1、实验六 细菌的革兰氏染色,基础生物学实验（一）,一、实验目的1、初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染 色法步骤,二、实验内容1、制作细菌染色装片2、进行革兰氏染色法场操作,三、实验材料和用具金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（E.coli）菌液，待测菌菌液12种。革兰氏染色液（结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95乙醇、石炭酸复红液等）、香柏油、二甲苯。显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。,四、操作步骤 （一）制片 1、涂菌 用无菌操作方法从试管种沾取菌液一环，用接种环载洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后奖接种环火焰灭菌。
2、 2、干燥 于空气种自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥（温度不宜过高）。 3、固定 目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止军体烧焦、变形。此制片可用于染色。,（二）染色 1、初染 于制片上滴加结晶紫染液 ，染 1min后，用水洗去剩余染料。 2、媒染 滴加卢戈氏碘液， 1min后水洗。 3、脱色 滴加95乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止（根据涂片之厚薄需时30s至1min)，水洗。 4、复染 滴加石炭酸复红液复染1min，水洗。 5、用滤纸吸干，油镜镜检。,（三）结果革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。（四）检测未知菌用以上方法对未知菌进行革兰氏染色，并绘图、记录染色结果。,四、注意事项1、涂片务求均匀，切忌过厚。2、在染色过程中，不可使染液干涸。3、脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使 阳性菌被染成阴性菌。4、老龄菌因体内核酸减少，会使阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。,五、思考与问题1、涂片后为什么要进行固定？固定时应注意什么？2、什么是革兰氏染色法？染色过程应注意什么？3、试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。,
