1、编号：ZQCDC/ZY02作 业 指 导 书第 1 页 共 1 页第 1 次修订公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定操作规程 实施日期：2011 年 5 月 1 日1、目的依据 GB/T18204.22000 公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。2、适用范围本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。3、责任使 操 作 者 熟 悉 此 规 程 ， 并 在 具 体 样 品 检 验 中 严 格 遵 照 操 作 ， 确 保 检 测 结 果 准 确 性 。4、内容： 4.1 定义：大肠菌群 指一群在 37、24h 能发酵乳糖、产酸、产
2、气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。4.2 仪器：见 GB/T 18204.32000 中第 3 章。4.3 培养基和试剂：见 GB/T 18204.32000 中第 4 章。4.4 检验程序：见 GB/T 18204.32000 中第 5 章。4.5 操作步骤4.5.1 采样方法4.5.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 4.5.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。4.5.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润 5cm5cm 大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、
3、床上卧具规定部位和面积范围内，约 30s 后取下，置于无菌塑料袋内。4.5.2 检验方法4.5.2.1 发酵法4.5.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置 361培养箱内培养 24h。4.5.2.1.2 观察是否产算、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。4.5.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置 361培养箱培养 1824h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。4.5.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落 12 个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，只
4、361培养 24h。4.5.3 纸片法将已采样的纸片置 361培养箱内培养 1618 h，观察结果。4.6 结果报告见 GB/T18204.32000 中第 7 章。编号：ZQCDC/ZY03作 业 指 导 书第 1 页 共 2 页公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物 第 1 次修订检验方法细菌总数测定操作规程 实施日期：2011 年 5 月 1 日1、目的：公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定。2、适用范围：本标准适用于公共场所浴盆、脸（脚）盆细菌总数的测定。3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容4.1 定义细菌总数：指公共场所浴盆
5、、脸（脚）盆经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH 值、需氧性质等） ，25cm 2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公共场所浴盆、脸（脚）盆被污染程度的标志，也可以为公共场所浴盆、脸（脚）盆消毒效果的判定和评价提供依据。4.2 仪器见 GB/T18204.12000 中第四章4.3 培养基和试剂4.3.1 营养琼脂培养基见 GB/T18204.12000 中 4.14.3.2 无菌生理盐水：分装 125mL 瓶供浴盆采样，50mL 瓶供脸（脚）盆采样。4.4 采样4.4.
6、1 采样必须在无菌操作下进行，采样用具应高压灭菌 12120 分钟。4.4.2 采样部位，选择在盆内侧壁二分之一至三分之一高度采样。4.4.3 采样布点，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布点，脸（脚）盆可在相对两侧壁布点。4.4.4 采样方法4.4.4.1 涂抹法：用侵有无菌生理盐水的棉拭子在规格板（5 cm5 cm）内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉试子，剪去手接触部位后，将涂抹浴盆的 5 个棉试子一并放入 125mL 生理盐水烧瓶中，涂抹脸（脚）盆的 2 个棉试子一并放入 50生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在旋涡振荡器上振荡 1 分钟，每毫升的菌浓度相当于 1 平方厘米的菌量。4.4.4.2 斑
7、贴法：将 5cm5cm 无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水 1mL 片（吸满为止） ，以无菌操作将滤纸片贴到采样部位，1 分钟后按序取下，将贴浴盆的 5 片滤纸一并放入 125,mL 生理盐 1 分钟，每毫升的菌尝试相当于 1 平方厘米的菌量。4.5 检验方法4.5.1 用 1mL 灭菌吸管吸取样品 1mL,加到灭菌平皿内，同样再吸 1mL 加到编号：ZQCDC/ZY03作 业 指 导 书第 2 页 共 2 页公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物 第 1 次修订编号：ZQCDC/ZY04作 业 指 导 书第 1 页 共 3 页公共场所茶具微生物检验方法细菌 第 1 次修订检验方法细菌总数测定
8、操作规程 实施日期：2011 年 5 月 1 日一平皿内。4.5.2 如污染严重，可作 10 倍递增稀释，每递增稀释一次，换一支无菌吸客，每个稀释度接种两个平皿。4.5.3 稀释液移入平皿后，应及时将冷却至 46的营养琼脂培养基（可放置 461水浴保温）注入平皿约 15mL，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置 361温箱内培养 48h.4.6 菌落计数方法见 GB/T18204.22000 中第 8 章。浴盆、脸（脚）的细菌数按式（1）计算：m=25k.n式中：m细菌总数，cfu/25;k稀释倍数；n平均菌落数；9 菌落计数的报告见 GB/T18204.22000 中的第 9 章
