1、实验五 维生素 C 的含量测定-2,6-二氯酚靛酚法(3 课时)一、目的1 学习和掌握用 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。2 了解维生素 C 的生物学意义。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素 C 能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素 C 时则会出现坏血病，因而维生素 C 又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。2,
2、6-二氯酚靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使 2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如下：当用 2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的 2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的 2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。三、实验材料、主要仪器和试剂。2仪器CCCCCHCH2OHOOHOHHOH O N O-OClClN OHOClCl+ OH- H+2,6- CCCCCHCH2OHOOOHO
3、H O N OHOHClCl H2,6- +（1）天平（2）组织捣碎机（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）碱式滴定管（10mL）3试剂（1）2草酸（2）1草酸（3）标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取 10.0mg 抗坏血酸，用 1草酸溶液溶解并定容至 100mL。临用现配。（4）0.05的 2,6-二氯酚靛酚溶液： 50mg 2,6-二氯酚靛酚溶于 30mL 含 52mg 碳酸氢钠（A.R ）的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至 5 00mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4保存一周有效。滴定样品前用标准抗坏血酸标定。四、操作步骤12,6
4、-二氯酚靛酚溶液的标定：准确吸取 4.0mL 抗坏血酸标准液（含 0.4mg 抗坏血酸）于 100mL 锥形瓶中，加 16mL 1草酸溶液，用 2,6-二氯酚靛酚滴至淡红色（ 15S 内不褪色即为终点） 。记录所用染料溶液的体积（mL） ，计算出 1mL 染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（mg） （记作 T） 。2实验材料取新鲜水果（蔬菜）样品 50g，加 50ml 2草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。称取10g 匀浆，移入 50mL 容量瓶，用 2草酸定容至刻度，摇匀后静置备用3样品滴定：准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份 10.0mL，分别放入两个 100mL 锥形瓶中，按上面的操作进
5、行滴定并记录所用染料溶液体（mL） 。五、结果计算取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算 100g 样品中还原型抗坏血酸的含量：VTGA抗坏血酸含量（ mg/100 g 样品）WG1A1 100式中：V 滴定样品提取液消耗染料平均值（ mL）T 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸 mg 数G 匀浆总重量（ g）G1 制备提取液取用匀浆重量（ g）A 样品提取液定容体积（ mL）A1 滴定时吸取样品提取液体积（ mL）W 样品重量（g）六、附 注（1）样品提取液定容时若泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。（2）市售 2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定 0.4mg 抗坏血酸消耗 2mL 左右的染
6、料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。（3）样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。（4）滴定过程宜迅速，一般不超过 2min。样品滴定消耗染料 14mL 为宜，如果超出此范围，应增加或减少样品提取液用量。像番茄、柑桔等维生素 C 含量高的试材，可称取 5g 样品，加少许 2%草酸研磨，定容到 50mL，再离心或过滤；吸取 20mL 两份，分别滴定，记录消耗的染料量。按下式计算维生素 C 含量。VTA维生素 C 含量（ mg/100 g 样品）WA1 100式中：V 滴定样品提取液消耗染料平均值（ mL）T 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸 mg 数A
7、 样品提取液定容体积（ 50mL）A1 滴定时吸取样品提取液体积（ 20mL）W 样品重量（5g）七、思考题1 该法测定抗坏血酸有何不足？2 用 2%草酸提取样品的目的是什么？参考答案1用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，可以一次测定大量的样品。但有下述缺点：第一，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，可预先用白陶土脱色，或加入 23ml 二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。1 用 2草酸制备样品提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸为氧化型而无法滴定。如果样品中有较多亚铁离子（Fe 2 ）时，亦会使染料还原而影响测定，这时应改为 8乙酸制备样品提取液。
