1、,月季组织培养,组员：梁青青 潘芳敏 李梅娇 王珊 指导老师：赵鹂老师,目录,（一）：培养意义 （二）：实验原理 （三）: 实验步骤1 ：初代培养2 ：继代培养 （四）: 问题与讨论,一、培养意义,月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用 。,二、实验原理,细胞的全能性：细胞具有全套
2、遗传物质。能够发育成完整植株的能力。 激素调控理论：当细胞分裂素和生长素的比值大时，诱导芽的产生；当比值小时，诱导根的产生；一样时，诱导愈伤组织的形成。,（一）无菌培养的建立 （1）选材 选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。 （2）培养基的配制 整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.31.Omg。,（3）清洗外植体 采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干后，放置在小木板上，用刀
3、切成23厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上。 （4）消毒与接种 在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌2530分钟，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要23周。,（5）培养 培养温度21最好，最高不超过25，有昼夜温差，光照1012小时/天，光强8001200LX。,（二）继代增殖 （1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.01-0.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗
4、糖30克 （2）5周后 ，所培育的月季成倍的增加。 （3）每56周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成12节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。,（4） 壮苗培养 对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。培养条件。光照1012小时/天，光强8001800LX，温度2023，最高242
5、6。,（5）生根与移栽 月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以23厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。 （a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。,（b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度23厘米46厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1的百菌清、多菌灵或甲基托布津
6、等喷雾保苗，能显著提高成活率。 （c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。46周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经46周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花。,（d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐渐由0.1提高到0.3左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS培养液等，通常每710天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾
7、，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。,（四）问题与讨论,初代培养外植体的褐变：褐变是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活而使细胞的代谢发生变化。在褐变过程中产生醌类物质，他们多呈褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响从接种的外植体的一种现象。 减轻褐变现象发生的方法： （1）合适的培养基。降低无机盐浓度和细胞分裂素浓度，但蔗糖浓度不能降低。 （2）使用抗氧化剂PVP半光氨酸 （3）使用吸附剂活性炭，0.1%0.5% （4）连续转移,继代培养的材料的玻璃化 玻璃化现象：当植物不断进行离体培养繁殖时，培养物会呈半透明水壮的现象。 产生的原因：湿度太大，光照水平太低；培养细胞细胞分裂素水平较高。 解决方法： （1）增加光照；降低培养温度；增加通风CO2浓度。 （2）降低培养基中细胞分裂素含量。,over,