9、。总数测定操作规程 实施日期：2011 年 5 月 1 日1、目的：公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定。2、适用范围：本标准适用于公共场所茶具细菌总数的测定。3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容4.1 定义细菌总数：指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH 值、需氧性质等） ，1cm 2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公用茶具被污染程度的标志，也可以为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据。4.2 仪器高压
10、蒸汽灭菌器。干热灭菌箱。培养箱：361。冰箱。电炉。天平。灭菌。灭菌平皿：直径 9cm.灭菌刻度吸管：1mL,10mL灭菌棉拭子。灭菌剪刀。放大镜。PH 计或精密 PH 试纸。4.3 培养基和试剂4.3.1 生理盐水成分：氯化钠 8.5g蒸馏水 1000mL制法：将氯化钠（ 8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管 10mL,12120min 高压灭菌。4.3.2 营养琼脂4.4 检验程序细菌总数检验程序如下：编号：ZQCDC/ZY04作 业 指 导 书第 2 页 共 3 页第 1 次修订公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定操作规程 实施日期：2011 年 5 月 1 日
11、振摇36148h4.5 操作步骤4.5.1 采样方法4.5.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。4.5.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂沫 50cm2，即 1-1.5cm 高处一圈（口唇接触处） 。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入 10ml 生理盐水内，4h 内送检。4.5.2 检验方法4.5.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为 1：10 稀释液。4.5.2.2 以无菌操作，吸取 2ml 检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿 1ml。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取 1ml 加到 9ml 灭菌生理盐水中，混匀，此液为 1：100 稀释液。每个稀释
12、度做两块平皿。4.5.2.3 将已融化冷至 45左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，并立即旋摇平皿。冷凝后放 361培养基培养 48h.4.6 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查为防遗漏，在记下平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以 2，所得结果代表全皿菌落数。实际公用茶具菌落数，按式（1）计算:a=b.n/50式中：a细菌总数，cfu/cm 2b平均菌落数c稀释倍数。4.7 菌落计数的报告4.7.1 选择平均菌落
13、在 30300 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告检样各 1ml 加入二块菌平皿菌落计数报告编号：ZQCDC/ZY05作 业 指 导 书第 1 页 共 2 页第 1 次修订公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定 实施日期：2011 年 5 月 1 日1、目的依据 GB/T18204.22000 公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。2、运用范围本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。3、责任使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内
14、容4.1 定义细菌总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH 值、需氧性质等） ，25cm 2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，公用毛巾、床上卧具消毒效果的判定和评价提供依据。4.2 仪器见 GB/T18204.2-2000 中第 4 章4.2.2 培养基和试剂见 GB/T18204.2-2000 中第 5 章4.2.3 检验程序见 GB/T18204.22000 中第 6 章4.3 操作步骤4.3.1 采样方法
15、4.3.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具4.3.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉试子，在毛巾、枕巾对折后两面的各面各2.5cm2(5cm5cm)面积范围；床单、被单在上下两部各 25cm2面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉试子放入 10mL 生理盐水内，4h 内送检。4.3.2 检验方法4.3.2.1 将放有棉试子的试管充分振摇。此液为 1：104.3.2.2 以无菌操作，吸取 2mL 检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿 1mL.如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取 1mL 加到 9mL 灭菌生理盐水中，混匀，此液为 1：100 稀释液。每个稀释度做
16、两块平皿。4.3.2.3 将已融化冷至 45左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15mL,并立即旋摇平皿。冷凝后放入 361培养箱培养 48h.编号：ZQCDC/ZY05作 业 指 导 书第 2 页 共 2 页第 1 次修订公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定 实施日期：2011 年 5 月 1 日4.4 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以 2，所得结果代表全皿菌落数。公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式（1）计算：m=k.n/2式中：m-细菌总 cfu/25cm2k-稀释倍数；n-平均菌落数4.5 菌落数报告方式见 GB/T18204.2-2000 中第 9 章作 业 指 导 书编号：ZQCDCZY02-05公共场所微生物学检验操作规程起草:东晓辉 2011 年 5 月 1 日审核:包图雅 2011 年 5 月 1 日批准:陈玉柱 2011 年 5 月 5 日
