1、油 脂 的 检 验 与 分 析粗蛋白质的测定（凯氏半微量定氮法）测定原理 凯氏法的基本原理是将含有蛋白质的样品与浓硫酸共热使其分解，其中氮元素变成铵盐。再经浓碱液作用，放出的氨气经硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定硼酸溶液所吸收的氨。计算出试样含氮量，乘以相关的蛋白质换算系数，即得打蛋白质的含量。消化：蛋白质与浓硫酸混合加热，蛋白质被炭化分解，其中碳被氧化成二氧化碳，所含的氮则转变成硫酸铵残留于消化液中。有机物（含 N、C、H、O、P、S 等元素）+H 2SO4 CO2 (NH 4)2SO4H 3PO4SO 2SO 3由于上述反应进行的很慢，消化需要很长时间，加入催化剂可加速反应。硫酸铜是备用的催化
2、剂，硫酸钾能提高硫酸的沸点，常将它们混合使用，起加速氧化、促进有机物分解的作用。蒸馏：消化所得的硫酸铵加碱蒸馏，氨就被释放出来。(NH4)2SO4 2NaOH2 NH 3H2O Na2SO4NH3H2ONH 3H 2O生成的氨用硼酸溶液吸收。硼酸吸收氨后，指示剂颜色变化，再用盐酸滴定，直至恢复到原来的氢离子浓度为止，盐酸与样品中氨是等摩尔反应。2NH34 H 3 BO3(NH 4)2 B 4O75H 2O(NH4)2 B 4O72 HCl 5H 2O 2NH 4Cl 4H 3 BO3由于各种蛋白质的含氮量通常为 16左右，将含氮量乘以蛋白质系数，即为粗蛋白质含量。试剂 浓硫酸过氧化氢水混合液（
3、231） 。在 100mL 水中缓慢加入浓硫酸 1200mL，冷却后加入 30过氧化氢 300mL，混匀备用，此液存放阴凉处可保存一个月。混合催化剂。10g 硫酸铜（Cu SO45H2O） 、100g 硫酸钾、0.2g 硒粉，在研钵中研细， 2通过孔径 0.45mm 筛，混匀后备用。 40g/100mL 氢氧化钠溶液、2硼酸溶液、0.01mol/L 3盐酸溶液。 甲基红乙醇溶液：称取 0.1g 甲基红置于研钵中，加入少许 95乙醇，研磨 4溶解后加入 75mL95乙醇。 次甲基蓝乙醇溶液：0.1g 次甲基蓝溶于 80mL95乙醇中， 5临用时将以上两液按 2：1 比例混合即成。在酸域呈紫红色，
4、PH5.5 时无色，在碱域呈绿色。仪器 50mL 凯氏烧瓶、1000mL 圆底烧瓶、100mL 锥形瓶、5mL(刻度 0.01mL)微量滴定管、50mL 容量瓶、5mL 移液管、凯氏蒸馏装置。操作方法 消化。用长条光滑纸称取试样 0.20.3g，精确到 0.0001g（约含粗蛋白 1质 1030mg）直接送入凯氏烧瓶底部，加混合催化剂 1g，同时加入硫酸过氧化值水混合液 35mL，稍加振摇，斜置于电炉上。在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，切勿使瓶中泡沫超过瓶肚的 2/3，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。直至消化液呈浅蓝绿色的透明状时再继续加热沸腾 10min，取出，待消化液冷
5、却至室温后，加水至 1020mL。溶液温度降到室温后，将消化液移入 50mL 容量瓶中，并用少量水将凯氏烧瓶冲洗 34 次，洗涤液一并移入容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。蒸馏。凯氏微量蒸馏装置它是由蒸汽发生器、反应瓶、及冷凝管等组成，在大烧瓶 28（容量 1000 mL）中加入蒸馏水 400mL 和少量碎玻璃片，加 5 滴混合指示剂，加几滴酸液，使水呈紫红色，盖紧瓶塞，连接 4、1、2 并检查有无漏气。量取 30mL2硼酸溶液，注入（100mL）三角瓶 3 内，作为承接器，加混合指示剂 12 滴（溶液呈紫红色） ，置于冷凝管 2 下面，使管尖端插入硼酸溶液 1cm 深处。用 5mL 移液管
6、吸取 5mL（V）试样稀释液，由漏斗 5 注入蒸馏瓶 1 内，再倒入蒸馏水 10mL 冲洗漏斗 5。接着量取 40g/100mL 氢氧化钠溶液 10mL，由漏斗 5 注入蒸馏瓶 1 内，再用 25mL 水冲洗漏斗 5，旋紧活塞，此时蒸馏瓶1 内溶液总体积应不超过容积的一半。打开电炉加热烧瓶 8，打开簧夹 7，关闭活塞 6，使蒸汽通过回流管 4 进入蒸馏瓶 1 再由蒸馏瓶 1 经冷凝管 2 而流入三角瓶 3，待三角瓶 3 内的溶液呈绿色时，开始记录时间，经 23min 后,将三角瓶 3 放低，使冷凝管 2 下端离开液面，继续蒸馏 1min，然后用少量无 CO2蒸馏水冲洗冷凝管 2 下端，蒸馏即告
7、结束。蒸馏结束后，旋紧簧夹 7 断绝蒸汽。这时由于回流管 4 内蒸汽压立即降低，所以蒸馏瓶1 内的液体则全部吸入回流管 4 内。然后打开漏斗 5 下的簧夹，注入蒸馏水 4050mL 于蒸馏瓶 1 内，关闭漏斗 5 下的簧夹，打开簧夹 7，通入蒸汽加热洗涤蒸馏瓶 1，再断绝蒸汽，使洗涤回流至回流管 4 中，打开活塞 6，将回流管 4 中废液弃去，关闭活塞 6，为下次蒸汽做好准备。滴定。用 0.01mol/L 盐酸标准溶液滴定三角瓶 3 中的吸收液至出现淡紫色为止。记录 3所消耗盐酸标准溶液的体积（V 1） 。空白试验除不加试样外，消化、蒸馏、滴定操作与样品相同。结果计算 粗蛋白质的干基含量按下式计算：（V 2V 1）c0.01406.25W（） 100VmV式中 V2-滴定试样时所需标准盐酸溶液的体积， mL；V1-滴定空白时所需标准盐酸溶液的体积， mL；c-盐酸标准溶液浓度，mol/L；m-试样的质量，g；V-试样分解液总体积，mL ；V-试样分解液蒸馏用体积， mL；0.0140-与 1.00mL 盐酸标准溶液c（HCl）1.000mol/L相当的以克表示的氮的质量。6.25-氮换算成蛋白质的平均系数。双实验结果允许差：粗蛋白质含量在 15以下时，不超过 0.2；粗蛋白质含量在 15以上时，不超过 0.4。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后一位粗蛋白质（）
