进行多项试验指标的联合应用,新旧指标进行综合分析，优化诊断MS或NMO的诊断方案。,四、研究内容,开题报告,（1）回顾性抽样计划研究：回顾在本课题组确诊的“多发性硬化，视神经脊髓炎”和对照病例或健康对照的资料，分析常用指标的诊断准确度，确定指标的最佳决策界值。,（2）回顾性+前瞻性研究血清NM
8、O-IgG诊断价值：a. 按确诊的MS、NMO、其它神经疾病患者和健康对照分组，检测患者血清的NMO-IgG，评价试验的准确度，同时对MS和NMO组患者进行亚群分组（如治疗前后等），评价试验的诊断准确度。b.CIS患者检测NMO-IgG，评价试验的诊断准确度；随访追踪1年，观察血清阳性与阴性患者的临床转归情况，并重新评估。,开题报告,四、研究内容,（3）新型的诊断标记的筛选与评价：a.收集MS、NMO、其它神经疾病患者和非神经系统疾病患对照组的脑脊液，2D电泳、质谱技术和生物信息学方法筛选可能诊断蛋白标记。b.免疫分子生物学方法反证诊断标记的在不同分组中的分布情况，评价诊断标记的诊断准确度。c
9、. CIS患者检测该种标记物，评价试验的诊断准确度；随访追踪1年，观察脑脊液阳性与阴性患者的临床转归情况，并重新评估。,（4）多元回归分析联合多种诊断标记的诊断准确度，决定最佳决策界值，优化临床诊断方案。,二、研究背景,开题报告,五、关键问题与技术,（1）NMO-IgG的检测 原间接免疫荧光法过程繁杂，是国内难以开展该项检测的一个重要原因。由于目前已发展多项技术对该抗体进行检测，尤其是ELISA方法，简单实用，因此有望可解决这问题。,（2）蛋白组学对诊断标记的筛选 蛋白质组学的整个过程受影响的因素较大，而目前对体液低丰度蛋白的筛选存在一定的难度，有可能难以筛选到具有一定特异性标记物。蛋白质组学
10、的技术日进千里，利用先进的分离筛选技术可能有助于上述缺点的改善。,（3）二分度资料的分析 如何转为有序数据进行ROC曲线分析。（4）其它：金标准,开题报告,主要研究方法,确定入选病例组的“金标准”,SAS，SPSS等软件对指标进行计算与评估,间接荧光免疫分析NMO-IgG抗体（滴度）,蛋白组质学分析(双向电泳,质谱,信息学等）,六、研究方案,六、研究方案,开题报告,技术路线,第一部分回顾分析现有指标的诊断准确度,六、研究方案,开题报告,技术路线,第二部分NMO-IgG抗体对中国NMO/MS诊断的准确度研究,六、研究方案,开题报告,技术路线,第三部分蛋白质组学筛选生物标记及评估,六、研究方案,开
11、题报告,技术路线,第三部分蛋白质组学筛选生物标记及评估,六、研究方案,开题报告,技术路线,第三部分蛋白质组学筛选生物标记及评估,七、可行性分析,开题报告,（1）研究组目前已积累MS/NMO数百例，有完整的临床资料与分析标本（脑脊液，血清）。,（2）研究组一直从事MS和NMO的病因学、发病机制、临床诊断与治疗等研究工作，具在坚实的工作基础。,（3）研究所用的技术成熟，06届师兄已开展部分工作。,（4）本项目符合中山大学5010资助计划，有研究资金的基础。,七、研究进度,开题报告,2008年6月-2008年7月：查阅资料，研究计划与综述,2008年7月：开题报告。,2008年7月-2008年12月：（ 1）收集临床资料；（2）整理现有的血清与脑脊液标本，收集新的标本并进行分组。（3）开展部分实验,2009年1月？：（1）完成实验。（2）综合整理，分析实验结果，撰写论文,参考文献（略）,
