1、李氏杆菌,李斯特菌的感染最近呈上升趋势，在美国，报告有个感染例，然而，在年，这个数字却达到了。根据记载，第一例确定由食品引起的李斯特菌感染在年，发生在加拿大的一次沙拉制品的较大规模的污染事件。此病首先由Murray等在家兔中发现，以后相继在野生啮齿动物、人、绵羊、牛、猪中发现。本病分布于世界各地，尤以北纬34-350以北的北方各国发生较多。,生物学特性,诊断,01,02,致病因子,03,李氏杆菌,该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5m1.0-2.0m,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈
2、丝状及革兰氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。,革兰氏阳性短球杆菌，无芽胞、荚膜，有周鞭毛，多单在，有时排成V 形或栅状。,李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。,目前国际上公认的李斯特菌共有七个菌株：单核细胞增生李斯特(L.monocytohenes) 绵羊李斯特菌 (L.iuanuii) 英诺克李斯特菌 (L.innocua) 威尔斯李斯特菌 (L.welshimeri) 西尔李斯特菌 (L.seeligeri) 格氏李斯特菌 (L.grayi) 默氏 李 斯 特 菌 (L.murrayi)
3、,李氏杆菌进入人体是否得病与菌量和宿主的年龄免疫状态有关，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能，因此，易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人，免疫功能缺陷者。李氏杆菌病是由产单核细胞李氏杆菌引起的人和多种家畜、家禽、啮齿动物共患的散发性传染病。家畜主要脑膜脑炎、败血症（妊娠母畜流产），家禽、啮齿动物表现为坏死性肝炎、心肌炎，有的还可出现单核细胞增多。,1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞； 2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解； 3、溶血素，即李斯特杆菌溶血素O，可以从培
4、养物上清液中获得，为SH活化的细胞溶素，有和两种，为毒力因子。,脑及脑膜充血出血,化脓性骨膜骨髓炎,李氏杆菌病病变,1,4,传统的细菌分离鉴定,免疫学检测,分子生物学检测,2,3,自动微生物分析系统检测,诊断方法,1,传统的细菌分离鉴定,检样 25g（ml）样品+LB1增菌液225ml，均质,301，24h,0.1ml+10mlLB2增菌液,301，18-24h,李斯特氏菌显色培养基,PALCAM琼脂,361，18-24h,接种木糖、鼠李糖，361，24h；同时于TSA YE平板上划线纯化，301，24h-48h,木糖，鼠李糖+,鉴定（染色镜检，动力试验，生化鉴定，溶血试验，协同溶血试验，小鼠
5、毒力试验）,结果,溶血试验,生化鉴定,动力试验,染色镜检,染色镜检,李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为（0.4 m0.5 m）（0.5 m2.0 m） ；用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。,穿刺接种半固体动力培养基，室温（2025）培养25天，逐日观察。有动力。自穿刺线向四周蔓延生长，呈典型伞状生长，底部为弯月牙状。,动力试验,过氧化氢酶：过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解成水和氧。菌落平板1滴3的过氧化氢。,生化试验,溶血试验,在血琼脂平板上菌落周围有狭窄的溶血环，此溶血常于菌落刮去后才见,尿素酶（Urease）试验,有些细菌能产生尿素酶
6、，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。,1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性,甲基红试验,V-P试验,接种0.5%糖类发酵管。35培养2448h葡萄糖：阳性麦芽糖：阳性七叶苷：阳性甘露醇：阴性鼠李糖：阳性木 糖：阴性,生化反应结果,2,免疫磁珠捕集法,100ul浓缩免疫磁珠+2ml增菌液,室温震荡2h,分离磁珠与液体,清洗两次,加0.1ml捕获液收集磁珠,涂布PLCAM平板,372h,372h,无可疑菌落,（阴）,有可疑菌落,（阳）,用膜粘取菌落,加一抗、二抗及显色剂,无紫色斑点,（阴）,有紫色斑点（阳）,鼠李糖发酵实验和溶血实验均为阳性,单增李氏菌,国标检测,
7、分子生物学检测,PCR法,单核细胞增多性李氏杆菌的基因含有保守Hind 切点上的743bp的片段，依据此特点设计一对引物对其进行PCR扩增， 表现出极好的单增李斯特菌种特异性。,PCR法,Primer 上游 5-CTGAATTCGGCTGTTACTAAAGAGCAGTTGC-3,Primer 下游5-ATGGATCCTTAGCCCCAGATGGAGATATTTCTA-3,PCR要素,模板：经处理的菌液,引物：15-40 bp合成的寡核苷酸,DNA聚合酶：耐热的DNA聚合酶,底物：四种脱氧三磷酸核苷, Mg2+： DNA聚合酶的激活剂,PCR的指数扩增（2n）,引物,延伸,延伸,5,5,3,3,
8、变性、退火,变性、退火,特异的DNA片段,3,自动微生物分析系统检测,全自动荧光酶免疫分析仪(VIDAS),样品25g于225mlLB肉汤,30，24h,取上述1mlLB肉汤于10mlFRASER肉汤,30，24h,取FRASER肉汤，采用自动荧光酶免疫分析仪检测,单核细胞增生李斯特菌,国标检测,方法优点：检验周期短，准确度和特异性高,1搞好平时饲养管理，特别是青贮饲料、灭鼠，驱除体外寄生虫； 2发生时，应全群检疫，将病畜隔离治疗 ，彻底消毒污染的场舍、用具等； 3治疗：本病目前尚未有特效治疗药物，可早期大量应用抗菌素，或与磺胺类药物联合应用，可收到一定的效果。脑炎型一般治疗无效。,李氏杆菌病的防治,Thank You!,
