1、专题2 微生物的培养与应用,一、培养基 1概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出的供其_的营养基质。 2营养构成 一般都含有水、_、氮源、_、生长因子，还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及O2的要求。,营养物质,生长繁殖,碳源,无机盐,3培养基的类型、用途,二、无菌技术 1消毒 (1)特点：使用较为_的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和_)。 (2)常用方法：煮沸消毒法、_、物理或化学药剂消毒法。 2灭菌 (1)特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外_包括芽孢和孢子。 (2)常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、_灭菌。,温和,孢子,巴氏消毒法,所有的微
2、生物,高压蒸汽,消毒与灭菌的比较,三、微生物培养的基本技术 1配制培养基： 称量混合溶化调pH分装包扎。 2灭菌：加水加培养基密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)。 3接种 (1)接种过程：洗净双手点燃酒精灯接种贴标签。 (2)接种工具：包括_、涂布器。 (3)接种方法：平板划线法、_法。 (4)注意事项：整个操作过程都要在_旁完成。 4培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养。,接种环,稀释涂布平板,酒精灯火焰,四、菌种保藏 1临时保藏 (1)操作： 采用固体斜面培养基，菌落长成后，放入_冰箱中保藏，以后每36个月，转移一次新的培养基。 (2)缺点：保存时间不长，菌种易被_或产生变异. 2
3、长期保存法：甘油管藏法，放在20 下保存. 五、土壤中分解尿素细菌的分离与计数 1菌种筛选 (1)培养基：_。 (2)特点：_是唯一氮源。,4 ,污染,选择培养基,尿素,2.统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法 方法：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。 缺点：不能区分死菌和活菌。(2)间接计数法(活菌计数法) 方法：一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能测出样品中大约含有多少活菌。,计算公式：每克样品中的菌落数(CV)M，C表示某一稀释度下平板上生长的平均
4、菌落数，V表示涂布平板时所用稀释液的体积mL，M表示稀释倍数。 3设置对照 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,六、分解纤维素的微生物的分离纤维素分解菌的筛选 1土壤取样：选择富含纤维素的环境。 2将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 (1)制备鉴别培养基：主要碳源CMCNa。 (2)刚果红染色法 先培养_，再加入刚果红进行颜色反应。 _时加入刚果红。 3进一步鉴定 (1)为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。 (2)测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的_进行定量测定。,微生物,倒平板,葡萄糖,即时应用 (2011
5、年湘潭高三第一次模拟)关于灭菌和消毒的理解不正确的是( ) A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质是相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等 解析：选B。灭菌是指杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而消毒仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。,菌株筛选原理的比较,几种微生物的分离 （1）分离分解尿素的细菌：以尿素为唯一氮源的选择培养基培养。 （2）分离分解纤维素的细菌：刚果红染色法。 （3）分离分解塑料的细菌：从富含塑料的土壤中筛选。,例1、下图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回
6、答有关问题：,巩固达标,(1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明_。 (2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作。 纤维素粉 NaNO3 Na2HPO47H2O KH2PO45 g 1 g 1.2 g 0.9 g MgSO47H2O KCl 酵母膏、水解酪素 05 g 0.5g 适量 如果将其中的纤维素粉换成_，菌落数_，即可说明选择培养基的作用。,根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找,明显多于选择培养基上的菌落数,葡萄糖_,(3)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用_法，原因是_
7、 _。 【尝试解答】 (1)根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 (2)葡萄糖 明显多于选择培养基上的菌落数 (3)稀释涂布平板 平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌数,(2009年高考宁夏卷)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 (2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。,(3)若用稀释涂布平
8、板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。 (4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。 (5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。 (6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。,【尝试解答】 (1)温度 酸碱度 易培养 生活周期短 (2)灭菌 消毒 损伤DNA的结构 (3)比例合适 (4)鉴定(或分类) (5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生 (6)灭菌,
