1、维生素C片剂的含量测定 及杂质检查方法,碘量法,其他,比色法,高效液相色谱法,光度法,含 量 测 定,杂 质 检 查,原 理,碘量法,维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。根据消耗碘滴定液的体积，即可计算维生素C的含量。一分子维生素C与一分子的碘反应。,1,2,3,方 法,取维生素C片约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100mL与冰醋酸10mL使溶解。,加淀粉指示液1mL，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30s内不褪。,每1mL碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的维生素C。,酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢，但样品溶于稀酸后仍须立即进行测定
2、。,加新沸过的冷水目的是为减少水中溶解的氧对测定的影响。,滴定前要进行必要的前处理，片剂溶解后取续滤液测定 ，注射液测定时要加2mL丙酮 。,0,原 理,比色法,固红Al盐与维生素C在酸性介质中反应。在碱性介质中即生成一种蓝色物质。该物质在630nm处有最大吸收。而固红Al盐试液与维生素C溶液在该范围内均没有吸收峰。,所需试剂,固红Al盐试液,维生素C标准溶液,维生素C样品液,0.25水溶液(临用新配)。,取维生素C标准品适量，用0.5的柠檬酸水溶液配制成5250g/mL的维生素C溶液。,精密取含维生素C的样品适量，用0.5的柠檬酸水溶液配制成约20g/mL的溶液备用。,1,2,3,方 法,在
3、10mL容量瓶中，准确取维生素C标准液(或样品液)1mL，固红Al盐试液1mL和10氢氧化钠溶液1mL，加水稀释至刻度。,以同法空白为参比，在630nm处测定吸收度。,分别取不同浓度的维生素C标准液，以浓度和吸光度做一标准曲线，根据标准曲线算出样品液维生素C含量。,0,原 理,紫外分光光 度法（一）,维生素C在稀硫酸溶液中,在245nm的波长处有最大吸收,维生素C水溶液在pH56之间稳定。选择0.005 molL- 1的硫酸溶液(pH5.2) 作为溶剂,245nm波长为测定波长。在0.005 molL- 1硫酸溶液中E1cm1%245=560。,所需试剂,对照品溶液,精密称取105 干燥至恒重
4、的维生素C对照品50mg 置100ml量瓶中,加0.005 molL-1硫酸溶液（EDTA醋酸-醋酸钠缓冲液）制成0.5gL-1对照品溶液。,方 法,精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml ,分别置100ml量瓶中,用0.005 molL-1硫酸溶液稀释至刻度,摇匀。,以0.005 molL-1硫酸溶液为空白,在245nm波长处测定吸收度,以吸收度对浓度作回归曲线。,取供试品的续滤液2.0 ml 置100 ml 量瓶中,加0.005 molL-1硫酸溶液至刻度,摇匀,在245nm波长处测定吸收度,按E1cm1%560计算，根据标准曲线计算样品溶液含量。,原 理,紫外分光光
5、 度法（二）,维生素C在中性或碱性溶液中,在265nm的波长处有最大吸收。体系中加入染料甲基紫，吸收峰有明显的降低 ，用该法测定维生素C的含量操作简便，快速准确。,方 法,阻抑光度法,FIA差示光度法,在H2SO4-KBr介质中，维生素C对碘酸钾氧化氨基苯磺酸黄的退色反应有抑制作用，且抑制作用的强弱与维生素C的含量之间呈良好的线性关系，基于这一点建立了检测食物中维生素C的阻抑光度法。,利用差示技术与流动注射分析相结合，根据维生素能与1，10-二氮杂菲-Fe混合液反应，生成有色的1，10-二氮杂菲-Fe络合物在510nm处有最大吸收的特点，对维生素C制剂中维生素C的含量进行测定。,0,原 理,高
6、效液 相色谱法,与其它高效液相色谱法测定物质含量一致，都是利用各组成成分相对保留时间的不同及锋面积的计算来测定某一主要成份的含量。,色谱条件,色谱柱: Inertsil ODS - 3,4.6250mm( GL Sciences hc )。 流动相:己烷磺酸钠溶液（取0.94g己烷磺酸钠置1000mL量瓶中,加冰醋酸10mL,加水稀释至刻度,摇匀）-甲醇 64 ，pH =3.1。 流速: 0.8mL/min 柱温:室温 检测波长:245nm 进样量：10L 测定波长的选择：取维生素C对照品适量,加甲醇稀释成0.05mg/mL的溶液,在200400nm波长扫描,结果在245nm波长处有最大吸收。
7、故以 245nm为检测波长。,方 法,对照品溶液的配制,供试品溶液的配制,精密称取维生素C对照品0.0250g,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10mL,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。,取维生素C,研细,精密称取适量约相当于维生素C0.025g,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10mL,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得供试品溶液。,分别精密量取对照品适量,加甲醇稀释成0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.0375mg/mL、0.05 mg/mL、0.0625mg/mL、0
8、.075mg/mL、0.0875mg/mL的标准溶液进样量为10L。以标准浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程。,标准曲线的绘制,方 法,精密度试验,稳定性试验,重复性试验,精密量取对照品溶液10L,连续进样5次,测定峰面积值。计算峰面积相对标准偏差RSD，以确定本法精密度是否良好。,取同一份供试品溶液,分别于 0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h进样10L,记录色谱图。计算相对标准偏差RSD的值 ,以确定供试品溶液在3h内是否基本稳定。,取维生素C片样品6份,分别按供试品溶液制备的方法操作,按上述的色谱条件测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算维生素C含量。计算相对标准偏差RSD,以
9、确定本方法是否有良好的重现性。,方 法,空白试验,加样回收试验,样品的测定,按处方比例和工艺, 制备不含维生素C的空白样品,按样品测定方法制备,得空白溶液。（通过进样分析试验可知,维生素C片中其他成分对测定无干扰。),精密称取已知含量的维生素C片样品6份,样品量约为供试品溶液制备方法的一半量,精密加入维生素C对照品,分别按上述供试品溶液制备的方法操作,按上述拟定的色谱条件测定记录色谱图,并计算加样回收率。,按上述方法测定维生素C片的含量。,0,薄层扫描法,维生素C 具有较强还原性, 可使蓝色染料2,6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺, 而本身被氧化成去氧抗坏血酸。此反应为维生素C的特征反应
10、。将不同浓度的维生素C标准溶液与待测液点样于同一为2, 6-二氯靛酚钠所饱和的试纸上，扫描测定峰面积，由标准曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。,各种方法比较,0,杂质检查,溶液的颜色：取本品细粉适量（相当于维生素C1.0g）加水20ml，振摇使维生素C溶解，滤过，滤液照紫外分光光度法，在440nm的波长处测定吸光度，不得过0.07。其它杂质检查方法依药典进行。,参考资料,赵建峰.HPLC法测定维生素C口含片中维生素C的含量.上海医药J,2006,27(3):115-116 吕长淮.紫外分光光度法测定维生素C片的含量.安徽医药J，2004，7（2）：146 郭永利.比色法测定维生素C含量.医学信息J,1996,4:20-21 中国药典（第二部）.2005版，670 刘到义，李淑凡等.FIA测定维生素C的含量.中国生化药物杂志J，1996，17（6）：259261 王迎春，周学琴.薄层扫描法测定维生素C 片剂中维生素C 的含量.Journal of Mathematical MedicineJ，2001，5（21）：466,Thank you!,
