1、基因敲除三大技术对比 技术名称 优势 局限性 可提供服务类型基于胚胎干细胞的同源重组技术成熟、可靠、精细是目前为止唯一一个可以满足所有要求的打靶技术1）需要 ES 细胞，目前只有小鼠有高效的 ES 细胞，其它模式动物的 ESC 还不能实现大规模应用。2）周期长、工作量大、费用相对比较高1）全基因敲除模式小鼠 2）条件性基因敲除模式小鼠3）先全敲除再条件性敲除模式小鼠 4）基因敲入模式小鼠 5）ROSA 位点定点转基因TALEN 技术 基因敲除效率高，速度快，可实现多物种基因敲除基因敲入效率较低，多基因敲除困难，系统构建相对复杂，存在脱靶风险1）全基因敲除大/小鼠 2）全基因敲除细胞系EGE 系
2、统 基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，系统构建简单存在脱靶风险，但通过选择合适的 sgRNA 可以有效降低脱靶率，In vivo 脱靶可通过传代去除1）全基因/ 条件性基因敲除大/ 小鼠 2）全基因/ 条件性报告基因敲除/敲入大/小鼠3）CRISPR/Cas9 粒构建 4）细胞系敲除/敲入免疫类B-NSG小鼠： Biocytogen-NOD-SCID-IL2rg B-NSG 小鼠是 NOD 遗传背景，Prkdc 和 IL2rg 双基因敲除的小鼠，是目前国际公认的免疫缺陷程度最高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。 基本特征 NOD（non-obese diab
3、etes）遗传背景：自发 I 型糖尿病；其巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱；先天免疫系统，如补体系统和树突状细胞功能降低。 Prkdcscid ：Prkdc（protein kinase DNA-activated catalytic）基因突变，小鼠的功能性T 和 B 细胞缺失 ，淋巴细胞减少，表现为细胞免疫和体液免疫的重度联合免疫缺陷（ severe combined immune deficiency, scid）。Il2rgnull： Interleukin-2 受体的 gamma 链（IL-2R c，又称 CD132）位于小鼠 X 染色体上，是具有重要免疫功能的细胞因子 Il2、Il-4、
4、Il-7、Il-9、 Il-15 和 I-21 的共同受体亚基，该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是 NK 细胞的活性几乎丧失。B-NSG 小鼠：综合了 NOD-SCID-IL2rg 背景特征，具有重度免疫缺陷表型，无成熟 T 细胞、B 细胞和功能性 NK 细胞，细胞因子信号传递能力缺失等。非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。 优点 迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；与 NOD-scid 小鼠相比寿命更长，平均长达 1.5 年；对人源细胞和组织几乎没有排斥反应；少量细胞即可成瘤，依赖于细胞系或细胞类型；无 B 淋巴细胞泄漏。成功案例小鼠脾脏流式分析图 ：主要应用领域
5、 人源细胞或组织移植 肿瘤和肿瘤干细胞研究ES 和 iPS 细胞研究造血和免疫学研究人类疾病感染模型研究IL17-EGFP knockin mice Catalog number:BCGIM-0001 Name：C57BL/6-Il17atm1BcgenMouse strain：IL17EGFP knockin miceGene common name ：Interleukin 17A, IL17A,IL17AChromosome ：Chromosome 1Allele Type ：Targeted (Knockin)Strain of Origin：C57BL/6JES Cell Line Strain：C57BL/6Expressed Gene：EGFP, Enhanced Fluorescent ProteinNote：DNA fragment containing IRESEGFPSV40polyA signal sequence was inserted downstream of the stop codon of theinterleukin 17A (IL17A) gene.疾病模型类
